密花香薷中总黄酮的含量测定及提取工艺

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摘要：通过分光光度法测定不同地区密花香薷中总黄酮的含量，采用正交试验优化提取密花香薷中总黄酮的提取工艺。结果表明，密花香薷中总黄酮的最佳提取工艺为于８０℃，加入３０倍量６０％乙醇回流提取２ ｈ；密花香薷中总黄酮提取含量为１３．７２％。总黄酮正交提取工艺结果可靠，含量测定方法简便准确，适合于工业化生产。

关键词：密花香薷；总黄酮；正交试验；含量测定

中图分类号：Ｒ２８４.２文献标识码：Ａ文章编号：0439－８114（２０11）08－1666-03

Ｓｔｕｄｙ ｏｎ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ Ｐｒｏｃｅｓｓ ａｎｄ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｏｔａｌ Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｉｎ Ｅｌｓｈｏｌｔｚｉａ ｄｅｎｓａ

ＢＡＯ Ｊｉｎ－ｙｕａｎ，ＬＩ Ｊｕｎ－ｑｉａｏ，ＺＨＡＮＧ Ｌｕ－ｌｕ

（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ and Life Science， Ｑｉｎｇｈａｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｆｏｒ Ｎａｔｉｏｎａｌｉｔｉｅｓ， Ｘｉｎｉｎｇ ８１０００７，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｉｎ Ｅｌｓｈｏｌｔｚｉａ ｄｅｎｓａ Ｂｅｎｔｈ． ｗａｓ ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ ｔｈｒｏｕｇｈ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｔｅｓｔ； ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｗａｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ． Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｐｒｏｃｅｓｓ ｏｆ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｗａｓ ６０％ ｅｔｈａｎｏｌ ａｔ ８０℃， ｔｈｉｒｔｙ－ｆｏｌｄ ｓｏｌｖｅｎｔ， ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ｆｏｒ ２ ｈ； ａｎｄ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ｒａｔｉｏ ｃｏｕｌｄ ｒｅａｃｈ １３．７２％ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ｔｈｉｓ ｐｒｏｃｅｓｓ． Ｅｔｈａｎｏｌ ｒｅｆｌｕｘｉｎｇ ｗａｓ ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｗａｙ ｆｏｒ ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ａｎｄ ｗａｓ ｔｒｕｓｔｗｏｒｔｈｙ； ｗｈｉｌｅ ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｓｉｍｐｌｅ ａｎｄ ｐｒａｃｔｉｃａｂｌｅ ｆｏｒ ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｅｌｓｈｏｌｔｚｉａ ｄｅｎｓａ Ｂｅｎｔｈ.； tｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ； oｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｄｅｓｉｇｈ； dｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ

密花香薷（Ｅｌｓｈｏｌｔｚｉａ ｄｅｎｓａ Ｂｅｎｔｈ．）为唇形科（Ｌａｂｉａｔａｅ）香薷属（Ｅｌｓｈｏｌｔｚｉａ）植物，一年生草本植物，别称咳嗽草、野紫苏、臭香茹、蟋蟀巴，主要分布在河北、山西、陕西、甘肃、青海、四川、云南、、新疆等地，生于林缘、高山、草甸、林下、河边及山坡荒地，海拔２ ８００～４ １００ ｍ的范围内［１］。其作为正品香薷的代用品［２］，全草入药，具有治疗夏季感冒、发热无汗、中暑急性胃炎、胸闷、口臭、小便不利之功效［３］，藏医用全草治培根病、胃病、梅毒性鼻炎、喉炎及寄生虫病，并外用治脓疮及皮肤病［４］。目前关于密花香薷总黄酮的研究基本未见报道，近年来对黄酮类化合物的药理作用研究较多，发现其具有抗心脑血管病、抗氧化、镇痛、抗病毒、抗肿瘤、免疫调节等作用［５］。为了研究密花香薷中总黄酮的功效，开发并保护密花香薷植物资源，我们对其总黄酮的提取工艺进行了研究，并测定了不同地区密花香薷中总黄酮的含量，为其进一步开发利用提供了科学依据。

１材料与方法

１．１材料

１．１．１密花香薷密花香薷全草，分别采自青海湟源、海北、海东３个地区并经青海大学韦梅琴副教授鉴定，晾干后将全草用粉碎机粉碎，过６０目筛备用。提取工艺选取湟源地区的密花香薷粉末进行试验。

１．１．２试剂无水乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠等试剂皆为分析纯。

１．１．３仪器７２２型分光光度计（上海欣茂仪器有限公司）；ＨＨ－４数显恒温水浴锅（国华电器有限公司）；ＭＥ２３５３型电子天平（北京赛多利斯仪器有限公司）；芦丁标准品（国药集团化学试剂有限公司，批号：Ｆ２００９１２０４）。

１．２密花香薷中总黄酮的测定

１．２．１标准溶液的配制精密称取烘干至恒重的芦丁标准品１９ ｍｇ，用６０％乙醇溶液溶解定容至５０ ｍＬ容量瓶中，摇匀，即得浓度为０．３８ ｍｇ／ｍＬ 的芦丁标准溶液。

１．２．２标准曲线的绘制分别移取上述芦丁标准液０．５、１．０、１．５、２．０、２．５、３．０、３．０、４．０、４．５、５．０ ｍＬ至１０个５０ ｍＬ容量瓶中，再依次加入６０％乙醇４．５、４．０、３．５、３．０、２．５、２．０、１．５、１．０、０．５、０ｍＬ，加入５０ ｇ／Ｌ亚硝酸钠溶液１．５ ｍＬ，摇匀，静置６ ｍｉｎ；再加入１００ ｇ／Ｌ硝酸铝溶液１．５ ｍＬ，摇匀，静置６ ｍｉｎ；再加４０ ｇ／Ｌ氢氧化钠溶液２０ ｍＬ，用６０％乙醇稀释至刻度，摇匀。１０ ｍｉｎ后以６０％乙醇调零，在５１０ ｎｍ处测定吸光度。以吸光度（Ａ）为纵坐标，芦丁浓度（Ｃ）为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程为：＝１．２０４ ８Ｃ－０．００５ ７，ｒ＝０．９９９ ６。在０．０３８～０．３８ ｍｇ／ｍＬ范围内线性关系良好。

１．２．３精密度试验精密吸取芦丁标准品溶液４ ｍＬ，置于５０ ｍＬ容量瓶中，按１．２．２项操作，６０％乙醇调零，５１０ ｎｍ处测定吸光度，６次重复，ＣＶ＝１．６８％，表明仪器精密度良好。

１．２．３稳定性试验将同一待测密花香薷提取液按１．２．２项操作，分别于０、０．５、１．０、１．５、２．０ ｈ后测定吸光度，ＣＶ＝１．４１％，表明各供试品溶液在２．０ ｈ内能够保持稳定。

１．２．４重复性试验将同一批密花香薷粉末，按１．２．２项操作，测定吸光度，重复６次，结果CV＝２．１４％，表明该测定方法重复性良好。

１．２．５回收率试验精密称取已知含量的密花香薷粉末５份，分别加入精密称定的芦丁标准品适量，按１．２．２项操作，测定吸光度，计算回收率，结果平均回收率为１０１．９６％，ＣＶ＝２．４１％，表明该方法准确可靠。

１．２．６密花香薷中总黄酮的含量测定精密称取密花香薷粉末３ ｇ，置于２５０ ｍＬ圆底烧瓶中，以不同的条件进行提取。定容后以芦丁为标样，按１．２．２项操作，６０％乙醇调零，于５１０ ｎｍ处测吸光度，根据回归方程测定总黄酮含量，计算提取率。

总黄酮质量（mg）=总黄酮含量×溶液体积

总黄酮提取率（%）=（总黄酮质量/药粉质量）×100

２结果与分析

２．１单因素试验结果分析

２．１．１提取温度对总黄酮提取率的影响精密称取密花香薷粉末３ ｇ，置于２５０ ｍＬ圆底烧瓶中，加入６０％乙醇６０ ｍＬ，分别在不同的温度（２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０℃）下水浴回流１ ｈ，提取１次。过滤提取液，定容后测定总黄酮的含量，计算提取率。结果见图１。由图１可知，随着温度的升高，提取率也随之升高，当温度达到８０℃时，提取率达到最大值，９０℃时，提取率反而下降。

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２．１．２乙醇体积分数对总黄酮提取率的影响精密称取密花香薷粉末３ ｇ，置于２５０ ｍＬ圆底烧瓶中，分别加入不同体积分数的乙醇（１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％）６０ ｍＬ，６０℃下水浴回流１ ｈ，提取１次。过滤提取液，定容后测定总黄酮的含量，计算提取率，结果见图２。由图２可以看出，乙醇体积分数达到６０％时总黄酮提取率最高，随后则逐渐下降。

２．１．３提取时间对总黄酮提取率的影响精密称取密花香薷粉末３ ｇ，置于２５０ ｍＬ圆底烧瓶中，加入６０％乙醇６０ ｍＬ，６０℃下水浴回流提取１次，提取时间分别为１、２、３、４、５ ｈ。过滤提取液，定容后测定总黄酮的含量，计算提取率，结果见图３。由图３可以看出，提取时间为２ ｈ时，提取率最高。再增加提取时间并不利于提取率的提高。

２．１．４料液比对总黄酮提取率的影响精密称取密花香薷粉末３ ｇ，置于２５０ ｍＬ圆底烧瓶中，分别加入６０％乙醇１５、３０、４５、６０、７５、９０ ｍＬ，６０℃下水浴回流１ ｈ，提取１次。过滤提取液，定容后测定总黄酮的含量，计算提取率，结果见图４。由图４可以看出，料液比为１∶２５（W/V，g∶mL，下同）时提取率最高。

２．２正交试验结果分析

以单因素试验为基础，对影响密花香薷中总黄酮提取率的因素：提取温度、乙醇体积分数、提取时间、料液比进行Ｌ９（３４）正交试验，因素与水平设计见表１，正交试验结果见表２。由表２可知，４个因素对总黄酮提取率的影响大小依次为Ａ＞Ｂ＞Ｄ＞Ｃ，４个因素的最佳组合为６０％乙醇，料液比１∶３０，８０℃水浴回流２ ｈ，密花香薷中总黄酮的提取率可达１３．７２％。

２．３验证试验结果

根据以上所选择的最佳提取工艺，提取３个地区的密花香薷，进行总黄酮的含量测定，结果见表４，结果表明该工艺条件下总黄酮的提取率比较稳定。

３结论

通过单因素试验和正交试验结果，确定密花香薷中总黄酮的最佳提取工艺参数为提取温度８０℃，乙醇体积分数６０％，料液比１∶３０，提取时间２ ｈ，此条件下提取率可达１３．７２％；乙醇具有选择性好、渗透性强、浸出率高、毒性小等优点，因此选取乙醇作为密花香薷总黄酮的提取溶剂；曾将回流提取与超声提取和乙醇冷浸提取进行比较，结果发现回流提取比另两种方法较完全彻底，因此选用回流提取作为提取方法。

参考文献：

［１］ 中国科学院中国植物志编辑委员会．中国植物志（第６６卷）［Ｍ］．北京：科学出版社，１９７７．

［２］ 中国科学院西北高原生物研究所．藏药志［Ｍ］．西宁：青海人民出版社，１９９１．１１．

［３］ 张继，王振恒，姚 健，等．密花香薷挥发油成分的分析研究［Ｊ］．草业学报，２００５，１４（１）：１１２－１１６．

［４］ 青海省藏医药研究所，青海省药品检验所．中国藏药［Ｍ］．上海：上海科学技术出版社，１９９６．１０．

［５］ 蔡丹昭，刘华钢，韦琦．番石榴叶总黄酮提取工艺研究［Ｊ］．时珍国医国药，２００９，２０（１）：４４－４５．

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