HPLC法测定中草药防腐剂中有效成分的含量
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【摘要】目的通过该试验，为有效控制该防腐剂的质量提供理论依据。方法建立高效液相色谱法（hplc）测定中草药防腐剂中有效成分草乌药材中三种生物碱的含量测定方法。结果结果表明在一定的线性关系内表现良好，试验的精密度、重现性好，数据可靠。结论该方法简单、灵敏、准确，能有效测定中草药防腐剂中生物碱的含量。
【关键词】中草药防腐剂；高效液相色谱法；有效成分；含量测定
中草药的质量评控是现代化中药研究的主要内容。为了测定中草药的活性成分与功能成分，就需要对其测定方法进行相关研究。近年来，高效液相色谱法目前已经逐渐成为能够取代旧的测定方式的进行中草药成分含量测定并进行相关功能分析的新方法，这种方法测定时速度相对比较迅速，结果也更加精准，效率高，而且适用于绝大多数中草药成分的测定，是一种值得取用的好方法[1]。高效液相色谱法方法总的来说可以分为两类，一类叫做制备型高效液相色谱法，另一类则是分析型高效液相色谱法。分析型高效液相色谱法主要机理是通过对样品进行分析，明确样品中的各种成分，并且测定其含量，制备型的是通过试验，按一定的目的，得到所需的产品。
1试验材料与试验方法
1.1试验仪器Shimadzu高效液相色谱仪：产自日本岛津，SCL-10Avp系统控制器，SPD-M10Avp紫外检测器，7725i型手动进样阀，LC-10Atvp输液泵，CTO-10ASVP柱温箱；KQ5200DB型数控超声清洗器，由昆山市超声仪器有限公司生产。全自动电子分析天平，由北京赛多利斯仪器系列有限公司生产等。
1.2试验材料与试验试剂
1.2.1试验材料复方三七丸样品，人参皂苷Rg1的对照品，人参皂苷Rb1的对照品，三七皂苷R1的对照品。
1.2.2试验试剂乙腈，色谱纯；超纯水；其它的试剂均为国产分析纯。
1.3试验方法
1.3.1样品的制备样品的制备方法：取经过减压干燥的样品，粉碎，过40目筛，取粉末50g，室温下用乙醇浸提3次，合并滤液，滤网过滤。用甲醇溶液定容，配制成一定的浓度，摇晃均匀，制成样品溶液。同理，制得对照品溶液。
1.3.2色谱条件的选择色谱柱：ZORBAX Eclipse XDB-C18（4.6mmID×250mm）；流动相：甲醇-0.1%三乙胺（80：20）；流速1ml/min；柱温30℃；检测波长：230nm。该条件下，对照品及样品的保留时间分别为4.8min，6.1min和9.7min。
2试验结果与分析
2.1线性范围试验将对照品溶液配制成不同的浓度梯度：0.2、0.5、1、2、5、10μg/ml。取配制好的溶液在已经优选出来的色谱条件下，分别进样，进样量为5μl。以峰面积为横坐标，浓度为纵坐标，绘制标准曲线。线性方程为y=3.774×10-5x-0.448，r=0.997，表明草乌中的生物碱的浓度与相应峰面积在0.2-10μg/ml范围内呈良好的线性关系。
2.2精密度试验将对照品配制成不同的浓度梯度，分别取浓度为0.2、1、10μg/ml的对照品溶液各5μl进样后进行分析。按照精密度试验的具体操作，在相同的条件下，将不同浓度的溶液配制成为3个样品，每一个样品进样3次，计算不同样品浓度的测定值，计算相对标准偏差，得精密度。精密度（RSD%）介于0.65%-2.73%之间，准确度（RE%）介于1.30%-2.50%之间。具体结果见表1。
2.3回收率试验采用加样回收法测定回收率，按上述色谱条件测定。根据方法要求，分别加好各个试剂，得到试验数据。具体结果见表2。
2.4稳定性试验配制一个空白对照品（5μg/ml）和一个待测样品溶液，在其他因素一定时分别在0℃-4℃和26℃-29℃两种条件下存放并进行观察记录。在0℃-4℃存放条件下分别在第0d、2d、4d、6d、8d时测定一次峰面积；在26℃-29℃存放条件下分别在第0h、2h、6h、12h、24h、48h、72h、96h、144h时测定一次峰面积。结果按照草乌中的生物碱的含量不低于90%计。数据表明在0℃-4℃的存放条件下，草乌中的生物碱对照品溶液和待测样品溶液在6d内稳定；在26℃-29℃的存放条件下，草乌中的生物碱对照品溶液和待测样溶液在24h内稳定。从稳定性试验的测定结果来看，我们可以得出以下结论：在0℃-4℃的存放条件下，草乌中的生物碱对照品溶液和待测样品溶液在6d内稳定；在26℃-29℃的存放条件下，草乌中的生物碱对照品溶液和待测样溶液在24h内稳定。这是由于草乌中的生物碱具有见光易分解变质的不稳定性有关。因此要注意将待测样品溶液和草乌中的生物碱对照品溶液存放在棕色容量瓶中，在冰箱中保存。测定时应做到现配现用。
2.5试验结果按照试验方法准确称取试验样品，进行含量的测定。含量结果见表3。
3试验结论
本文简单介绍了草乌药材中的生物碱的含量测定方法，采用高效液相色谱法对其进行测定，对试验的精密度、重现性、回收率、稳定性等进行了考察，试验方法严谨，结果可靠。对不同的有效抑菌成分进行测定，得到草乌中防腐剂有效成分的含量。
4结语
防腐剂的主要功能是能够抑制微生物的生长和繁殖，进而延长食品的贮存时间。防腐剂在食品工业中的应用较为普遍。对于中药的研究，多研究其药效成分，而其很重要的防腐剂的成分研究较少，尤其是对于草乌药材中的防腐剂成分含量，研究较为少见。
中草药技术的研究，从二战以来，取得了很大的进步，有了很多学术界和临床医学上的显著成就。对于中草药的研究，目前较为新型科学的方法就是高效液相色谱法，该方法测定方法简单，试验结果明确，而且重复性、稳定性效果较好，试验结果可靠，方法设计严格合理，对于中草药防腐剂成分含量的研究，具有重要的指导意义。
参考文献
[1]严红.HPLC法同时测定中药多种有效成分含量的应用[J].天津药学，2012，22（1）：67-69.
[2]郝学宁，郝嫱嫱，刘雪莲.HPLC法测定果蔬中维生素C[J].农业基础科学，2011（3）：30-31.