农药残留快速分析仪在蔬菜农残检测中的运用
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[摘 要] 本文介绍了用酶试剂法对蔬菜中有机磷类农药残留进行快速检测的技术。
[关键词] 酶试剂法 有机磷农药 农药残留 快速检测
我国土地辽阔，农作物品种丰富，农药的生产和使用量较大，而农药对人体、动物和环境的危害很大。食用含有高毒、剧毒的农药残留的食物会导致人、畜急性中毒事故，长期食用农药超标的农副产品，还可能引起慢性中毒，导致人体的神经麻痹以及呼吸系统损伤等，严重的甚至影响下一代。因此，加强农药残留监测尤为重要。
传统的农药残留分析方法主要有气相色谱法、液相色谱法、薄层色谱法及质谱联用等。这些方法测试灵敏、准确度高，但预处理较为烦琐，测试时间较长，且仪器昂贵，对仪器的使用条件和操作人员的要求也比较严格。而农药残留快速检测法可以把食品安全风险监测的关口提前，在蔬菜上市前快速判断出其农药残留是否超标，这样能防止许多农药中毒事件的发生，确保消费者的饮食安全。
本文旨在研究用农药残留快速分析仪（PR-203-6T）分析农药残留，该快速检测法的优点是检测时间短、操作简单，可以连续使用，携带方便，而且检测成本较低， 适合现场检测，可推广为普通检测点、检测站、农贸市场、超市及果蔬精加工企业接受和使用。
一、试验原理
农药残留快速分析仪采用酶抑制法，胆碱酯酶对底物分解反应的催化能力与其活性成正相关。而蔬菜中的农药对胆碱酯酶的活性起抑制作用，抑制程度的大小与农药的残留毒性成线性相关。因此，通过测试蔬菜样品与胆碱酯酶作用前后催化反应的速率变化，即可测试胆碱酯酶的活性变化，从而计算出抑制率，通过抑制率可以判断出样品中是否有高剂量有机磷类农药的存在。
二、仪器与试剂
1.仪器
仪器为厦门市信仪科技有限公司生产的PR-203-6T 型农药残留快速测试仪。此仪器有四个显示参数： “透光度”、“吸光度”、“透射比”、和“吸收比”；工作模式有：“单通道” 、“八通道”、“自动”四种，可以根据检测样品的数量和类型自行选择工作模式；显色时间为1-9分钟；测试数据可以传输到“打印机”或“计算机”。
2.试剂
缓冲液：取一包缓冲剂，溶于500ml蒸馏水，搅拌、溶解、混合后放在室温下保存。
酶溶液配制：取一瓶胆碱脂酶液，加磷酸缓冲液8ml，4℃保存。
显色剂配制：取一瓶显色剂，加磷酸缓冲液25m，4℃保存。
底物液配制：取一瓶底物，加磷酸缓冲液12.5ml，4℃保存。
三、样品的提取
取蔬菜2～5g（菜叶类2g，块茎类4g），剪成面积约1cm2大小，放入锥形瓶中，加入磷酸缓冲液10ml，震摇1～2min，然后将提取液到入取样瓶，静置2～3min，待测。
四、测试步骤
1.对照测试
在干净的取样瓶中依次取0.1ml酶液、2.5ml缓冲液 ，混匀，再加入0.1ml显色液，摇匀后放于37℃静置10～15min。在比色皿中加0.1ml底物溶液，再将上述培养后的反应液倒入比色皿中，迅速放入检测仓中第一检测通道，按【对照】键进行对照测试，一般1～3min。
注意：试样放入试样室前应按【100%T/ABSO】键使透光度值为100.0或吸光度值为0.000。
2.样品测试
在干净的取样瓶中依次取0.1ml酶液、2.5ml缓冲液 ，混匀，再加入0.1ml显色液，摇匀后放于37℃静置10～15min。在干净的比色皿中加0.1ml底物溶液，再将上述反应液倒入比色皿中，迅速放入检测通道，按【样品】键开始检测，一般1～3min。
注意：试样放入试样室前应按【100%T/ABSO】键使透光度值为100.0或吸光度值为0.000。
3.测试结果的判断
若被测样品的酶抑制率超过50%，则表明被测样品中农药残留可能超过安全的界定标准，需用气相色谱等仪器分析法作进一步的确认。阳性结果的样品需要重复检验2 次以上。
五、讨论
1.适宜的反应温度
酶催化显色反应吸光度与温度呈正比，实验证明，在35℃左右，显色反应达到最佳。
2.适宜的酸度
随PH值的增加，反应速率增大，PH值超过7.5后反应速率变化减弱，实验证明，PH值为8时反应速率最大。
3.合适的摇振时间
充分摇振有利于酶催化动力学反应的进行，若摇振时间太短，则初始反应速率小，检测灵敏度较低，若摇振时间过长，则初始吸光度较大，所以一般振摇20～30秒。
4.正确的添加顺序
酶与待测样品中的农药残留量或底物的反应为可逆反应，由于酶与含有的农药反应速率比酶与底物的反应速率低得多，所以试剂加入顺序对实验影响较大，先加入酶液，使酶与含有的农药预反应，然后加入显色剂，最后加入底物，能达到最佳效果。
5.排除假阳性的干扰
葱、蒜、萝卜和一些叶绿素含量较高的蔬菜中，含有的植物次生物质对酶的活性产生影响，容易产生假阳性。样品提取时缓冲液的用量要是样品重量数的5 倍。对于葱，先去掉须根，再把其根部剪掉，再作样品提取。另外，检测前，将仪器开机预热半个小时，可以提高检测过程的稳定性和准确性，减少假阳性的出现。
参考文献
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[2]王亚飞等.蔬菜中有机磷类农药残留的快速检测黑龙江八一农垦大学学报 2010年第2期.
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