HPLC测定去纤软肝胶囊中芍药苷的含量

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[摘要] 目的：建立去纤软肝胶囊中芍药苷的含量测定方法。方法：采用hplc法，色谱柱为Diamonsil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相为甲醇-0.2%磷酸溶液（40∶60），流速为1.0 ml/min，检测波长为230 nm。结果：芍药苷在0.116 8～1.168 0 μg 范围内线性关系良好（r=0.999 7），平均回收率为100.3%，RSD为0.92%。结论：该方法灵敏、准确、重复性好，为去纤软肝胶囊的质量控制提供了依据。

[关键词] HPLC；去纤软肝胶囊；芍药苷；含量测定

[中图分类号]R927.2 [文献标识码]B [文章编号]1673-7210（2009）05（c）-048-02

Content determination of paeoniflorin in Quxian Ruangan Capsules by HPLC

LI Runwen

(The Sixth People's Hospital of Shenyang, Shenyang 110006, China)

[Abstract] Objective: To establish a method for the determination of paeoniflorin in Quxian Ruangan Capsules. Methods: HPLC was used with Diamonsil C18(4.6 mm×250 mm, 5 μm) as chromatographic column and methanol-0.2% solution of phosphoric acid(40∶60) as mobile phase, the flow rate was 1.0 ml/min and the detective wavelength was set at 230 nm. Results: There was a good linearity in the range of 0.116 8-1.168 0 μg(r=0.999 7), the average recovery was 100.3% with a RSD of 0.92%. Conclusion: This method is sensitive, accurate, reproducible, and provides a basis for the quality control of Quxian Ruangan Capsules.

[Key words] HPLC; Quxian Ruangan Capsules; Paeoniflorin; Content determination

去纤软肝胶囊由赤芍、川芎、牡蛎等七味中药组成，具有活血化瘀、软坚散结的功效，临床上用于慢性肝炎及肝硬化的治疗。赤芍为方中主药，其有效成分芍药苷有保肝作用，经药理研究证明，芍药苷能减轻肝细胞变性、坏死及肝纤维化程度，抑制肝癌细胞生长。为确保制剂的质量和疗效，本文建立了芍药苷的HPLC测定方法，可作为该制剂的质量控制指标。

1 仪器与试药

1.1 仪器

LC-10A高效液相色谱仪（日本岛津公司）；CSF-1A超声波发生器（上海超声波仪器厂）；ES-120J电子分析天平（沈阳龙腾电子称量仪器有限公司）。

1.2 试药

去纤软肝胶囊（沈阳市第六人民医院制剂室，批号为060124、060210、060313、060417、060506、060621、060726、061030、061120、061225）；芍药苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号为110736-200526）；水为重蒸馏水，甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱为Diamonsil C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相为甲醇-0.2%磷酸溶液（40∶60）；流速为1.0 ml/min；检测波长为230 nm；柱温为35℃。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备精密称取芍药苷对照品14.6 mg，置25 ml容量瓶中，加稀乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1 ml，置10 ml容量瓶中，加稀乙醇至刻度，摇匀，即得每毫升含芍药苷58.4 μg的对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备取本品内容物约1 g，精密称定，置50 ml容量瓶中, 加稀乙醇适量，超声处理30 min，放冷，加稀乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，经微孔滤膜（0.45 μm）滤过，即得供试品溶液。

2.2.3 阴性对照品溶液的制备按处方及工艺制备不含赤芍的阴性对照品，再按“2.2.2”项下方法制备阴性对照品溶液。

2.3 系统适用性试验及专属性考察

分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液与阴性对照品溶液各10 μl，注入液相色谱仪中，记录色谱图，见图1。由图可见，芍药苷峰与其他峰基线分离，分离度大于1.5，理论板数按芍药苷峰计算不低于4 000。对照品溶液与供试品溶液主成分峰的保留时间一致，阴性对照品溶液在芍药苷峰相应的位置上无色谱峰，表明其他成分对测定无干扰。

2.4 线性关系考察

分别精密吸取对照品溶液2、5、10、15、20 μl进样，在上述色谱条件下测定，以峰面积值为纵坐标，芍药苷进样量为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程为Y=40 232.21X+37 444，r=0.999 7。结果表明，芍药苷在0.116 8～1.168 0 μg范围内线性关系良好。

2.5 精密度试验

精密吸取对照品溶液10 μl，连续进样5次，测定芍药苷峰面积，得RSD为0.43%，表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验

精密吸取同一批号供试品溶液（060313）10 μl，分别于0、2、4、6、8 h进样测定，芍药苷峰面积无明显变化，得RSD为0.74%，表明供试品溶液在8 h内稳定性良好。

2.7 重复性试验

取同一批号供试品（060621）6份，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μl进样，测定芍药苷峰面积并计算含量，结果平均含量为1.306 mg/粒，RSD为0.92%，表明本方法重复性良好。

2.8 加样回收率试验

取已知含量（2.612 mg/g）的同一批号供试品（060621）0.5 g 6份，精密称定，分别精密加入芍药苷对照品溶液（1.285 mg/ml）1 ml，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μl进样，测定含量，计算回收率，结果见表1。

表 1 加样回收测定结果

Tab.1 Results of the sample recovery test

2.9 含量测定

取10批供试品各2份，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μl进样，按外标法计算芍药苷的含量，结果见表2。

长期生产实践证明药品的含量服从正态分布，故置信度95%的单侧置信下限为（x-t0.05・sx）=（1.330－1.833×0.070）=1.200。由于药材来源、工艺设备及贮存条件均较稳定，所以暂定本品每粒含赤芍以芍药苷计不得少于1.20 mg。

3 讨论

在确定提取条件时，对提取方法（超声处理、加热回流），提取溶媒（稀乙醇、50%甲醇、甲醇），提取时间（20、30、40 min）进行了对比实验，结果表明以稀乙醇为溶媒，超声处理30 min为最佳，本法操作简便，芍药苷提取完全。在确定流动相时，采用了甲醇-水、乙腈-水、甲醇-0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液，分离效果均不理想，最后以甲醇-0.2%磷酸溶液（40∶60）为流动相，达到基线分离、峰形尖锐且保留时间适中。经方法学考察，证明该方法灵敏、准确、重复性好，以芍药苷的含量为指标有效控制了去纤软肝胶囊的质量。

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（收稿日期：2009-02-26）