HPLC法同时测定复方氨酚愈敏口服溶液中三种组分的含量
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摘 要：目的：建立hplc法同时测定复方氨酚愈敏口服溶液中愈创木酚磺酸钾、对乙酰氨基酚、咖啡因含量的方法。方法：以FL2200-II高效液相色谱仪，采用Ultimate XB-C18色谱柱，流动相50mM磷酸二氢钾溶液（含1%三乙胺，用磷酸调节PH为3.0）-甲醇（84：16），检测波长210nm，流速1.0mL/min。结果：愈创木酚磺酸钾、对乙酰氨基酚、咖啡因分别在6-120μg/mL（R2=0.9996）、6-120μg/mL（R2=0.9996）、5-100μg/mL（R2=0.9999）范围内线性良好，平均含量为0.66%，0.97%，0.70%，平均加标回收率为101.5%，99.2%，98.1%。结论：方法简便，准确度高，重现性好，可应用于愈创木酚磺酸钾、对乙酰氨基酚、咖啡因的含量测定。
关键词：HPLC法 复方氨酚愈敏口服溶液 愈创木酚磺酸钾 对乙酰氨基酚 咖啡因
复方氨酚愈敏口服溶液为复方制剂，其成份为愈创木酚磺酸钾、对乙酰氨基酚、咖啡因等，其中愈创木酚磺酸钾为刺激性祛痰药，具有促进支气管分泌，使痰液便稀易于咳出，同时兼有微弱的抗炎作用[1]；对乙酰氨基酚为苯胺类解热镇痛药，具有良好的解热镇痛作用[2]；
咖啡因本省就具有收缩头部血管，缓解头痛的作用，对乙酰氨基酚具有协同效果，可促进对乙酰氨基酚的吸收，增强镇痛疗效[3]。
常见对这三种组分的含量分析方法为气相色谱法[4]、分光光度计法[5-6]、高效液相色谱法[7-10]，但未见对复方氨酚愈敏口服溶液中的三种组分的检测分析相关报道。因此实验采用HPLC法，同时测定复方氨酚愈敏口服溶液中的愈创木酚磺酸钾、对乙酰氨基酚、咖啡因的含量，结果表明方法可使上述三个组分实现良好的分离与分析，并且简便准确， 重复性好，可作为复方氨酚愈敏口服溶的质量控制和质量研究。
一、仪器与试剂
FL2200-II高效液相色谱仪（浙江福立分析仪器有限公司），色谱柱为Ultimate XB-C18/4.6×250mm， 5μm（月旭材料科技（上海）有限公司）；HS2060超声波清洗器（浙江福立分析仪器有限公司）；JA2004型电子分析天平（上海雷韵公司）。
甲醇（色谱纯，美国进口）；水为超纯水；磷酸（优级纯，国药集团）；磷酸二氢钾、三乙胺（分析纯，国药集团）；
标准品：愈创木酚磺酸钾、对乙酰氨基酚、咖啡因（国家标准物质研究中心，含量均≥99.9%）；
样品：复方氨酚愈敏口服溶液（海南三风友制药有限公司，市售）。
二、方法与结果
1.标准溶液制备
精密称取对乙酰氨基酚标准品60mg，置50mL量瓶中；取愈创木酚磺酸钾标准品30mg，咖啡因标准品25mg，分别置于25mL容量瓶中，加水使溶解，并稀释至刻度，摇匀作为储备液。精密称取对乙酰氨基酚储备液20mL，愈创木酚磺酸钾储备液5mL，咖啡因储备液3mL，置于200mL容量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，作为混合标准品溶液，即得。
2.供试品溶液的配制
精密量取某复方氨酚愈敏口服溶液1g，置100mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，摇匀，以0.45μm微孔滤膜滤过，作为供试品溶液，即得。
3.色谱条件
色谱柱为Ultimate XB-C18/4.6×250mm，5μm，流动相为50mM磷酸二氢钾（含1%三乙胺，用磷酸调节PH为3.0）-甲醇=84：16，流速为1.0 mL/min，检测波长为210nm，柱温35℃，进样量20μL。复方氨酚愈敏口服溶液中三种组分色谱图见图1。
图1 三种组分标准品（A）和某样品（B）的HPLC 图
1.愈创木酚磺酸钾；2.对乙酰氨基酚；3.咖啡因
4.精密度试验
精密吸取同一混合标准品溶液20μL，按上述色谱条件，连续进样6次，测定愈创木酚磺酸钾、对乙酰氨基酚、咖啡因峰面积值， 计算RSD分别为0.35%，0.28%，0.09%。结果表明仪器精密度良好。
5.线性关系
分别精密吸取标准品溶液0.5，1.0，2.0，4.0，6.0，8.0mL置10mL量瓶中， 以流动相稀释至刻度，摇匀， 得不同浓度的混标溶液；分别精密吸取20μL按上述色谱条件进样测定色谱峰面积，以标准品浓度（ug/mL）为横坐标， 峰面积值为纵坐标， 进行线性回归。结果表明各成分在各自进样范围内线性关系良好， 见表1。
表1 三种组分的线性关系
6.稳定性试验
取同一供试品溶液，于上述色谱条件下，分别在0，1，2，4，8，12h后进样，测得在12 h内愈创木酚磺酸钾、对乙酰氨基酚、咖啡因峰面积，计算其RSD分别为1.0%，1.5%，0.9%，表明供试品溶液在12h内稳定。
7.样品含量重复性试验
精密称取同一样品6份，照上述供试品制备方法制备，按上述色谱条件下进样。测得愈创木酚磺酸钾、对乙酰氨基酚、咖啡因的平均含量为0.66%，0.97%，0.70%；RSD分别为0.36%，0.20%，0.62%。结果表明样品含量测定重复性良好。
8.加标回收试验
取某复方氨酚愈敏口服溶液，称取9份，每份为0.2g，每三份为一组，依次加入混合标准品溶液第一组4 mL，第二组加入5 mL，第三组加入6 mL，后以流动相溶解稀释定容于25mL容量瓶中，按上述色谱条件下分析。实验所得创木酚磺酸钾、对乙酰氨基酚、咖啡因平均加标回收率为101.5%，99.2%，98.1%；RSD分别为1.03%，0.88%，1.56%。
三、讨论
1.检测波长的选择
分别对愈创木酚磺酸钾、对乙酰氨基酚、咖啡因进行190-700nm全波长扫描，发现对乙酰氨基酚、咖啡因在210nm附近有最大吸收，而愈创木酚磺酸钾也会有较大吸收，确定210nm为检测波长。
2.流动相的选择
考察甲醇-水、甲醇-缓冲盐等流动相，实验表明在甲醇水体系中，峰形拖尾严重，即使添加不同比例的减尾剂三乙胺均无法改善，只有在甲醇-缓冲盐体系中，可以通过对有机系比例的调整和添加三乙胺，能实现良好的峰形和分离度，所以确定50mM磷酸取磷酸二氢钾（含1%三乙胺，用磷酸调节PH为3.0）-甲醇=84：16为实验流动相。
3.分析方法验证结果表明，HPLC法同时测定复方氨酚愈敏口服溶液中愈创木酚磺酸钾、对乙酰氨基酚、咖啡因含量，方法简便，准确度高，重现性好，可用于相关组分的含量测定。
参考文献
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作者简介；陈永根（1977-），女，汉族，河北石家庄人，（职称），工程师，主要从事气相、液相及微生物检验工作。