HPLC法测定夏桑菊颗粒中蒙花苷的含量

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[摘要] 目的 研究高效液相色谱（hplc）法测定夏桑菊颗粒中蒙花苷含量的方法。 方法 采用Agilent ZORBAX SB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱，十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.1%磷酸溶液（70∶30）为流动相；检测波长为334 nm；流速：1.0 mL/min；柱温：30℃。 结果 蒙花苷含量在0.047 6～0.952 0 μg范围内具有良好线性关系，r = 0. 999 9，平均加样回收率为99.73%，RSD = 0.76%（n = 6）。 结论 以HPLC法测定夏桑菊颗粒中蒙花苷的含量，方法简便快捷，精密度高，重现性好，可用于药品质量的控制。

[关键词] 蒙花苷；夏桑菊颗粒；高效液相色谱；含量

[中图分类号] R927.2 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2013）01（c）-0064-02

夏桑菊颗粒是治疗风热感冒、咽喉肿痛、头昏耳鸣等症的常用药，具有清肝明目、疏风散热、除湿痹以及解疮毒的功能。处方为夏枯草500 g、野80 g、桑叶175 g[1]，可作为夏季清凉饮料饮用[2]。方中野的特征成分为蒙花苷[3]，蒙花苷能够抑制金黄色葡萄球菌和乙型溶血链球菌，具有清热、凉血的药理作用。根据蒙花苷不溶于水的特性，本研究采用超声提取的方法，以高效液相色谱法测定夏桑菊颗粒中蒙花苷的含量，达到控制夏桑菊颗粒剂质量的目的。

1 仪器与试药

1.1 仪器

岛津LC-10A高效液相色谱仪（包括SPD-10Avp紫外-可见检测器、SCL-10Avp系统控制器、CTO-10ASvp柱温箱，Lcsolution工作站，日本岛津公司）；FA1004N 电子天平（上海精密仪器仪表公司）；SK2200LH超声波清洗器（上海精密仪器仪表公司）；紫外分光光度仪：TU-1901型双光束紫外-可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）。

1.2 试药

蒙花苷对照品（购自中国药品生物制品检定所，批号：111542-200708，供含量测定用，质量分数95.9%），夏桑菊颗粒[葵花药业集团（重庆）有限公司生产，国药准字Z510 22330，生产批号：120202、120205、120208；规格：10 g/袋]；缺野阴性空白试样自制；甲醇、乙腈为色谱纯；水为重蒸水，其它试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

采用Agilent ZORBAX SB-C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）为色谱柱（美国安捷伦科技公司），流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（70∶30）；流速：1.0 mL/min；柱温：30℃；进样量：20 μL；检测波长：334 nm[4]。

2.2 对照品溶液制备

精密称取经五氧化二磷干燥12 h的蒙花苷对照品23.82 mg，置100 mL容量瓶中，加甲醇至定容至刻度，制成每毫升含0.238 0 mg蒙花苷的对照品贮备液，精密吸取1.0 mL该贮备液移置至10 mL容量瓶中，准确加入甲醇至刻度，摇匀，即得到1 mL含0.023 8 mg的对照品溶液。

2.3 样品溶液制备

取样品制剂颗粒，研细混匀，精密称取10.0 g，置具塞锥形瓶中，加入25 mL甲醇溶液， 加塞密闭，精密称定重量，超声提取30 min，冷却后再次称定重量，以甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得到样品溶液。

2.4 阴性空白样品溶液的制备

按照处方比例精密称取夏枯草10 g，桑叶3.5 g，将两种药材粉碎混合，置锥形瓶中， 加入100 mL甲醇溶液，加热回流3 h，冷却后滤过，回收溶剂，残留物加甲醇溶解并定容至100 mL，摇匀后经0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液作为阴性空白样品溶液。

2.5 干扰性试验

精密吸取样品溶液、阴性空白样品溶液及对照品溶液按“2.1”项下色谱条件分别进样测定，结果证明，样品溶液主峰的保留时间与对照品液一致，阴性空白样品溶液在与对照品溶液相同保留时间处未见明显的色谱峰，说明被测组分分离良好，阴性对照无干扰，见图1、2、3。

2.6 线性关系考察

精密吸取对照品贮备溶液（0.238 0 mg/mL）1.0、2.0、4.0、8.0、16.0、20.0 mL分别置于100 mL容量瓶中，加甲醇稀释定容至刻度，摇匀，得到浓度为0.002 38、0.004 76、0.009 52、0.019 04、0.038 08、0.047 60 mg/mL的系列对照品溶液，依次取上述溶液20 μL按“2.1”项下色谱条件分别进样测定，记录色谱图，以峰面积为纵坐标（Y），以进样含量（μg）为横坐标（X），得回归方程为：Y = 5.736X×105-3.352×103，r = 0.999 9，结果证明，蒙花苷在0.047 6～0.952 0 μg范围内具有良好线性关系。

2.7 精密度试验

准确吸取蒙花苷对照品溶液（0.023 8 mg/mL）按“2.1”项下色谱条件分别进样测定，重复试验操作6次，测得蒙花苷峰面积平均值为607 367，RSD值为0.76%（n = 6）。结果表明本试验精密度良好。

2.8 重复性试验

精密称取同批次样品（批号： 120202）5 份，分别按“2.1”项下色谱条件分别进样测定，结果样品中蒙花苷含量的RSD值为0.83%，表明本试验具有良好的重复性。

2.9 稳定性试验

将同批次样品溶液，分别在0、2、4、6、12、12 h按“2.1”项下色谱条件分别进样测定，记录色谱图峰面积，RSD值为1.30%，表明样品溶液在12 h内稳定性良好。

2.10 加样回收试验

称取6份已知含量的夏桑菊颗粒剂（批号120202）各5 g，精密称定后分别精密加入0.238 0 mg/mL 蒙花苷对照品贮备液1.0 mL，按“2.3”项下方法进行制备，将制得的溶液按“2.1”项下色谱条件分别进样测定，测得蒙花苷的平均回收率为99.73%，RSD = 0.76%（n = 6），见表1。

2.11 含量测定

准确吸取3个批次的样品溶液各20 μL，注入高效液相色谱仪进行测定，测得蒙花苷峰面积平均值为607 367，根据色谱图峰面积，按照外标法计算样品中的蒙花苷的含量，结果见表2。

3 讨论

在本研究前，笔者考察了200～400 nm 波长对蒙花苷对照品的扫描结果，证明在334 nm 附近显示有最大吸收峰，参考相关文献[5-7]，故选用334 nm为检测波长。由于野含有多种倍半萜类、黄酮类及挥发油成份[8]，药材在采收、炮制、储存过程中易导致所含蒙花苷的损失，从而影响夏桑菊颗粒的功效，因此夏桑菊颗粒在生产中应注意选择优质药材，提高生产工艺，保证药品中有效成分的含量，本法采用超声处理30 min提取夏桑菊颗粒中的蒙花苷。王伯涛等[9]研究表明，以HPLC法测定蒙花苷含量，其色谱系统能够适应测定需要，分离度、重复性试验、样品溶液稳定性、加样回收率均能得到满意效果，且操作简便、处理时间短、结果精密度高、重现性好，与本研究结果相符，故可用于夏桑菊颗粒的质量控制。

[参考文献]

[1] 赵霞，尚桂丽. 夏桑菊颗粒薄层鉴别提取方法的改进[J]. 现代医药卫生，2009，25（5）：695-696.

[2] 中华人民共和国卫生部药典委员会. 中华人民共和国卫生部药品标准-中药成方制剂（第十五册）[S]. 北京：1997：164.

[3] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典[S]. 一部. 北京：化学工业出版社，2005：219.

[4] 魏娜，王强. 野及其相关制剂中蒙花苷的含量测定[J]. 药学与临床研究，2007，15（3）：221-223.

[5] 张珊珊，彭艳梅，吴艳. HPLC法测定夏桑菊颗粒中蒙花苷含量研究[J]. 中医药导报，2007，13（4）：79-80，97.

[6] 赵剑波，刘永俊，沙红玉，等. 高效液相色谱法测定香菊感冒颗粒中蒙花苷的含量[J]. 中国医院药学杂志，27（12）：1776-1777.

[7] 黄晓文，谢艳婷，冯嘉欣，等. HPLC测定夏桑菊颗粒中蒙花苷的含量[J]. 广东药学院学报，2008，（3）：

[8] 陈蕾，朱霁虹. HPLC法测定野中蒙花苷的含量[J]. 中国药事，2005，19（2）：33-34.

[9] 王伯涛，林瑞超，鲁静. RP-HPLC测定野栓中蒙花苷的含量[J]. 中成药，2007，29（7）：1101-1103.

（收稿日期：2012-10-17 本文编辑：袁 成）