HPLC法测定复方逍遥合剂中黄芩苷的含量

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[摘要] 目的：建立复方逍遥合剂中黄芩苷的含量测定方法。方法：采用hplc法，色谱柱Calesil-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相：甲醇∶0.1%磷酸（47∶53），检测波长：280 nm。结果：黄芩苷进样量在0.08～0.80 μg范围内呈良好的线性关系(r=0.999 9 )，低、中、高三种浓度的平均回收率为99.59%、100.22％、100.40%，RSD分别为0.75%、2.58%、0.86%。结论：本法简便、准确，重复性好，可用于该产品的质量控制。

[关键词] 复方逍遥合剂；HPLC；黄芩苷

[中图分类号] R927.72 [文献标识码] A[文章编号]1673-7210（2011）03（b）-058-03

Content determination of Baicalin for Compound Xiaoyao Oral Solution by HPLC

ZHANG Wubiao, SHEN Yang, LIU Zhaokang, WANG Shendong

Children′s Hospital of Shanghai, Shanghai Children′s Hospital Affiliated of Shanghai Jiaotong University, Shanghai 200040, China

[Abstract] Objective: To establish a method for determination the content of Baicalin in Compound Xiaoyao Oral Solution．Methods: Calesil-C18 column (4.6 mm×250 mm，5 μm) was used，Mobile phase was methanol-0.1% phosphoric acid (47∶53)，Detection wavelength was 280 nm． Results: Baicalin sample size located 0．08-0.80 μg，and favourable linear correlation (r=0．999 9) was showed． The average recovery rates of low, moderate and high concentration were 99.59%, 100.22％,100.40% with RSD of 0.75%, 2.58%, 0.86%, respectively. Conclusion: The method is convenient and accurate. Meanwhile, it also has good reproducibility, may be used to quality control of Baicalin．

[Key words] Compound Xiaoyao Oral Solution; HPLC; Baicalin

复方逍遥合剂为我院自制制剂（沪药制字Z04090765），由黄芩、当归、郁金、陈皮、香附、柴胡、白芍、柴胡、栀子、茯苓、生牡蛎 、黄柏、白术等十几味中药组成。具有舒肝理气、清热活血、软坚化痰等功能，用于调理肝郁痰阻型女童早期性早熟，运用临床多年来效果显著。其中黄芩为处方主药，黄芩苷是黄芩主要有效成分。为控制产品质量，确保临床疗效，参考文献[1-3]，本文采用HPLC法对制剂中黄芩苷含量进行定量分析，方法简便、准确、重复性好，可用于该产品的质量控制。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 1100高效液相色谱仪，包括Agilent G1311A 四元泵（Quatpump），Agilent G1322A 真空在线脱气机（Degrasser），Agilent G1313A 自动进样器（ALS），Agilent G1315B DAD二级管阵列检测器，Agilent chemstation system（安捷伦化学色谱工作站）；电子天平（Sartorius，d=0.01 mg）；超声提取器（SB1000，宁波新芝生物科技股份有限公司）。

1.2 试药

供试品复方逍遥合剂 （上海市儿童医院）；黄芩苷对照品（中国药品生物制品检验所，批号：110715-200815）；甲醇为色谱纯，水为重蒸水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件[4]

色谱柱Calesil-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）； 流动相：甲醇-0.1%磷酸（47∶53）；检测波长：280 nm；柱温：30℃；流速：1 ml/min；理论板数按黄芩苷峰计算不低于2 000。

2.2 溶液制备[5-6]

2.2.1 对照品溶液制备精密称取在五氧化二磷真空干燥24 h的黄芩苷对照品0.004 00 g，加甲醇8 ml，超声20 min，放冷，用甲醇定容到10 ml，再精密吸取1 ml于10 ml量瓶中，用甲醇定容，即得对照品浓度为0.04 mg/ml。

2.2.2 供试品溶液制备准确量取样品合剂2 ml于100 ml量瓶中，加80 ml甲醇，超声20 min，放冷，用甲醇定容至刻度。再精密吸取4 ml于25 ml量瓶中，用甲醇定容至刻度，0.45 μm微孔滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液，即得。

2.2.3 阴性对照溶液制备按处方比例和制法，制成缺黄芩的阴性样品，再按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。

2.3 专属性试验

按“2.1”项下色谱条件，分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各10 μl，注入液相色谱仪中测定。结果显示，供试品色谱在与对照品色谱相应的位置上有一相同保留时间的色谱峰；阴性对照溶液在此保留时间处无色谱峰。表明在实验条件下，其他药材成分对测定结果无干扰，见图1。

2.4 线性关系考察

取对照品溶液，分别进样2、4、8、12、20 μl，按“2.1”项下色谱条件测定，以黄芩苷对照浓度x为横坐标，峰面积y为纵坐标，绘制标准曲线并进行回归计算，得回归方程为：y=3.32×10-7x+3.58×10-7（r=0.999 9，n=5）。表明黄芩苷进样量在0.08～0.80 μg范围内与峰面积呈良好线性关系。

2.5 精密度试验

精密吸取对照品溶液，连续进6针，进样量10 μl，按“2.1”项下色谱条件测定，结果显示，RSD=0.64％（n=6），说明仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验

精密吸取同一份供试品溶液，分别在0、2、4、6、8、12 h进样，每个时间段连续进样2针，进样量10 μl。按“2.1”项下色谱条件测定，RSD=3.04％，表明供试品溶液在12 h内基本稳定。

2.7 重复性试验

分别精密量取本品（批号：20100901） 按“2.2.2”项下方法平行制得供试品溶液6份，每份进样2针，进样量10 μl。按“2.1”项下色谱条件测定，结果样品中黄芩苷的平均含量为3.23 mg/ml，RSD为1.87％（n=6）。

2.8 加样回收试验

取已知含量的样品（批号：20100901，3.23 mg/ml）0.44 ml于25 ml量瓶中，精密加入0.4 mg/ml的对照品溶液2.2、3.3、4.4 ml后，加入一定量的甲醇，超声20 min，放冷，用甲醇定容至刻度。精密吸取1 ml于10 ml量瓶中，用甲醇定容，配制成低、中、高三种浓度的溶液，同时制备三份样品。每份样品重复进样2针，每针10 μl，按“2.1”项下色谱条件测定，计算黄芩苷的回收率。结果表明黄芩苷的回收率良好，结果见表1。

表 1 加样回收率试验（n=3）

2.9 样品含量测定

取样品，按“2.2.2”项下方法分别制成供试品溶液。吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μl，按“2.1”项下色谱条件测定，以外标法计算黄芩苷的含量，结果见表2。

表 2 三批样品黄芩苷含量测定结果

3 讨论

黄芩为处方主药，黄芩苷是黄芩的主要有效成分，以该成分的含量测定来控制产品质量，有助于保证临床疗效；本文所建立的含量测定方法，简便、准确、重现性好，可用于合剂的质量控制。

黄芩苷能溶于甲醇、乙醇和水，试验中分别采用了不同浓度的甲醇、乙醇溶液作为溶剂，结果以甲醇提取率较高，干扰成分少；提取方法选择时，我们以甲醇作为供试品提取溶剂，分别考察了加热回流提取以及不同时间的超声提取率，结果表明超声提取20 min提取率最佳，方法简便，结果重现性好，故确定为甲醇超声提取20 min。

中药的疗效是多种活性成分共同作用的结果，仅对其中的一个或几个成分加以控制，难以全面把握中药及制剂的质量、疗效和稳定性，本实验仅对合剂中黄芩苷含量进行测定，其他活性成分的控制还有待进一步研究。

[参考文献]

[1]李卓,危当恒.咽喉炎合剂中黄芩苷的稳定性考察[J].中国药房,2008,19(36):2845-2846.

[2]张先平,李桃荣.高效液相色谱法测定肤康合剂中黄芩苷的含量[J].中国医院药学杂志,2008,28(22):1967-1968.

[3]赵玉佳,孟祥丽,鞠宝玲.HPLC测定双黄连口服液中黄芩苷的含量测定[J].中国实验方剂学杂志,2009,15(4):90.

[4]国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京:化学工业出版社,2005:211.

[5]舒德忠,郑小敏,盛明智.高效液相色谱法测定消炎止咳糖浆中黄芩苷的含量[J].中国药师,2008,11(8):947-948.

[6]林冬杰,梁威.HPIC法测定感冒止咳糖浆中黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素的含量[J].中国药师,2009,12(8):1044-1046.

（收稿日期：2011-01-12）

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