LC-MS/MS法快速筛选保健食品中非法添加的18种止咳平喘化学成分

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摘 要：目的：建立保健食品中非法添加的18种止咳平喘化学成分的快速筛选方法。方法:采用液相色谱-串联质谱法（lc-ms/ms）以Polaris 5 C18-A (2.0mm×50mm，5μm)为分析柱，流动相采用0.1%甲酸和甲醇进行梯度洗脱，电喷雾电离(ESI)、多反应监测(MRM) 扫描方式，对保健食品中非法添加的18种止咳平喘化学成分进行筛选分析。结果:建立了快速分离检测保健食品中18种非法添加成分的测定方法，检测限低于2ng。结论:该方法专属性强、灵敏度高，适用于止咳平喘类保健品中非法添加成分的筛选及确证工作。

关键词：高效液相色谱-质谱；多反应监测；止咳平喘类保健品中非法添加成分；快速

中图分类号：R284.2 文献标识码：A 文章编号：1673-7717(2011)12-0172-04

Screening for 18 Mixed Illegally Cough-Relieving Chemical Composition in Health Food by LC-MS/MS

WANG Zhenyuan1,LI Dan1,WEN Hongmei2,CUI Fuchun1,HUANG Ya1, SUN Xiarong1

(1.Nanjing Institute for Drug Control,Nanjing 210015,Jiangsu,China;

2.Nanjing University of Traditional Chinese Medicine,Nanjing 210029,Jiangsu,China)

Abstract:Objective：To establish a liquid chromatography-tandem mass chromatography (LC-MS/MS) method for the simultaneous screening 18 kinds of cough-relieving cough asthma chemical compositions in health food.Methods：This method involves liquid chromatography - tandem mass spectrometry,the separation was conducted by Varian Polaris 5 C18-A (2.0mm×50mm,5μm).The mobile phase was consisted of 0.1% formic and methanol.The target compounds were analyzed with LC-MS/MS- ESI,multiple-reaction monitoring(MRM) was used to screen illegal chemical compositions in health food.Results：A fast and sensitive liquid chromatography mass spectrometric (LC/MS) method for the simultaneous screening for illegal chemical compositions was described.The LOD of these substances were below 2ng.Conclusion:The method was sufficiently selective and sensitive to detect illegal chemical compositions in health food.

Key words:LC-MS/MS； multiple- reaction monitoring(MRM)；mixed illegally chemical compositions；rapid

随着国家监管力度的加强，药品市场已经相对比较健康发展，但是保健品食品市场，却存在鱼龙混杂，良莠不齐的问题，虚假广告、违规保健品配方等等让消费者为之困惑。很多保健品食品常被冠以“最新科技成果”或“祖传秘方”[1]，但其具体作用机理却模糊不清；更有不法分子为求速效，在其中添加化学药品[2-5]，消费者在不知情的情况下服用了未知成分未知剂量的药品，极易产生不良后果。目前，国家药品监督管理局对止咳平喘类成分还没有一个比较系统的检验方法，本实验运用液质联用技术，采用多反应监测扫描方式，建立了同时检测非法添加的18种止咳平喘化学成分的快速检验方法，为更好打击不法行为提供可靠的技术保障。

1仪器与试药

1.1仪器

1200L LC-MS液质联用仪（美国瓦里安公司）：配有自动进样器，电喷雾接口( ESI )，三重四极杆质量分析器， Ms workstation Version 6.6化学工作站； Sartorius BP211D电子天平（美国 Sartorius公司）。

1.2试药

对照品：磷酸可待因（171203-200504），氢溴酸右美沙芬（100201-199901），枸橼酸喷托维林（100432-200401），磷酸苯丙哌林（100237-199701），盐酸二氧丙嗪（10299-0001），那可丁（171224-200403），福尔可定（1025-200203），愈创甘油醚（100528-200401），盐酸溴己新（100427-200301），盐酸氨溴索（100599-200502），盐酸麻黄碱（171242-200405），盐酸异丙肾上腺素（100166-200503），沙丁胺醇（0204-9701），硫酸特布他林（0273-9701），盐酸丙卡特罗（10275-0101），盐酸妥洛特罗（100472-200401），盐酸克仑特罗（0072-8501），茶碱（0121-9202）均由中国药品生物制品检定所提供。甲醇：色谱纯，甲酸：分析纯，水为重蒸水。样品：本所自购。

2实验方法

2.1对照品溶液的配制

对照品储备溶液：取上述对照品约10mg，精密称定，分别置于100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得各对照品储备溶液。

混合对照品溶液：各取上述对照品储备液1mL，置于25mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得混合对照品溶液。

2.2色谱条件

分析柱为Polaris 5 C18-A (2.0mm×50mm，5μm)（美国瓦里安公司）。流动相采用0.1%甲酸（A）和甲醇（B）进行梯度洗脱；淋洗梯度：0min，85% A∶15%B；15 min，20%A∶80%B，流速：0.2mL•min-1。

验证时色谱条件：流动相为甲醇-0.1%甲酸溶液（30∶70）。

2.3质谱条件

电喷雾离子源（ESI）；正负离子模式；多反应监测（MRM）扫描方式；喷雾针电压：5ｋV；雾化气压力：51psi；干燥气温度：250℃；干燥气压力：19 psi；碰撞气压力：２mtorr；检测器电压：1.2kV；扫描间隔时间：0.5 seconds；扫描峰宽 Q1：3.0amu；扫描峰宽Q3：0.8amu。

2.4样品溶液的配制

取供试品适量（约相当于一次用量），研细，置50ml量瓶中，加甲醇适量，超声15min，溶解，放冷置室温，加甲醇稀释至刻度，滤过（0.45μm滤膜），取续滤液，即得。

2.5测定

取样品溶液和混合对照品溶液各2μL注入液质联用仪，按照LC-MS/MS测定条件分别进行分析。3 结果与讨论

3.1质谱条件的优化

分别将18种对照品储备溶液（约100μg/ml）用甲醇稀释成1μg/ml的对照溶液，选用ESI离子化模式，通过直接进样法，进行质谱条件优化。首先，采用一级质谱的扫描方式可得到准分子离子峰，在确定准分子离子的基础上，进行毛细管电压的优化，得到各化学成分的最佳毛细管电压（DP），再用MS/MS breakdown的方式仪器自动产生各子离子及其相应的最佳碰撞能量（CE），以最高丰度的子离子作为检测离子。多反应监测（MRM）扫描方式即采用多通道对各化学成分的检测离子在其最佳毛细管电压和碰撞能量的条件下同时进行扫描。在实际样品测定中为防止出现一些干扰，可增加多个离子对进行筛选。各化学成分优化结果见表1。

3.2 检测限

取对照品溶液适量，加甲醇逐步稀释，按上述液质联用条件进行测定，以S/N=3，计算各化学成分的检测限。

上述化学成分在MRM方式下的LOD取决于其本身的原因外，主要与离子化的效率有关。18种化合物的检测限除福尔可定为2ng外，其他成分均小于1ng，其结果见表2。

根据上述各种化学成分检测限的浓度，分别在不同剂型，如：胶囊剂、片剂、颗粒剂、口服液、散剂、润喉糖等剂型的空白样品中，加入适量对照品，按样品溶液的配制方法同法处理，制成相当于检测限浓度的样品溶液，在相同的液质联用条件下，S/N仍能达到3，即基质对检测结果无干扰。

3.3样品测定结果

进行样品筛选分析后，如供试品色谱图中检出的某离子色谱峰的保留时间与混合对照品溶液中某化学成分相应离子色谱峰保留时间相一致，则取该化学成分的准分子离子进行二级质谱全扫描验证，若供试品的保留时间和特征碎片离子均与对照品相同，则判断该供试品中含有此化学成分。

混合对照品色谱图见图1。由图1可见有多个组分虽然在保留时间上看似不能达到完全分离，但由于MRM方式特征母离子/子离子对具特有的专一选择性，不会造成相互间的干扰，18种化学成分均能得到较好检测。

样品的色谱图见图2。由图2可见，保留时间7.376 min、3.141min 处出现两个色谱峰，相应的离子对分别为317.3/86 .0、178.9/164.0 ，与混合对照品色谱图中盐酸二氧丙嗪、茶碱对照品保留时间及相应离子对一致，由此可初步筛选出样品中可疑止咳平喘化学成分的存在，再取其母离子进行二级质谱全扫描，其特征碎片与对照品也一致，由此判断样品中含盐酸二氧丙嗪和茶碱成分。样品的验证质谱图见图3。

4讨 论

（1）本实验筛选时采用的梯度流动相，验证时采用了等度流动相，这样既节省了时间又使保留时间再次得到验证。对于混合对照中基本无保留的成分福尔可定，验证时可将流动相中0.1%甲酸溶液改成10mmol/L醋酸铵水溶液，即能得到良好保留。

（2）如样品分析过程中选择的离子对出现与对照品保留时间相同或者接近的色谱峰，还可以增设更多的离子对同时进行分析，增加实验的专属性。

（3）本实验共建立了同时筛选保健品食品中可能非法添加的18种止咳平喘类成分的方法，该方法采用多反应监测的方式检测，干扰少，灵敏度高，检测结果更准确。

参考文献

[1] 董永成，杜士明，陈永顺，等.中成药及保健品非法添加化学成分的类型、危害及对策[J].时珍国医国药，2006,8(17)：1601-1602.

[2]李莉，张刚平，李晓敏，等.平喘镇咳类中成药中非法添加4种化学药品检验方法的研究[J].中国药房 2008,9(19),676-678.

[3]李晓敏，毕雪艳，李莉，等.平喘镇咳中成药中非法添加两种化学药品检验方法研究[J].中国药事2007,6(21),447-447.

[4]华玉琴，祝波，栾成章.高效液相色谱法检测止咳平喘中药制剂中违法添加的茶碱[J].中国药业 2007,24(16),34-35.

[5]张翠英，李振国，徐金玲.UPLC-MS法检测止咳平喘制剂中非法添加茶碱、醋酸泼尼松、醋酸地塞米松[J].中成药 2008,9(30),1326-1330.