葡萄糖-6-磷酸异构酶与RF联合检测在类风湿关节炎中的诊断意义探讨

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【摘要】目的：探讨GPI抗原及RF联合检测在类风湿关节炎中的诊断价值。方法：采用横断面研究，110例RA患者，47例其他风湿性疾病患者，32例非风湿性疾病患者，用ELISA方法检测血清中的GPI抗原，免疫比浊法测RF，并比较GPI抗原、RF抗体及串联检测对于RA的敏感性和特异性，并分析两者之间的相关性。结果：GPI抗原、RF在RA组的检测结果明显高于非RA风湿性疾病组和非RA对照组，经t检验P

【关键词】类风湿关节炎；GPI抗原；类风湿因子

【中图分类号】R593.22；R446.11【文献标识码】A文章编号：1004-7484（2012）-05-1118-02类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是一种慢性进行性以关节病变为主的全身性自身免疫疾病，晚期可引起关节畸形及功能丧失，故RA的早期诊断很重要。类风湿因子（RF）滴度变化较大，诊断敏感性高而特异性差，不仅在RA患者中出现，在其他结缔组织疾病及健康老年人中都可检测到，这也限制了它的诊断作用。近来亦发现葡萄糖-6-磷酸异构酶(glucose-6-phosphateisomerase，G6PI/GPI)在RA病人血清和关节液中明显升高，有学者认为抗G6P抗体与RA发病有关。本试验通过ELISA法检测RA患者和非RA自身免疫性疾病患者及非风湿疾病患者血清中的GPI，观察其在各种疾病中阳性率及升高程度，探讨其对类风湿关节炎诊断意义。1.资料与方法

1.1资料：选取我院2008年2月-2011年4月确诊的110例RA患者，其中男35例，女75例，平均年龄46.5±16.5岁(20-75岁)；对照组非RA病人47例，其中男20例，女27例，平均年龄50.3±16.5（18-92岁）；非风湿性疾病对照组32例，平均年龄40.5±21.1(20-75岁)。3组之间年龄比较差异无统计学意义（P＞0.05）。

1.2GPI测定：采用GPI试剂，双抗体夹心酶联免疫吸附测定(ELISA)。标本分离血清，按1：10的稀释比例来稀释标本。每孔加100ul，同时加标准品和阳性对照和阴性对照。37度温育一小时后PBS洗板四次，拍板，再加入GPI酶标抗体，37度温育一小时，PBS洗板四次，柏板，加显色剂显色10分钟，终止液终止反应。在酶标仪490nm读板。以标准品浓度为纵坐标，吸光度值为横坐标，作直线回归。标本浓度通过吸光度来算出。GPI浓度临界值以正常人平均值加2标准差来计算。

1.3类风湿因子(rf)为上海景源公司提供，采用免疫比浊法在东芝40TF生化仪测定，RF>30U/ml为阴性。

1.4标本收集：采集空腹静脉血3ml，离心取血清，检测RF浓度，并取部分冻存-80℃冰箱保存，集中测定GPI浓度。

1.5统计学方法：采用SPSS13.0统计软件，计量资料以（χ±s）表示，各组之间比较使用方差分析。2.结果

2.1各组样本的GPI和RF统计结果：以0.21mg/L作为GPI阳性临界值，30mg/L作为RF阳性临界值。结果显示，RA组的GPI浓度值和阳性率显著高于非RA组风湿病对照组和非风湿性疾病组对照组(P

表1各组GPI、RF统计结果

组别例数GPIRF浓度值（mg/L）阳性率（%）浓度值（mg/L）阳性率（%）RA组1104.05±1.3571.8(79/110)125±2581.8%(90/110)非RA组470.20±0.1214.8（7/47）30±1027.6（13/47）非风湿病组320.12±0.09015±103.1(1/31) 2.2GPI抗原、RF诊断RA的灵敏度和特异度：110例RA患者中GPI抗原对RA诊断的灵敏度71.8%(79/110)，特异度91.1%（72/79），阳性预测值91.8%；RF对RA诊断的灵敏度81.8%(90/110)，特异度82.3%(65/79)，阳性预测值86.5%。GPI抗原和RF联合检测诊断RA的灵敏度和特异度分为串联检测和并联检测两种，串联检测是指必须GPI抗原与RF均为阳性，方能诊断RA，该法的灵敏度62.7%（69/110），特异度97.4%（77/79），阳性预测值为97.2%；并联检测是指GPI抗原与RF任意一项阳性，就可诊断RA，该法的灵敏度90.9%（100/110），特异度75.9%（60/79），阳性预测值84.0%。

2.3RA患者GPI抗原RF的相关性经Spearman相关性分析，RA患者GPI与RF具有相关性（r=0.615，P＜0.01），具体数据，（见表2）。

表2GPI与RF的相关性

项目敏感性(%)特异性(%)PPVNPVGPI71.891.191.869.9RF81.882.386.575.4GPI或RF90.975.984.085.7GPI和RF62.797.497.265.23.讨论

在以往类风湿关节炎诊断标准中，血清学指标只有类风湿因子（RF），但RF特异性差，它不仅在RA患者中出现，在其它结缔组织疾病及正常人群中也可检测到，这限制了其在RA中的临床应用。国内外学者进行长期研究，试图发现更敏感、更特异的血清学指标。葡萄糖6-磷酸异构酶(GPI)，广泛存在于细胞浆和细胞外液，尤其是关节腔内，由T细胞分泌，其主要功能是催化D-6磷酸葡萄糖转换成D-6磷酸果糖，是糖酵解和糖异生过程中的重要酶类。它除了具有酶活性外，还有细胞因子和生长因子活性［1］。Matsumoto等［2］用免疫组化的方法研究了GPI的定位分布，发现在各种组织的细胞内，GPI均匀分布，但在关节腔内，特别在软骨表面，有一层薄而清晰的GPI沉着线。在K/BxN自发性关节炎小鼠的关节腔内，GPI沉着线有显著增加，用抗IgG和补体抗体对连续切片的检测显示，IgG、补体和GPI沉积重叠。进一步的研究表明RA患者滑膜血管内皮细胞表达GPI明显增高，而在其他部位的血管内皮细胞中GPI表达不增高［3］。国内鲍春德等［4］研究也表明RA患者血清GPI浓度较其他风湿病患者及健康人显著增高，RA活动者较非活动者也有统计学差异。这些研究表明GPI和抗GPI抗体可能参与了RA的滑膜病变过程，GPI有可能作为RA新的标记物，在RA的临床诊断中发挥重要作用。

本实验结果表明，RA组GPI抗原含量显著高于非RA风湿病组和非RA疾病对照组；GPI与RF相比，灵敏度稍差而特异性更佳，特别是其PPV达到91.8%，是一个较为理想的RA诊断指标。串联检测GPI抗原和RF，虽然降低了灵敏度，但特异度大大提高，达到97.4%，对于疑难病例，能够提供更佳诊断参考。我们通过GPI与RF的相关性比较，结果可以看出两者互为影响因素，而且GPI抗原与RA活动性有关。因此，GPI是一种对RF有较高特异性新的诊断试验，其阳性预测值高，联合RF阳性预测值可进一步提高。GPI抗体有利于早期诊断，可能是RF现有诊断手段的有益补充，具有广泛的临床应用及研究前景。参考文献

［1］Tuoheti Y，Itoi E，Minagawa H，et al.Quantitative assessment of thinning of the subscapularis tendon in recurrent anteriordislocation of the shoulder by use of agnetic resonance imaging［J］.J Shoulder ElbowSurg，2005，14：11-5.

［2］Matsumoto I，MaccioniM，Lee DM，et al.How antibodies to a ubiquitous cytop lasmic enzymemay provoke joint specific autoimmune disease［J］.Nat Immunol，2002，3(4)：360-365.

［3］SchallerM，Burton D R，DitzelH J.Autoant ibodies to GPIin rheum atoidarth rit is：linkage b etw een an anim al m odel and hum and isease［J］.Nat Imm uno，2001，2(8)：746-753.

［4］鲍春德，叶萍，陈晓翔，等.血清中62磷酸葡萄糖异构酶抗原升高在类风湿关节炎中的意义探讨［J］.中华风湿病学杂志，2005，9(5)：277-279.