注射用大川芎中药材的质量研究

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【摘要】 目的 对注射用大川芎中所用原药材进行了质量研究。建立了川芎药材和天麻药材的TLC鉴别方法，并对样品进行了鉴别。方法 建立了川芎药材中阿魏酸及天麻药材中天麻素的HPLC含量测定方法，并对方法学进行了考察。结果 在所确立的色谱条件下，阿魏酸在0．0316 ～ 0．5056 μg范围内，峰面积和进样量线性关系良好，精密度RSD = 1．25 %，平均回收率为97．80 %（n = 9，RSD = 1．47 %）；天麻素在0．502 ～ 10．04 μg范围内，峰面积和进样量线性关系良好，精密度RSD = 1．21 %，平均回收率为98．00 %（n = 9，RSD = 1．39 %）。结论 供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性样品无干扰。

【关键词】 川芎；天麻；质量研究

The quality study on the herbs used in Rhizoma Chuanxiong injection Zhang Yan-bo,ZHAO Yong,GUAN Hong-yu,et al.Harbin Institute of Technology Hospital,Heilongjiang 150001,China

【Abstract】 Objective To study the quality on the herbs used in Rhizoma Chuanxiong injection.Methods Rhizoma Chuanxiong and Rhizoma Gastrodiae were identified with TLC methods. The methods of HPLC were built up to determine the content of the two main ingredients in these two herbs. Results Under the identified chromatography condition ,the peak area of Ferulic acid is in good linearity to its concentration in the range of 0．0316～0．5056 ug. The precision (RSD) is 1．25% and the average recovery is 97．80% (n=9 RSD=1．47%).As to Gastrodin ,in the range of 0．502～10．04ug,the linearity between peak area and concentration is satisfactory. The precision is 1．21% and the average recovery is 98．00%(n=9 RSD=1．39%).Conclusion The two methods above were accurate， reliable and repeatable.

【Key words】 Rhizoma Chuanxiong ；Rhizoma Gastrodiae；Quality study

中药注射剂是指以中医药理论为指导，采用现代科学技术和方法，从中药或天然药物的单方或复方中提取的有效物质制成的无菌溶液、乳状液、混悬液以及临用前配成液体的无菌粉末 [1]。中药注射剂的出现促进了中药向定向、定量给药和安全、稳定、高效等方面的发展，从而加速了中药的国际化进程。

注射用大川芎是川芎提取物和天麻提取物配伍再加适量辅料经冷冻干燥的方法而制成的冻干粉针。注射用大川芎应能在治疗心脑血管疾病方面有较突出的疗效，满足临床治疗急、重病症的需求，产生良好的社会效益和经济效益。

川芎（Rhizoma Chuanxiong）为伞形科植物川芎（Ligusticum chuanxiong Hort．）的干燥根茎。川芎味辛、性温，归肝胆心经，用于月经不调、跌打肿痛、头痛，风湿痹痛等症[3]。药理学研究表明。川芎具有镇静、降压、解惊厥、抑菌、抗衰老等作用，对心血管系统及血液系统也均有不同作用。文献大多将阿魏酸作为药材和制剂的指标性成分，对其进行研究。阿魏酸化学结构如下：

天麻（Rhizoma Gastrodiae）为兰科植物天麻（Gastrodia elata Blume） 的干燥块茎。天麻性平，味甘，归肝经,用于头痛眩晕，肢体麻木，小儿惊风，癫痫抽搐，破伤风等症[5]。现代药理学研究表明天麻有镇静、抗惊厥、镇痛、抗炎、改善学习记忆等作用，对心血管系统及高级中枢神经也均有不同作用。天麻中有生物活性的化学成分主要有天麻素和天麻苷元。大多数文献将天麻素作为药材和制剂的指标性成分，对其进行研究。天麻素化学结构如下：

以净药材为原料投料是中药注射剂常见的投料方式。以药材为中药注射剂原料时，药材必须符合一定的质量要求。探讨和建立科学、可靠、简便的药材的定性定量分析方法是药物制剂研究工作的前提。采用薄层色谱法、气相色谱法、高效液相色谱法等现代分析方法对药材中主要有效成分进行质量研究与剂型的处方设计、工艺优化及成品质量等密切相关。本文探讨和建立了川芎药材及天麻药材的定性定量分析方法，从而为注射用大川芎质量控制方法的研究及建立奠定了基础。本论文包括两方面的内容：①川芎药材及天麻药材的鉴别;采用TLC法对川芎药材及天麻药材进行鉴别;②建立了阿魏酸和天麻素的HPLC含量测定方法，并对样品进行含量测定。本实验所需仪器见表1。

1 川芎药材和天麻药材的鉴别

1．1 川芎药材的鉴别[5]

取川芎药材粉末1 g，置于50 ml圆底烧瓶中，加甲酸4 ml，乙醚40 ml，回流提取1 h，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，离心后取上清液作为供试品溶液；另取川芎对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。称取阿魏酸对照品10 mg，置于10 ml棕色量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得阿魏酸对照品溶液(每1 ml中含阿魏酸1 mg)。

照薄层色谱法 (《中国药典》2000年版一部，附录Ⅵ B)试验，吸取上述三种溶液各10 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-冰醋酸( 9∶1∶0．2 )为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。色谱图见图1。

1．2 天麻药材的鉴别[5]

取天麻药材粉末1 g，置于25 ml圆底烧瓶中，加甲醇10 ml，回流提取30, min，静置，离心后取上清液，得供试品溶液；另取天麻对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。称取天麻素对照品10 mg，置10 ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得天麻素对照品溶液(每1 ml中含天麻素1 mg)。

照薄层色谱法 (《中国药典》2000年版一部，附录Ⅵ B)试验，吸取上述三种溶液各10 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-醋酸乙酯-冰醋酸( 9∶3∶1∶0．1 )为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10 %磷钼酸乙醇溶液，在105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。色谱图见图2。

2 含量测定

2．1 川芎药材中阿魏酸的含量测定 [6]

2．1．1 检测波长的选择 取阿魏酸对照品适量，加甲醇使溶解并稀释至适当浓度，在200～400 nm波长范围内进行紫外扫描，记录紫外吸收光谱图。见图3。

结果表明阿魏酸在320 nm波长处有最大吸收，因此选用320 nm作为紫外检测吸收波长。

2．1．2 色谱条件

色谱柱：DiamonsilTM（钻石）Ｃ18柱（200 mm×4．6 mm，5 μm，迪马公司）；保护柱：ODS C18柱(10 mm×4．6 mm，5 μm，依利特公司)；流动相：甲醇-水-冰醋酸（30∶66∶4，v/v，用冰乙酸调pH值至2．5）；流速：1．0 ml/min；检测波长：320 nm；柱温：35℃。

2．1．3 溶液的制备 对照品溶液的制备 精密称取阿魏酸对照品约16 mg，置100 ml棕色量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，得对照品储备液。精密吸取对照品储备液1 ml，置10 ml棕色量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，得对照品溶液。

供试品溶液的制备 川芎药材粉碎后过80目筛，40℃干燥2 h备用。精密称取干燥川芎粉末约1 g，加水100 ml，回流提取2 h，滤过，滤液放冷后转移至100 ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，0．45 μm微孔滤膜滤过，得供试品溶液。

2．1．4 方法学考察 标准曲线的制备 分别精密吸取阿魏酸对照品储备液0．1、0．4、0．6、0．8、1．2、1．6 ml置于5 ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。分别进样10 μl，以阿魏酸进样量X（μg）为横坐标，峰面积（A）为纵坐标，绘制标准曲线，结果相关系数r＝0．999 9，表明阿魏酸在0．031 6～0．505 6 μg范围内线性关系良好。回归方程为：A＝2 177 265 X+293．37。

2．1．5 精密度试验 取对照品溶液，连续进样6次，每次10 μl，峰面积的RSD为0．42 %。取干燥药材粉末6份，依“1．3”项下方法制备供试品溶液，分别进样10 μl，阿魏酸峰面积的RSD为1．25 %。表明仪器和方法的精密度良好。

2．1．6 溶液中稳定性试验 取同一份供试品溶液，分别于0、2、4、8、12、24 h进样10 μl，阿魏酸峰面积的RSD为0．48 %。表明供试品溶液在24 h内稳定。

2．1．7 回收率试验 利用加样回收法，精密称取已测定含量的干燥川芎粉末约0．5 g，共9份，分为低、中、高3组，分别加入阿魏酸对照品0．88、1．10、1．32 mg，按照“1．3”项下方法操作并测定，计算回收率。结果见表2。

2．1．8 样品含量测定 取干燥川芎粉末约1 g，按“1．3”项下方法制备供试品溶液。精密吸取阿魏酸对照品溶液和供试品溶液各10 μl，分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图，量取峰面积。以外标法计算阿魏酸的含量为0．216 %。色谱图见图4。

3 天麻药材中天麻素的含量测定 [7]

3．1 检测波长的选择 取天麻素对照品适量，加水使溶解并稀释至适当浓度，在200～400 nm波长范围内进行紫外扫描，记录紫外吸收光谱图。见图5。

结果表明天麻素在221 nm和270 nm波长处有最大吸收，考虑到221 nm属末端吸收，干扰较大，因此选用270 nm作为紫外检测吸收波长。

3．2 色谱条件 色谱柱：DiamonsilTM（钻石）C18柱（250 mm×4．6 mm，5 μm，迪马公司）；保护柱：ODS C18柱(10 mm×4．6 mm，5 μm，依利特公司)；流动相：甲醇-水-冰醋酸（5∶95∶1，v/v）；流速：1．0 ml/min；检测波长：270 nm；柱温：30℃。

3．3 溶液的制备 对照品溶液的制备 精密称取天麻素对照品约25 mg，置5 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得对照品储备液。精密吸取对照品储备液1 ml，置25 ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，得对照品溶液。

供试品溶液的制备 天麻药材粉碎后过60目筛，80℃干燥1 h备用。精密称取干燥天麻粉末约1 g，加水100 ml，回流提取2 h，滤过。取续滤液20 ml旋转蒸发至干，加甲醇20 ml回流1 h，滤过，滤液转移至25 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，0．45 μm微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。

3．4 方法学考察

3．4．1 标准曲线的制备 分别精密吸取天麻素对照品储备液0．1、0．4、0．8、1．2、1．4 、2 ml置于10 ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。分别进样10 μl，以天麻素进样量X（μg）为横坐标，峰面积（A）为纵坐标，绘制标准曲线，结果相关系数r＝0．999 9，表明天麻素在0．502～10．04 μg范围内线性关系良好。回归方程为：A＝77392 X + 203．94。

3．4．2 精密度试验 取对照品溶液，进样10 μl，连续进样6次，计算天麻素峰面积的RSD为0．28 %。取干燥天麻粉末6份，依“2．3”项下方法制备供试品溶液，分别进样10 μl，计算天麻素峰面积的RSD为1．21 %。表明仪器和方法的精密度良好。

3．4．3 溶液中稳定性试验 取同一供试品溶液分别于0、2、4、12、24、48 h进样10 μl，天麻素峰面积的RSD为1．26 %。表明供试品溶液在48 h内稳定。

3．4．4 回收率试验 精密称取已测定含量的干燥天麻粉末0．5 g，共9份，分为低、中、高3组，分别加入天麻素4．8、6．0、7．2 mg，依“2．3”项下操作并测定，计算回收率。结果见表3。

3．1．5 样品含量测定 取干燥天麻粉末约1 g，按“2．3”项下方法制备供试品溶液，精密吸取天麻素对照品溶液和供试品溶液各10 μL，分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图，以外标法计算天麻素的含量为1．17 %。色谱图见图6。

4 讨论与小结

4．1 讨论

4．1．1 由于中药化学成分十分复杂，对其中每一种成分都进行检测是不可能和不必要的，选择能够反映该药材主要药效的成分为指标进行分析，就能够达到控制药品质量的目的。

4．1．2 采用《中国药典》2000年版一部中天麻鉴别方法鉴别时，出现天麻素斑点拖尾现象，因此本小节对天麻药材的鉴别方法进行了深入研究，优化后的鉴别方法，专属性强，斑点清晰，可用于天麻药材的鉴别。

4．1．3 川芎作为四川省的道地药材，在省内各地均有种植。本小节通过预试验选用四川省都江堰市GAP基地产川芎作为注射用大川芎的原药材；四川省青川县天麻样品中天麻素含量较高，且青川县有天麻种植基地，因此选用此产地天麻作为注射用大川芎的原药材。

4．1．4 阿魏酸为弱有机酸，在对照品溶液中加入一定量的冰醋酸（2 %），使得溶液稳定性增加；阿魏酸分子结构中含酚羟基和羧丙烯基，为防止其遇光发生氧化反应和构型转变，配制阿魏酸对照品溶液时使用棕色量瓶。

4．2 小结

4．2．1 本章对川芎药材和天麻药材的鉴别方法进行了研究，经优化后的鉴别方法专属性强、重现性好，可用于这两种药材的鉴别。

4．2．2 采用HPLC法对川芎药材中阿魏酸进行了含量测定，建立了天麻药材中天麻素的HPLC含量测定方法。方法学研究结果表明这两种方法均灵敏度高、重现性好、结果准确，为制剂质量控制方法的研究奠定了基础。

参考文献

［1］ 赵新先.中药注射剂学.广东科技出版社，2000：270.

［2］ 周东,汪颖.植物药的传统使用证据.中国循证医学，2000，1(3):140.

［3］ 中华人民共和国药典委员会. 中国药典2000年版一部.化学工业出版社，2000：31，45.

［4］ 苗明三，李振国.《现代实用中药质量控制技术》.人民卫生出版社，2000：128.

［5］ 中华人民共和国药典委员会. 中国药典2000年版一部 . 化学工业出版社，2000： 44.

［6］ 贾晓斌，施亚芳，黄一平，等.当归和川芎中阿魏酸高效液相色谱测定方法的改进.中成药，1998，20（6）：37-38.

［7］ 王跃生，李计萍，刘淑枝，等. 高效液相色谱法测定天麻及益脑灵颗粒中天麻素含量的方法学研究. 中国中药杂志，1998，23（9）：541-542.