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鸭茅根际溶磷菌溶磷性和分泌植物生长素能力的研究

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摘要: 从鸭茅根际不同部位分离具有溶磷能力的菌株,通过溶磷圈法筛选出9株溶磷能力较强的菌株进行深入研究。利用钼蓝比色法测定其溶磷能力。结果表明:磷酸钙为磷源时溶磷量在109.47 ~ 270.40 μg/mL,磷酸铝为磷源时溶磷量在0.00 ~ 25.86 μg/mL。以磷酸钙为磷源进行动态研究,2次测定的溶磷量不同,测定最佳时间为9~12 d。菌株分泌IAA测定结果显示,大部分菌株具有分泌IAA能力,加前体物质色氨酸时菌株分泌IAA能力较未加时大,菌株Da11、Da15在无前体物质条件下分泌IAA量分别达到10.60、10.69μg/mL。综合菌株的溶磷、分泌IAA,认为Da8、Da11、Da15、Da19和Da20等5个菌株具有较大的应用潜力。

关键词: 溶磷菌;溶磷能力;IAA;鸭茅

中图分类号: Q 936文献标识码: A文章编号: 10095500(2012)06002308

微生物是土壤肥力的核心,土壤中微生物不仅数量巨大,而且种类极多,许多微生物对土壤氮、磷和钾等养分的转化和供给起非常重要的作用[1]。施入土壤中的可溶性P肥易与土壤中的Fe3+,Ca2+,Al3+等结合而很难被作物吸收利用,成为作物营养限制因素[2]。提高土壤磷素有效性的重要途径之一是充分利用土壤中的溶磷微生物[3]。这样既能满足作物对磷元素的需求,又能减少磷肥的施用量,也会渗透到地下水中的磷相应减少,同时溶磷菌可分泌促生长活性物质促进植物的生长,是理想的生物肥料。朱培淼等[4]研究发现,接种溶磷菌剂后,作物鲜重、干重、株高、根长以及吸收磷量和根际土壤有效磷含量均有不同程度的增加。

鸭茅(Dacylis glomerate)又名鸡脚草、果园草,是禾本科鸭茅属多年生草本植物,产于我国西南、西北各省和欧亚大陆温带地区,在贵州的野生种主要分布于毕节和六盘水地区,是欧亚温带地区重要的牧草之一,也是贵州人工草地利用最多的牧草[5,6],营养价值与“牧草之王”紫花苜蓿接近,适合各种畜禽饲喂[7]。研究通过对鸭茅根际溶磷菌的分离,筛选出具有较高溶磷、分泌植物生长素等功能的优良菌株,以期为后续研究适合禾本科牧草微生物接种剂或菌肥的研制与应用提供理论依据。

1材料和方法

1.1根际土壤样品采集

2011年5月,在贵州省独山县贵州省草业研究所试验地,以5点法对鸭茅根际不同距离采集4个土壤,即距根系较远的土壤(NRS),根表土壤(RS),根面土壤(RP)和根内(HP),装入标记好的无菌采样袋,低温保存并立即带回实验室进行溶磷菌分离。采样地土壤化学性质见表1。

1.2菌株分离及初筛

选用蒙金娜有机培养基(含蛋黄卵磷脂EYPC)和PKO无机培养基(含磷酸钙)分离菌株,保存用LB培养基,组成及配方见文献[8,9]。将分离出的具有溶磷圈的菌株分别点接种于PKO及蒙金娜平板上,每培养皿4个点,28 ℃恒温培养3、6、9和12 d,测量溶磷圈

1.4溶磷能力测定

将D/d比值较大的菌株用LB液体培养基制成菌悬液(浓度108 cell/mL,波长660 nm,OD值0.5)按菌悬液与培养基比例为1∶100接种于PKO液体培养基中,每菌株3次重复,对照接种无菌水。接种液置于28 ℃、150 r/min摇床培养8 d,10 000 r/min 4 ℃离心10 min,取上清液1 mL于100 mL容量瓶中,同时加7.5 N硫酸钼锑抗混合显色剂5 mL和0.5 mol/L碳酸氢钠溶液9 mL并定容摇匀,30 min后经TU1901双光束紫外分光光度计(波长700 nm)测定吸光度,计算培养液磷含量(μg/mL,为扣除对照的值)[10]。

2011年8月进行测定,磷源用磷酸钙、磷酸铝(AlPO4)为市售分析纯试剂。