HPLC测定萘敏己锌滴眼液盐酸萘甲唑啉和马来酸氯苯那敏含量

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摘要：目的建立hplc测定萘敏己锌滴眼液中盐酸萘甲唑啉和马来酸氯苯那敏含量和有关物质。方法使用C,8柱，庚烷磺酸钠溶液，甲醇(60：40)为流动相，检测波长230nm。结果盐酸萘甲唑啉浓度在5，80-58.00μg／mL之间与峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 9，π=5)，最低检出限0.20 ng，平均回收率99.79％，RSD=0.23％；马来酸氯苯那敏浓度在10.60～212.00μg／mL之间与峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 9，n=5)，最低检出限0.72ng，平均回收率99.95％，RSD=0.65％。结论此法准确度、精密度好，可有效测定萘敏己锌滴眼液中盐酸萘甲唑啉和马来酸氯苯那敏的含量及有关物质。

关键词：萘敏己锌滴眼液；盐酸萘甲唑啉：马来酸氯苯那敏：含量：高效液相色谱法

中图分类号：R988.1　文献标识码：A 文章编号：1672-979X(2010)07-0238-04

萘敏己锌滴眼液是含有盐酸萘甲唑啉、马来酸氯苯那敏、氨基己酸和硫酸锌的复方滴眼液，临床上用于防治视疲劳(如因烟雾、灰尘、游泳、紫外线照射、戴角膜接触镜、电脑综合征等引起的视疲劳和结膜充血)，效果明显且使用安全。我国尚未上市，现已完成临床研究。我们建立了用HPLC测定该产品中盐酸萘甲唑啉和马来酸氯苯那敏含量及有关物质，方法简便，准确度高，重现性好，结果令人满意。1仪器与试药

Waters高效液相色谱仪，配有2996 DAD检测器，色谱柱Waters Symmetryshidd C18(3.9mm×l50mm，5μm)。

盐酸萘甲唑啉对照品、马来酸氯苯那敏对照品、萘敏己锌滴眼液，均由山东博士伦福瑞达制药有限公司提供。甲醇为色谱纯，其他试剂为分析纯，水为纯化水。

2　溶液制备

2.1　对照品溶液

精密称取马来酸氯苯那敏、盐酸萘甲唑啉对照品各25mg，分别置25mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取马来酸氯苯那敏溶液2.5mL及盐酸萘甲唑啉溶液0.5mL，置同-25mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2　供试品溶液

样品原液为供试品溶液。

3　色谱条件

色谱柱：Waters Symmetryshield C18(3.9mm×150 mm，5μm)；柱温35℃；流速1.0mL／min)流动相：庚烷磺酸钠溶液(庚烷磺酸钠1.0g，加水适量溶解，用水稀释至2000mL，摇匀)一甲醇(60：40)：检测波长230nm；进样量20μL。

此条件下，盐酸萘甲唑啉和马来酸氯苯那敏与杂质均获得基线分离，保留时间：盐酸萘甲唑啉约3.7min，马来酸氯苯那敏约7.3min。对照品、供试品及样品高温破坏后测定的HPLC图谱见图1。

4　方法及结果

4.1　线性关系考察

4.1.1　盐酸萘甲唑啉线性实验 精密称取盐酸萘甲唑啉对照品29.00mg，置25mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取0.25，0.50，1.00，1.50，2.50mL置5个50mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，备用。取上述溶液各20μL注入液相色谱仪，记录色谱图及峰面积。得线性回归方程A=9122.132 8+67 074.672 7C，r=0.999 9，n=5。盐酸萘甲唑啉浓度在5.80～58.00μg／mL范围内与峰面积呈良好的线性关系。

4.1.2　马来酸氯苯那敏线性实验精密称取马来酸氯苯那敏对照品26.50mg，置25mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取0.1，0.5，1.0，1.5，2.0mL置10mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，备用。精密量取上述溶液各20μL注入液相色谱仪，记录色谱图及峰面积。得线性回归方程A=-35038.225 3+24416.613 2 C，r=0.9999，n=5。马来酸氯苯那敏浓度在10.60～212.00μg／mL范围内与峰面积呈良好的线性关系。

4.2　精密度实验

4.2.1　盐酸萘甲唑啉精密度实验 精密量取线性实验中浓度23.2μg／mL溶液20μL注入液相色谱仪，连续进样6次，记录色谱图及峰面积。RSD=0.15％，精密度良好。

4.2.2　马来酸氯苯那敏精密度实验精密量取线性实验中浓度106.0μg／mL溶液20μL注入液相色谱仪，连续进样6次，记录色谱图及峰面积。RSD=0.15％，精密度良好。

4.3　检出限的测定

4.3.1　盐酸萘甲唑啉检出限测定精密量取线性实验中浓度5.80μg／mL溶液1.0mL，置100 mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，取5μL注入液相色谱仪，记录色谱图，计算即得。最低检出限0.20ng，最低检出限度0.05％。

4.3.2　马来酸氯苯那敏检出限的测定精密量取线性实验中浓度106.0μg／mL溶液0.25mL，置100mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，取3μL注入液相色谱仪，记录色谱图，计算即得。最低检出限0.72ng，最低检出限度0.04％。

4.4　有关物质测定1％对照的精密度实验

4.4.1　盐酸萘甲唑啉有关物质测定1％对照的精密度实验精密量取线性实验中浓度23.2μg／mL溶液，稀释100倍，连续进样6次，每次20μL，记录色谱图及峰面积。RSD=0.24％，精密度较好。

4.4.2　马来酸氯苯那敏有关物质测定1％对照的精密度实验精密量取线性实验中浓度106μg／mL溶液，稀释100倍，取20 gL注入液相色谱仪，连续进样6次，记录色谱图及峰面积。RSD=0.15％，精密度良好。

4.5　稳定性实验

4.5.1　盐酸萘甲唑啉有关物质测定1％对照的稳定性实验取线性实验浓度23.2μg／mL溶液，稀释100倍，于配制后0，1，2，4，8 h进样20μL，记录色谱图及峰面积。RSD=0.25％，表明供试液在8h内稳定。

4.5.2　马来酸氯苯那敏有关物质测定l％对照的稳定性实验取上述线性实验中浓度106.0μg／mL溶液，稀释100倍，于配制后0，1，2，4，8h进样20μL，记录色谱图及峰面积。RSD=0.65％，表明供试液在8h内稳定。

4.6　回收率实验

对照品溶液：精密称取盐酸萘甲唑啉对照品25.12mg，置25mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀；精密称取马来酸氯苯那敏对照品24.95mg，置25mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀；分别精密量取2种对照品溶液0.5，2.5mL，置25mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，备用。

供试品溶液：精密称取盐酸萘甲唑啉对照品

16.18，16.25，16.35，20.26，20.55，20.75，24.66，24.75，24.83mg，分别置9个10mL量瓶中，加辅料溶液(阴性溶液)溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取1.0mL，分别置9个100mL量瓶中，再加入精密称取的马来酸氯苯那敏对照品7.98，8.01，8.13，10.05，10.13，10.02，12.22，12.14，12.29mg，加阴性溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，备用。

精密量取对照品溶液和供试品溶液各20μL注入液相色谱仪，记录色谱图及峰面积，测定结果见表1和表2。

盐酸萘甲唑啉平均回收率99.79％，RSD=0.23％：马来酸氯苯那敏平均回收率99.95％，RSD=0.65％，表明本法准确度好，适合作为含量测定方法。

5　样品测定

按“2.1”和“2.2”项制备对照品溶液和供试品溶液，精密量取各20μL，分别注入液相色谱仪，测定，以外标法计算含量，以1％对照峰面积法计算有关物质，结果见表3。

6　讨论

6.1　波长选择

取对照品溶液和供试品溶液各20μL，注入液相色谱仪，照高效液相色谱法(中国药典2005年版二部附录VD)测定。根据紫外吸收图谱，2种成分在220 nm波长处有最大吸收，但在HPLC图上，盐酸萘甲唑啉和马来酸氯苯那敏的峰高比约为4：1，差别较大；选择230nm作为检测波长，二者峰高比约为1：1，比较一致，测定误差小；此外，紫外图谱表明，230nm虽然不是最大吸收波长，但是吸收较强的波长，因此，我们选择230 nm作为检测波长。

6.2　流动相选择

本实验筛选了甲醇一辛烷磺酸钠溶液不同配比，乙腈，辛烷磺酸钠溶液(10：90)及甲醇一庚烷磺酸钠溶液(10：90)等作为流动相，结果均不理想。最终选择庚烷磺酸钠溶液一甲醇(60：40)作为流动相，得到较好的分离和峰纯度。

6.3　本方法的意义

本色谱条件所用色谱柱为常用柱，流动相价廉易得，毒性小，配制简单，方法准确度、精密度、线性良好，适合作为测定本品含量的方法，同时可以测定有关物质。采用该方法既可对有关物质合并研究，也可单独研究，不同研究方式确定的有关物质标准不同，但均能控制产品质量。

盐酸萘甲唑啉和马来酸氯苯那敏可以完全与高温、酸、碱、光照、氧化条件下破坏产生的杂质分开，测定不受阴性溶液的干扰。

参考文献

[1]国家药典委员会，中国药典2005年版二部[M]，北京：化学工业出版社，2005：附录VD。