高效液相色谱法测定清脑降压片中黄芩苷的含量

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【摘要】 目的建立清脑降压片中黄芩苷的含量测定方法。方法 采用RP-HPLC法进行测定,色谱柱为Dikma C 18 (5μm,250 mm×4.6 mm),流动相为甲醇-水-磷酸(47∶53∶0.2),检测波长为280nm,柱温:25℃。 结果 清脑降压片中黄芩苷的的线性范围为3.28～52.48μg•ml-1,r=0.9999,平均回收率为 95.3%,RSD值为1.22%。结论该方法简便,结果准确,重现性好,可作为清脑降压片的质量控制方法。

【关键词】 清脑降压片;黄芩苷;高效液相

The highly effective liquid phase determination qingnao jiangya tablet of Baicalin’s content

【Abstract】 Objective Establishes with the opposition highly effective liquid chromatography (RP-HPLC)determination qingnao jiangya tablet of Baicalin’s content method. Methods Uses RP-HPLC to dectect, chromatograph Volume was Dikma C18 (5μm,250 mm×4.6 mm), Mobilephase:Methanol-water-Phosphoric acid (47:53:0.2); Dectectwavelength is 280nm;The temperature of chromatopraph volume was 25℃. Results The Baicalin linear scope 3.28～52.48μg/ml (r=0.9999), (r=0.9999) The average recoveries were 95.3%, and the RSD were 1.22%.Conclusion These methods can be used for quality control of qingnao jiangya tablet.

【Key words】 Qingnao jiangya tablet; Baicalin; HPLC

作者单位:418000湖南省怀化市中医院

清脑降压片由黄芩、夏枯草、槐米、牛膝、水蛭等十三味中药组成,具有平肝潜阳之功效。用于肝阳上亢所至的眩晕等证[1]。而本品现行的检验标准中[2]对黄芩苷的质量控制尚无定量。为更好的控制本制剂质量,本文参照文献并适当改进[3-6],采用HPLC法测定控制该品种中黄芩苷的含量。

1 仪器与试液

a) LC-10ATVP高效液相仪,岛津SPD-10AVP紫外检测器,浙大N3000工作站(日本岛津),AB135-S电子分析天平(瑞士梅特勒);湘仪AEU-210电子分析天平,岛津紫外UV-2401(日本岛津)。清脑降压片(伊业有限公司,规格:0.55 g/片,批号:20090101、20090208、20090318),黄芩苷对照品(中国药品生物制品检定所,批号:0796-200208),甲醇(色谱纯,TEDIA),磷酸(色谱纯,TEDIA),乙醇(分析纯,湖南师大试剂厂),水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱:Dikma C18(5μm,250 mm×4.6 mm),流动相:甲醇-水-磷酸(47∶53∶0.2); 检测波长为280nm;流速:1.0 ml/min;柱温:25℃;进样量:10ul。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液 精密称取经五氧化二磷干燥24 h的黄芩苷对照品6.56 mg,置于100 ml量瓶中,加甲醇溶解并定容至刻度,摇匀,即得65.6 ug/ml储备液。

2.2.2 供试品溶液 取本品20袋,研细,取供试品0.8 g,精密称定,置100 ml锥形瓶中,加70%甲醇40 ml,称定重量后置水浴上加热回流1.5 h,取出,冷却至室温,滤过,滤液至100 ml量瓶中,用少量70%甲醇分次洗涤容器和残渣,洗液滤入同一量瓶中,加70%甲醇至刻度,摇匀,即得。

2.2.3 阴性对照液 取除黄芩以外的其他十二味药材按处方制备成缺黄芩样品,再按“2.2.2”项下方法制备。

2.3 系统适用性试验 分别取对照品溶液、样品溶液、阴性对照液注入色谱仪,记录色谱图,从图1中可以看出,黄芩苷与其相邻峰完全分离,阴性对照色谱图在对应的黄芩苷峰位置处无干扰峰,即表明其他组分对测定无干扰。黄芩苷峰与其他组分峰的分离度都大于1.5。理论板数按黄芩苷计算应不低于2500。对照品液相色谱图见图1 A,样品液相色谱图见图1 B;阴性对照色谱图见图1 C。

图1 黄芩苷色谱图

2.4 标准曲线的制备 精密吸取储备液0.5,1.0,2.0,4.0,8.0 ml分别置10 ml量瓶中,加甲醇定容至刻度,摇匀,即得系列标准溶液。分别取系列标准溶液10ul进样,记录色谱图,由峰面积(Y)(n=3)对响应的浓度(X)直线回归,黄芩苷回归方程为:Y=57468.2X-1152.6,r=0.9999,表明黄芩苷在3.28～52.48μg/ml的浓度范围内线性相关。

2.5 精密度考察 取同一对照品溶液连续进样6次,进样量10μL, 测定峰面积,计算RSD值为0.98%。结果表明仪器与色谱条件具有良好的精密度。

2.6 重复性试验 取同一批号(批号:20090101)的供试品6份,按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,分别精密吸取各供试品溶液10μl注入高效液相色谱仪,测定峰面积,结果黄芩苷含量RSD为0.95%。

2.7 稳定性试验 取同一供试品溶液(批号:20090101),在0、2、4、6、8、10 h分别进样10μL,依法测定,结果6次测定的黄芩苷峰面积RSD为1.12%,表明样品溶液在10 h内相对稳定。

2.8 回收率试验 精密称取已知含量的样品(批号:20090101)0.5 g五份置蒸发皿中,精密加入1.22 mg/ml的对照品溶液2 ml(取黄芩苷对照品122.1 mg置于100 ml量瓶中,加甲醇溶解并定容至刻度,摇匀,即得),按“2.2.2”项下方法制备。按2.1项下分别进样10ul,记录色谱图,计算黄芩苷的回收率。结果见表1。

2.9 样品含量测定 将3批不同批号的清脑降压片按2.2.2方法制备,进样10μl,测定峰面积,按外标法计算含量。结果见表2。

根据以上3批样品的检测结果及接合提取回收率清脑降压片中黄芩苷的含量限度为不低于2.10 mg/片。

3 讨论

RP-HPLC在选择检测波长时,经紫外-可见光分光光度计扫描,黄芩苷在254、280、300、321 nm都有较大的吸收。在做高效液相时,曾选用254、300、321 nm作为其检测波长,黄芩苷在图谱中不能同时成为主要吸收峰,且其他物质也有较大的吸收而干扰黄芩苷的测定,而在280 nm处,黄芩苷和其他的物质均能实现较好的分离,且黄芩苷具有较强的吸收,故选280 nm做为检测波长。

黄芩苷为清脑降压片中主要成分。本文通过以上试验的方法学验证,采用HPLC法测定清脑降压片中黄芩苷的含量,对该制剂的质量控制,有重要意义。

参 考 文 献

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典一部. 一部,2005:620

[2] 国家药品监督管理局.化学药品地方标准上升国家标准第十六册,2003:278.

[3] 许国兵,刘志武.高效液相色谱法测定双黄消炎片中黄芩苷和盐酸小檗碱的含量.中南药学,2008,6(4):426-427.

[4] 国家药典委员会.中华人民共和国药典一部.一部,2005:212.

[5] 李慧.高效液相色谱法测定蒲地蓝消炎片中黄芩苷含量. 中南药学,2008,6(5):635-636.

[6] 吴玲,都宁,唐启令.HPLC法测定清热消炎合剂中黄芩苷含量.中南药学,2004,2(4):424-426.