HPLC法测定消肿解毒丸中血竭素的含量

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摘要：目的：建立测定消肿解毒丸中血竭素的含量测定方法。方法：高效液相色谱法采用Phenomenex Kro-masil C10(250mm×4.6mm，5μm)色谱柱，流动相：乙腈-0.05mol／L磷酸二氢钠溶液(50:50)，流速：1.0mL／min，检测波长440nm，柱温40℃。结果：血蝎素线性范围0.0305～0.2440懈，r=0.9999，平均回收率为101.00％，RSD为2.53％(n=6)。结论：本法分离好，快速、简便，可作为该产品的质量控制方法。

关键词：消肿解毒丸；血竭素；高效液相色谱法

中图分类号：R285.5　文献标识码：A　文章编号：1673―7717(2007)11―2418―02

肿毒，疗疮发背、乳痈肿痛等症。因进口血竭质量差异极大，故本文建立高效液相色谱法对其主要有效成分血竭素进行了含量测定，可有效地进行质量控制，该方法简便、快速、灵敏度高。

1 仪器与试药

1.1　仪器

岛津Lc―10ATvp高效液相色谱仪，DAD检测器。

1.2　试药

血竭素高氯酸盐对照品(批号0811―9302，供含量测定用，中国药品生物制品检定所提供)。乙腈为色谱纯，水为超纯水，其它试剂均为分析纯。

2　方法与结果

2.1　色谱条件

色谱柱：Phenomenex Kromasil 100A(250mm×4.6mm，5μm)。流动相：乙腈-0.05mol／L磷酸二氢钠溶液(50:50)；检测波长：440mm；流速：1.0mL／min；柱温：40℃。

2.2　检测波长的确定

经紫外吸收光谱扫描，结果血竭素高氯酸盐对照品溶液在440nm处有一最大吸收峰，故确定检测波长为440nm。

2.3　对照品溶液的制备

精密称取血竭素高氯酸盐对照品适量，置棕色量瓶中，加3％磷酸甲醇溶液制成每1mL含血竭素9μg(血竭素重量=血竭素高氯酸盐／1.377)的溶液，即得。

2.4　供试品溶液的制备

取本品装量差异项下的内容物，研细，混匀，精密称定约1g，置具塞锥形瓶中，精密加入3％磷酸甲醇溶液25mL，称定重量，超声处理10min，放冷，再称定重量，用3％磷酸甲醇溶液补足减失重量，摇匀，用微孔滤膜(0.45pμm)滤过，即得。

2.5　系统试用性试验

按处方量配制缺血竭药材阴性对照样品，照正文含量测定项下方法测定，比较了供试品溶液、血竭素对照品溶液、阴性对照样品液的色谱图，结果在上述色谱条件下，样品中血竭素峰与其它组分色谱峰能达到基线分离，阴性对照液中色谱峰对测定无干扰(见图1)。

2.6 线性关系的考察

精密吸取血竭素对照品溶液(1mL中含血竭素15.251μg)，分别进样2、4、6、8、10、12、14、16μL，注入液相色谱仪，按正文所述色谱条件测定峰面积，以进样量(μg)为横坐标(x)，峰面积(Y)为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程：Y=2382575.332X+365.036.r=0.99999，结果表明：血竭素在0.0305～0.2440μg范围内有良好的线性关系。

2.7　精密度试验

精密吸取血竭素对照品溶液(浓度为15.25μg／mL)10μL，重复进样6次，按正文所述色谱条件测定，峰面积积分值的RSD为0.65％。

2.8　样品溶液稳定性试验精密称取供试品1.0102g，照正文所述方法制备供试品溶液，精密吸取10μL，每间隔一定时间进样，测定，峰面积积分值的RSD为1.56％，结果表明，供试品溶液在24h内基本稳定。

2.9　重复性试验

取同一批号的消肿解毒丸6份，按正文含量测定方法平行试验，测得血竭素平均含量为0.0863mg／g，RSD为2.48％。

2.10　回收率试验

精密称取已知含量的同一批样品约0.5g，分别精密加入血竭素对照品适量，按正文供试品溶液的制备方法制备供试液，平行试验6份，按正文色谱条件，测定其含量，按下式计算回收率，结果见表1。

2.11　样品测定

本品3批，按正文所述方法测定，计算血竭素的含量，结果分别为0.086mg／g、0.112mg／g、0.113mg,／g。

3 讨论

血竭素不稳定，加少量磷酸使成酸性以增加稳定性和溶解性，在试验操作时应尽量避光操作，并以棕色量瓶放置。

试验中曾比较了甲醇一水、乙腈一水、甲醇一磷酸二氢钠、乙腈一磷酸二氢钠等系统，结果以正文中色谱条件分离最好。