不同生长年限赤芍中芍药苷和苯甲酸的含量测定

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摘 要：目的：比较不同生长年限赤芍中芍药苷和苯甲酸的含量差异。方法：采用高效液相法测定赤芍中芍药苷与苯甲酸的含量。结果：不同生长年限赤芍的芍药苷含量为：2年生>3年生>1年生，苯甲酸的含量为：1年生>3年生>2年生。结论：根据不同生长年限赤芍的芍药苷和苯甲酸含量的差异，建议药材的合理采收时期为2年。

关键词：赤芍；芍药苷；苯甲酸；HPLC

中图分类号：R284

文献标识码：A文章编号：

1673-7717（2008）05-1106-02

Determination of Peoniflorin and Benzoic Acid in

Duration of Cultivation of Plant in Radix Paeoniae Rubra

SHENG Zhenhua，YU Chenhuan，WU Qiaofeng（

College of Pharmacy, Zhejiang Chinese Medical University,Hangzhou 310053,Zhejiang，China

）

Abstract：Objective: To compare the contents of the peoniflorin and benzoic of Radix Paeoniae Rubra in the different growth years. Methods: The HPLC was used for determination contents of peoniflorin and benzoic acid of Radix Paeoniae Rubra in different time limits. Results: The sequence of peoniflorin's content of Radix Paeoniae Rubra in different time limit was: biennial > triennial > annual. The sequence of benzoic acid was annual > triennial > biennial. Conclusion: There is invariably difference in the Radix Paeoniae Rubra in the different time limit about the peoniflorin and benzoic acid , and provide the evidence of quality control and reasonable collection. It suggests that the best collection should be biennial.

Keywords：radix paeoniae rubra; peoniflorin; benzoic acid; HPLC

赤芍为毛茛科植物芍药（Paeonia lactiflora pall）或川赤芍（Paeonia veitchii Lynch）的干燥根，为临床上常用中药，主产于浙江、安徽、四川等地。具有清热凉血，散瘀止痛的功效，常应用于湿毒发斑，吐血衄血，目赤肿痛，肝郁胁痛，经闭痛经，跌扑损伤，瘕腹痛，痈肿疮痛[1]。现代研究表明本品中含有芍药苷、氧化芍药苷、芍药花苷、苯甲酸等化学成分[2-3]。芍药苷为其主要成分，具有抗炎、镇痛、抗惊厥、抗溃疡和降压等作用[4-5]。苯甲酸为毒性物质，过量摄入对人体的肝脏和肾脏均有损伤。本文采用高效液相法对不同生长年限的赤芍芍药苷和苯甲酸进行定量分析，为芍药药材的合理采收和质量评价提供科学依据。

1仪器与试药

岛津LC-10AD高效液相色谱仪，FA1104分析天平(上海天平仪器厂)。乙腈、甲醇（天津四友）为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。芍药苷、苯甲酸标准品均购自中国药品生物制品检定所。赤芍药材采自浙江磐安，并经植物资源教研室姚振生教授鉴定为Paeonia lactiflora pall。

2 方法与结果

2.1 色谱条件及系统适应性

芍药苷：色谱柱：ODS-C18(150mm×4.60mm，5μm)；流动相：乙腈-0.1%磷溶液=14∶86；流速：1.0mL/min；柱温：30℃；检测波长：UV230nm。在此色谱条件下，供试品中芍药苷的分离取得较好分离，其色谱峰的保留时间与对照品一致，芍药苷的保留时间为8.52min,见图1。

苯甲酸：色谱柱：ODS-C18(150m×4.60mm，5μm)；流动相：甲醇-0.1%磷溶液=40∶60；流速：1.0mL/min；柱温：30℃；检测波长：UV232nm。此色谱条件下，供试品中的苯甲酸分离完全，色谱峰的保留时间与对照品一致，苯甲酸的保留时间为9.15min，见图1。

2.2芍药苷和苯甲酸的含量测定

2.2.1标准品溶液的制备 分别精密称量芍药苷和苯甲酸对照品1.7、2.6mg，置于量瓶中，加甲醇溶解稀释至刻度，摇匀，分别制得浓度为0.17mg/mL和0.104mg/mL的对照品溶液。

2.2.2供试品溶液的制备 芍药苷[7]：取不同生长年限的赤芍药材粉碎成粗粉，精密称定0.5g，置于具塞锥形瓶中，精密加入50%乙醇25mL，称定重量，浸泡4h，超声处理40min，放冷，再称定重量，用50%乙醇补足减失重量，经溶剂过滤器过滤（0.45μm），弃去初滤液，收集续滤液。精密移取续滤液2mL，以甲醇定容于25mL量瓶中，作为测定芍药苷供试品，备用。

苯甲酸[8]：精密称定不同生长年限的赤芍粗粉1.0g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL,称定重量，浸泡过夜，超声处理1h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失重量，摇匀，经溶剂过滤器过滤，收集续滤液，作为测定苯甲酸供试品，备用。

2.2.3 标准曲线制作分别精密吸取芍药苷和苯甲酸对照品液各1.0mL，置于2.0mL微量离心管中，加甲醇1.0mL稀释，摇匀，对半稀释成各种不同浓度对照品溶液6份，按照“2.1”色谱条件进行测定，每次进样20μL，以浓度X为横坐标，峰面积Y为纵坐标作图，进行线性回归。芍药苷的回归方程为Y=31056X+10108，r=0.9997，线性范围 0.11～3.40μg；苯甲酸的回归方程为Y=119490X+33038，r=0.9998，线性范围0.03～1.40μg。

2.2.4 精密度试验 取同一供试品溶液,连续进样测定5次，计算得芍药苷和苯甲酸的RSD分别为0.79%和1.57%。

2.2.5稳定性实验 取同一供试品溶液，分别于1、2、4、8、12h，测定芍药苷和苯甲酸的峰面积。结果，芍药苷和苯甲酸的RSD分别是2.05%、1.84%，表明制好的供试品溶液在12h以内稳定。

2.2.6加样回收率试验 精密称取已知含量的赤芍样品0.5g，共5份，分别精密加入适量芍药苷和苯甲酸对照品，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，测定含量，计算平均回收率，结果芍药苷和苯甲酸的平均回收率分别为97.85%和98.42%，RSD分别为1.90%和2.76%，结果见表1～表2。

2.2.7 含量测定 精密称取赤芍药材样品0.5g，按照“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，各进样20μL，同时进样对照品溶液，测定芍药苷和苯甲酸的色谱峰面积，根据标准曲线计算含量，测定结果见表3。

3 结果与讨论

芍药苷是中药赤芍的主要成分，含量高低直接影响药材的质量。2005版中华人民共和国药典规定赤芍中芍药苷的含量不少于1.8%，实验结果表明，实验中2年生和3年生均符合药典规定，不同生长年限赤芍的芍药苷含量为：2年生>3年生>1年生。苯甲酸为有害物质，结果表明苯甲酸的含量较低。不同生长年限的苯甲酸含量为:1年生>3年生>2年生。综上考虑，以采收2年生赤芍为宜。

本实验曾使用甲醇提取芍药苷，但提取效果不佳，测得含量偏低，后提取溶剂改为50%乙醇[7]，提取效果较好，相比较甲醇提取含量明显增加，加样回收率好。苯甲酸极易溶于甲醇，提取效率较高，加样回收率好。

文献报道芍药苷的流动相多采用不同比例的乙睛-水系统或甲醇-水系，而且需要调整pH值[9-10]，本实验采用乙腈-0.1%磷酸在比例45∶55时各组分得到满意的分离。同样，苯甲酸在甲醇-0.1%磷酸的比例在40∶60时，分离效果较好，定量准确。

参考文献

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