HPLC法测定阿戈美拉汀片的含量

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摘 要：目的 建立高效液相色谱法测定阿戈美拉汀片含量的方法。方法 采用Welchrom-C18（5？m，4.6*250mm）色谱柱，以0.01mol/L的磷酸氢二钠溶液（用稀磷酸调节pH值至3.0）-甲醇-乙腈（55：25：20）为流动相，流速为1.0ml/min，检测波长为229nm，柱温为30℃。结果 线性回归方程为：A=266138C+94983，r=0.9997（n=6），阿戈美拉汀在4.04～15.15μgoml-1范围内线性关系良好，平均回收率为99.60%（n=9）。结论 该方法专属性强、重复性好，可用于阿戈美拉汀片的含量测定。

关键词：阿戈美拉汀片 含量测定 高效液相色谱法

阿戈美拉汀片（Agomelatine Tablets）是法国施维雅药厂（Les Laboratoires Servier Industrie）研制的新一代抗抑郁药，于2009年6月在欧洲首次上市。阿戈美拉汀有抗抑郁、抗焦虑、调整睡眠节律及调节生物钟的作用，可在不影响白天活动的情况下改善夜间睡眠状况，其不良反应少，具有广阔的市场前景。为有效控制产品质量，本文采用高效液相色谱（hplc）法[1]，参考有关文献[2]对阿戈美拉汀片进行含量测定，结果该方法专属性强、重复性好，可用于阿戈美拉汀片的含量测定。

一、仪器与试药

高效液相色谱仪（岛津，SPD-20AT检测器，LC-20AT泵），UV2450紫外-可见分光光度计（岛津）。

阿戈美拉汀对照品（山东方明药业集团股份有限公司，批号：120301J，含量：99.7%）；阿戈美拉汀片（山东方明药业集团股份有限公司，批号：20120501、20120502、20120503，规格：25mg）；甲醇、乙腈、磷酸为色谱纯；磷酸氢二钠为分析纯，水为纯化水。

二、方法与结果

1.色谱条件

采用Welchrom-C18柱（4.6*250mm，5μm），以0.01mol/L的磷酸氢二钠溶液（用稀磷酸调节pH值至3.0）-甲醇-乙腈（55：25：20）为流动相，流速为1.0ml/min，检测波长为229nm，柱温为30℃；进样量：20μl。

2.溶液的配制

精密称取阿戈美拉汀对照品适量，加流动相溶解并稀释制成每1ml含10μg的溶液，作为对照品溶液。取阿戈美拉汀片研细，精密称取适量（约相当于阿戈美拉汀25mg），置100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液2ml，置50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

3.方法学考察

3.1 测定波长的选择

取阿戈美拉汀对照品适量，用流动相溶解稀释制成每1ml含10μg的溶液，照紫外-可见分光光度法在200～400nm范围内扫描，结果阿戈美拉汀在229nm处有最大吸收，故选择229nm为测定波长。

3.2专属性考察

取阿戈美拉汀合成工艺中所需起始原料及中间体适量，用流动相溶解，取适量加入到阿戈美拉汀对照品中，用流动相稀释制成含起始原料及中间体各1%的混合溶液，量取20μl注入色谱仪，记录色谱图，结果阿戈美拉汀与起始原料及中间体的分离度均符合规定。

破坏性试验：取阿戈美拉汀片样品，经酸、碱、氧化、高温、光照破坏后，按“1”项下色谱条件进行测定，结果各降解产物与主峰分离度良好。

辅料溶液干扰试验：按处方取空白辅料适量，加流动相溶解并稀释制成约相当于含阿戈美拉汀10μg/ml的溶液，按“1”项下色谱条件进行测定，结果空白辅料不干扰含量测定。

3.3 线性关系试验

取阿戈美拉汀对照品约25mg，精密称定，置50ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为储备溶液，精密量取0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml、1.4ml，分别置50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。以峰面积（A）为纵坐标，以浓度（C）为横坐标，进行线性回归，得回归方程：A=266138C+94983，r=0.9997（n=6），结果表明阿戈美拉汀在4.04～15.15μg/ml浓度范围内线性关系良好。

3.4 精密度试验

照“2”项下方法配制对照品溶液，取20μl，连续进样6次，RSD为1.1%，表明本方法精密度良好。

3.5 稳定性试验

照“2”项下方法制备供试品溶液，室温下在0、2、4、6、8小时分别测定。结果，供试品溶液在室温条件下放置8小时内，RSD为1.2%，表明供试品溶液在室温条件下放置8小时内稳定性良好。

3.6 定量限

取阿戈美拉汀对照品适量，用流动相溶解稀释至适当浓度，20？l进样，使其主峰高约为噪音峰高的10倍，此时阿戈美拉汀的进样浓度为0.024μg/ml，阿戈美拉汀的定量限为0.48ng。

3.7 回收率试验

称取阿戈美拉汀对照品20mg、25mg、30mg各三份，置100ml容量瓶中，按处方分别加入对应的辅料，用流动相溶解稀释制成相当于标示量80%、100%、120%的溶液，考察阿戈美拉汀的回收率，结果平均回收率为98.8%，RSD为1.45%（n=9）。

4.样品测定

照“2”项下方法制备对照品溶液和供试品溶液，分别精密量取20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，量取峰面积，按外标法计算含量，结果三批样品（20120501、20120502、20120503）含量分别为101.6%，102.0%，100.9%。

三、 讨论

王毓菁[2]等人采用甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钠溶液（40：60）作流动相，该色谱条件下阿戈美拉汀保留时间较长（约21min），当使用0.01mol/L的磷酸氢二钠溶液（用稀磷酸调节pH值至2.9）-甲醇-乙腈（45：35：20）为流动相时，保留时间缩短（约9min），而阿戈美拉汀塔板数及分离性能仍能达到要求。

参考文献

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版（二部）[S].北京：中国医药科技出版社，2010：765-768.

[2] 王毓菁等.HPLC测定片剂中阿戈美拉汀的含量[J].中国现代应用药学，2012，29（7）：652-655.

作者简介：付建，男，山东菏泽，助理工程师，地址：山东省菏泽市东明县黄河路方明段。