超声法提取猪苓总多糖的工艺研究

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[摘要] 目的：优选猪苓总多糖的最佳提取工艺。方法：采用苯酚-硫酸法测定总多糖的含量，以猪苓总多糖的含量为考察指标，对超声法提取猪苓多糖进行了优化研究。结果：最佳提取工艺为取猪苓饮片用14倍量的水超声提取3次，每次20 min，浓缩液的醇沉浓度为85%。结论：优选的工艺提取率高，稳定可行。

[关键词] 猪苓总多糖；超声提取；苯酚-硫酸法

[中图分类号]R284.2 [文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2008）04（b）-051-02

Study on the ultrasound extraction process of crude polycose in Polyporus umbellatus (Pers.) Fries

HE Si-huang

(Guangdong Food and Drug Vocational College, Guangzhou 510520, China)

[Abstract] Objective: To optimize the ultrasound extraction process of crude polycose in Polyporus umbellatus (Pers.) Fries. Methods: Using the content of polycose detected by the phenol-sulphuric acid method as the index to study the best extraction process. Results: The best process was that extracting for 3 timesusing 14 times water,and 20 min for each time. Conclusion: The extracting rate is high,and the process is stable.

[Key words] Polyporus umbellatus(Pers.) Fries; Ultrasound extraction process; Phenol- sulphuric acid method

猪苓为多孔菌科真菌猪苓Polyporus umbellatus (Pers.) Fries的干燥菌核，具有利水渗湿的功效，现代药理研究证明，猪苓多糖对人体免疫力和肝脏功能均有影响，还具有抗肿瘤的作用[1]。目前对猪苓总多糖的提取工艺研究报道很少，本实验以总多糖含量为指标，对超声法提取猪苓多糖进行了优化研究。

1 仪器与试药

754紫外可见光分光光度计(上海精密分析仪器厂)；WH-90A旋涡混合仪（上海振荣科学仪器公司）；6%苯酚（临时配制）；葡萄糖标准品（购自中国药品生物制品检验所）。猪苓药材经鉴定为猪苓Polyporus umbellatus(Pers.) Fries的干燥茎。

2 方法与结果

2.1 猪苓多糖的含量测定[2]

2.1.1 对照品溶液的制备取105℃干燥至恒重的无水葡萄糖标准品29.12 mg，加蒸馏水定容于250 ml容量瓶中，得到浓度为116.5 μg/ml的葡萄糖标准液。

2.1.2 猪苓总多糖样品液的制备取猪苓粗多糖制品加水溶解后定容于100 ml容量瓶中，摇匀，离心。精密取上清液6 ml，加6 mol/L HCl 5 ml，沸水浴加热60 min，冷后加1滴酚酞指示剂，用6 mol/L NaOH调至微红色，定量转移至25 ml容量瓶中，稀释至刻度，摇匀，离心，上清液备用。

2.1.3 最大吸收波长的确定分别取标准液和样品液各1 ml入试管中，各加6%苯酚试剂0.5 ml，摇匀，迅速滴加浓H2SO4 2.50 ml，混匀，放置5 min，冷至室温，同时做一试剂空白，在紫外分光光度计上于400~600 nm测定吸收度，结果标准品与样品均在496 nm处有最大吸收，故确定496 nm为测定波长。

2.1.4 标准曲线的制作分别加入浓度为116.5 μg/ml的葡萄糖标准液0.0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 ml于10 ml容量瓶中，各加水至刻度，再分别取1 ml对照品溶液各加6%苯酚0.5 ml，摇匀，迅速滴加浓H2SO4 2.50 ml，混匀，放置5 min，冷至室温，同时做一空白，在496 nm处测定吸收度，求得标准曲线的回归方程为：A=2.332×10-3+1.098×10-3C（r=0.999 2），结果表明在0~116 μg范围内吸收度与浓度呈线性关系。

2.2 提取工艺研究

2.2.1 提取溶剂对多糖得率的影响取猪苓干品经粉碎后，加10倍量的提取溶剂浸泡过夜，分别超声提取3次，每次15 min，提取液经纱布过滤后，离心，上清液浓缩至药液相对密度为1.05，加入乙醇至含醇量为85%，产生白色絮状沉淀，沉淀经离心后，分别用85%乙醇，无水乙醇洗涤3次后得猪苓粗多糖，分别重复3次实验，用苯酚-硫酸法测定多糖，多糖得率见表1。

从实验结果可知，蒸馏水做溶剂的提取率明显高于NaOH和HCl，故选用水作提取剂。

2.2.2 提取方法对猪苓多糖得率的影响取猪苓干粉各20 g，各加200 ml水浸泡过夜。分别采用超声提取和热水提取两种方法，合并提取液，测定多糖含量。其中超声法采用超声提取3次，每次20 min的工艺；热水提取采用加热水提取3次的工艺，结果见表2。

由实验结果可知，超声提取法比热水提取法更有利于提高多糖的得率，故选用超声提取法。

2.2.3 浸提条件对多糖提取率的影响[3]分别精密称取猪苓粗粉20.00 g，加200 ml 水浸泡过夜，以提取时间、提取次数、溶媒倍数、醇沉浓度作研究对象，按正交表L9(34)，即表3中所选取的4因素3水平条件进行超声提取，以多糖得率为指标，作正交试验，提取液过滤、浓缩至药液的相对密度为1.05，离心，醇沉后得白色絮状沉淀，沉淀经离心后，分别用85%乙醇和无水乙醇洗涤3次，得猪苓粗多糖，多糖含量用苯酚-硫酸法测定。结果见表4和表5。

由表5方差分析可知，A因素具有显著性意义，即提取时间有显著性意（PB>C>D，且以A2B3C3D3为较佳的工艺，结合直观分析与方差分析，选择A2B3C3D3为最佳工艺，即取猪苓饮片用14倍量的水超声提取3次，每次20 min，浓缩液的醇沉浓度为85%。

3 讨论

实验中用NaOH与HCl作提取剂，多糖提取得率较蒸馏水低。这是由于稀酸、稀碱易使猪苓多糖发生糖苷键断裂，使部分水解而减少了提取得率。

使用苯酚时应与铝片一起蒸馏后现配现用，每次使用苯酚的浓度应一致，否则将会影响实验结果。浓硫酸加入时，采用“缓慢沿壁加入浓硫酸，摇匀，静置一定时间”能得到稳定的实验结果。

[参考文献]

[1]张纪立,何锦丽.猪苓药理研究进展[J].时珍国医国药,2000,11(5):469-470.

[2]李亚芳,张晓华,孙国明.猪苓中总生物碱和多糖的含量测定[J].中国药事,2002,16(7):426-428.

[3]梅清华,励石寒,郑艳平,等.正交试验优选杏仁水超声提取工艺[J].中国药师, 2005,8(4):295-296.

（收稿日期：2008-01-15）

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