模拟中医病因所致脾气虚、脾阳虚大鼠模型的证候比较研究

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摘 要：目的：以多因素复合法分别建立脾气虚证、脾阳虚证大鼠模型，对两组模型大鼠进行比较研究以探讨脾气虚、脾阳虚的证候实质与差异。方法：动物随机分为正常组、脾气虚组和脾阳虚组，以相应造模方法进行模型复制，并以四君子汤和理中汤进行药物反证。结果：脾气虚和脾阳虚大鼠宏观证候计分高于正常组（P＜0.01），且以脾阳虚组为著（P＜0.01）；两组血清GAS均低于正常组（P＜0.01）；脾气虚组的血浆MTL低于正常组（P＜0.01），而脾阳虚组高于正常组（P＜0.01）；经健脾中药干预后，各项脾虚症状和体征逐渐缓解或消失；血清GAS、血浆MTL紊乱回复。结论：多因素复合法复制的脾气虚、脾阳虚证大鼠模型符合证候的生物学特征，稳定性良好，且经得起药物反证；脾气虚、脾阳虚大鼠的脾虚宏观证候呈递进关系；血浆MTL在脾气虚和脾阳虚中变化趋势不一致，可作为鉴别两证的微观指标。

关键词：多因素；脾气虚证；脾阳虚证；大鼠模型；血清GAS；血浆MTL

中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1673-7717(2012)01-0104-04

Comparative Study on Model Rats with Spleen-qi Deficiency Syndrome and Spleen-yang Deficiency Syndrome

WANG Ying, ZHENG Xiaowei, LI Xiuyue

(Zhejiang Chinese Medical University,Hangzho 310053,Zhejiang,China)

Abstract:Objective: By making a comparative study on rats with spleen-qi deficiency syndrome and spleen-yang deficiency syndrome, to seek the objective property of these two syndromes and their differences. Methods: Animals were randomly divided into three groups in terms of control group, group of spleen-qi deficiency syndrome and spleen-yang deficiency syndrome. Model rats were induced by combination of multi-methods and testified with corresponding medicinals (with Sijunzi Decoction for spleen-qi deficiency syndrome and Lizhong Decoction for spleen-yang deficiency syndrome). Results: Scores of symptoms and signs in two model groups were significantly higher than those in control group (P

Key words:Multi-methods; spleen-qi deficiency syndrome; spleen-yang deficiency syndrome; model rats; serum GAS; plasma MTL

脾气虚和脾阳虚是临床最为常见的脾虚证型。气虚往往是阳虚的初期阶段，而阳虚则是在气虚证的基础上进一步加重，产生虚寒表现。既然两者在程度上存在递进关系，则有必要将两者进行比较研究。关于脾虚证候实质的研究虽然开展诸多，但多侧于单一证型病理变化的研究，对于它们之间的比较研究，报道较少。本研究模拟中医病因，以三因素复合法分别建立脾气虚证、脾阳虚证两种动物模型，对模型动物的宏观证候、血清胃泌素、血浆胃动素进行比较研究，同时对模型动物以健脾中药反证，旨在从现代生物学角度探讨脾气虚、脾阳虚的证候实质与差异。

1材 料

1.1动物清洁级SD大鼠，雄性，体重（180±30）g，由“浙江中医药大学动物实验研究中心”提供。

1.2药物和试剂中药均购自浙江中医药大学中医门诊部。大黄制剂液：将生大黄饮片碎成粉，用蒸馏水浸泡，置于50℃水浴6h，去渣取汁。四君子汤组成药物：党参、白术、茯苓、甘草，按国家标准进行炮制后，提取加工成水剂，浓度为440g/L。理中汤组成药物：党参、干姜、炙甘草、白术，按国家标准进行炮制后，提取加工成水剂，浓度为400g/L。胃泌素、胃动素放免试剂盒购自北京北方生物技术研究所。

2方 法

2.1模型复制实验动物按设计要求随机分为正常组、脾气虚组和脾阳虚组。（1）脾气虚证造模方法[1]：①每日上午以3mL/只灌服大黄制剂液，日1次；②每日下午将动物负重――于大鼠尾根部缠绕重量为该大鼠体重10%的保险丝，放入水深50cm、水温28℃的水槽中游泳，以力竭为度――即大鼠鼻尖没入水面10s，日1次。③控制饮食，每日8：00am给食，8∶00pm撤食。（2）脾阳虚证造模方法：①②同上，③水温设定为4℃，余同。（3）正常组：每日上午以3mL/只灌服生理盐水，日1次，自由饮食。共14天。实验第15天，3组各随机取出8只，予相应处理。其余大鼠继续实验。

2.2给药实验第16天，正常组每日上午以3mL/只灌服生理盐水，日1次；脾气虚、脾阳虚大鼠每日上午以3mL/只分别灌服四君子汤和理中汤水煎剂，日1次。为便于分析统计，将进行药物干预的动物组更名为脾气虚治疗组和脾阳虚治疗组。自由饮食，共14天。实验第30天，处理全部实验动物。

2.3模型宏观证候评定标准参考《中药新药临床研究指导原则》[2]和《中医实验动物模型方法学》[3]，并结合大白鼠的生物学特征，拟定：（1）脾气虚证评定标准：①体重增加缓慢或下降，同比消瘦；②倦怠，懒动，扎堆；③便形质软或溏；④肛温无明显变化；⑤食量减少；⑥弓背，背毛无光泽；⑦游泳耐力下降。（2）脾阳虚证评定标准：①体重增加缓慢或下降，同比消瘦；②倦怠，懒动，扎堆，神疲（眼睛无神，反应不灵敏）；③肛温下降；④粪便溏泻，周围有污物；⑤食量减少；⑥弓背，背毛无光泽，沾有污物；⑦游泳耐力明显下降。（3）评分标准：①倦缩扎堆1分；②弓背，背毛无光泽1分；③食量减少1分；④体重减轻1分；⑤便形质软1分；⑥便形溏稀2分；⑦肛温下降2分；⑧游泳耐力下降1分；⑨游泳耐力明显下降2分；⑩久泄不止、脱肛2分。评分增加，提示症状加重。

2.4标本采集与指标检测实验动物根据实验设计分别于第15、30天分两次处理：动物于末次给药（或生理盐水）后，禁食不禁水12h，以10%水合氯醛0.3mL/100g腹腔麻醉，腹腔静脉取血，2mL血抗凝处理测血浆胃动素（MTL），3mL不做抗凝处理，用于测定血清胃泌素（GAS）。GAS、MTL用放射免疫法测定。

2.5统计学方法数据用“均数±标准差（±s）”表示，实验结果输入计算机，用SPSS 13.0统计软件进行处理。多组间均数比较采用单因素方差分析，组间均数两两比较采用q检验。

3结 果

3.1模型宏观证候评定脾气虚和脾阳虚造模大鼠均逐步出现便软、甚至稀溏，成群蜷缩，倦怠懒动，毛发枯槁，反应迟钝等情况。（1）体重增加量：造模前后各组大鼠体重均有不同程度的增长，正常组大鼠体重增加快，脾气虚组和脾阳虚组体重虽有增加，但缓慢，与同阶段的正常组比较，表现为消瘦，差异均有统计学意义（P＜0.01）；脾气虚组和脾阳虚组之间比较，以脾阳虚组增值更小；但其差异无统计学意义（P＞0.05）。（2）肛温：脾气虚组、脾阳虚组的肛温低于正常组，差异均有统计学意义（P＜0.01）；且脾阳虚组更低于脾气虚组，两者差异亦有统计学意义（P＜0.01）。（3）宏观证候计分：脾气虚组、脾阳虚组高于正常组，差异均有统计学意义（P＜0.01）；且脾阳虚组更高于脾气虚组，两者差异亦有统计学意义（P＜0.01），评分增加，提示症状加重，故以脾阳虚组的症状更为严重（图1~3，表1）。

3.2模型大鼠GAS、MTL水平造模14天后，两组模型动物的血清GAS和血浆MTL水平紊乱。（1）血清GAS：脾气虚组和脾阳虚组低于正常组，差异均有统计学意义（P＜0.01）；脾气虚组和脾阳虚组之间比较，虽然脾阳虚组更低，但差异无统计学意义（P＞0.05）。（2）血浆MTL：脾气虚组低于正常组，差异有统计学意义（P＜0.01）；而脾阳虚组高于正常组，差异亦有统计学意义（P＜0.01）；可见，脾气虚和脾阳虚对大鼠的血浆MTL影响不同（图4~5，表2）。 3.3补脾中药对脾虚宏观证候的影响经中药干预后，两个治疗组的各项脾虚症状和体征逐渐缓解或消失。（1）体重增加量：两个治疗组大鼠的体重增长加快，至实验第30天，其增长值与同阶段的正常组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。（2）肛温：治疗组大鼠的肛温逐渐恢复正常，至实验第30天，各组大鼠的肛温差异均无统计学意义（P＞0.05）。此外，两个治疗组之间的体重增加量和肛温差异亦无统计学意义（P＞0.05）。说明补脾中药对两组脾虚动物都有复建作用，从而亦反证了模型成功（表3）。

3.4补脾中药对GAS、MTL的影响经中药治疗后，两个治疗组大鼠的血液GAS、MTL紊乱得到改善。（1）血清GAS：两个治疗组大鼠的血清GAS水平均升高而接近于正常，差异无统计学意义（P＞0.05）；（2）血浆MTL：脾气虚治疗组大鼠的血浆MTL水平升高，而脾阳虚治疗组大鼠的血浆MTL水平下降，与正常组之间的差异无统计学意义（P＞0.05）。此外，两个治疗组之间的血清GAS、血浆MTL水平在治疗后差异亦无统计学意义（P＞0.05）。说明补脾中药对脾虚动物的胃肠激素紊乱有调节作用（表4）。

4讨 论

4.1脾虚模型的造模方法自1980年北京师范大学生物系报道脾虚证动物模型[4]以来，脾虚证动物模型研制工作取得了较大的成绩，其研究工作量居中医动物模型之首。郭氏[5]统计脾虚证的造模方法多达24种，如苦寒泻下法、偏食法、饮食失节法、耗气破气法、利血平法等，但是大部分造模方法在选用上存在着争议。

中医证候动物模型成功与否，与以下三方面息息相关：造模因素，动物体征，该证主要病理与症状、体征之间的关系。复杂的病因是中医临床症候的一大特点，本研究模拟中医病因，以大黄泻下法、游泳力竭法和饥饿法三因素复合建立脾气虚大鼠模型，同时，根据“脾阳虚多因脾气虚进一步发展，产生虚寒表现[6]”的临床症候特点，在脾气虚造模方法的基础上，对脾阳虚造模大鼠设定低温游泳环境，这是在中医理论的指导下从本质上对证候进行诱导，并充分体现了中医致病因素的多重性。造模后，大鼠相继出现消瘦、大便溏泄、倦怠、毛发不荣、蜷缩、扎堆、肛温下降等脾气虚、脾阳虚的症状与体征，符合本研究拟定的脾气虚证、脾阳虚证评定标准，其评分结果亦反映了两者在宏观证候上的递进关系。

4.2GASGAS是由主要分布于胃窦部和十二指肠近端1/3的G细胞所分泌，具有多种生理作用，如刺激胃酸及多种消化液的分泌，促进胃肠运动，营养胃肠粘膜等。刺激GAS分泌的最强因素是食物中经过消化的蛋白质分解产物[7]。本实验复制的脾气虚、脾阳虚大鼠模型，其血清GAS水平低于正常，差异均有统计学意义（P＜0.01）；将脾气虚和脾阳虚之间进行比较，虽然以脾阳虚更低，但两者间的差异并无统计学意义（P＞0.05）；经相应健脾中药治疗后，原模型大鼠的血清GAS含量上调。说明血清GAS降低可作为脾气虚证和脾阳虚证的微观辨证指标，但尚不能用以鉴别该二证。

脾气虚证又称为脾不健运证[6]，而脾阳虚证即是在脾不健运的基础上出现虚寒之象。故脾气虚、脾阳虚大鼠的血清GAS水平降低，可能是由于脾虚运化失职，食欲减退，胃内容物减少，经过消化的蛋白质分解产物也减少，使GAS的分泌量降低，血清GAS水平下降。但又因为两证在“主运化”方面的功能异常在程度上并无明显差异，所以反映在血清GAS水平上两者之间亦区别不大。

4.3MTLMTL主要由十二指肠和近端空肠黏膜隐窝内的Mo细胞及肠神经丛中的肽能神经元分泌，通过作用于平滑肌细胞的特异性受体引起平滑肌收缩，促进胃肠运动，提高胃肠道、胆道、oddis括约肌的收缩力和张力。引起MTL释放的主要因素有胃腔内刺激物、胃扩张、迷走神经兴奋、蛙皮素等。国外有研究表明，功能性消化不良患者或实验动物血浆MTL水平降低，而促胃动素药物能增加血浆MTL浓度，改善症状[8-10]。Simren等[11]研究发现，肠易激综合征（IBS）患者血浆MTL含量显著高于健康对照组。国内学者亦发现脾虚患者或大鼠的血浆MTL水平紊乱，但研究结果并不一致。徐世军[12]等发现脾虚泄泻大鼠血浆MTL水平下降，而徐珊等的研究结果则提示脾虚大鼠的血浆MTL水平升高[13]。本研究发现不同脾虚证型其血浆MTL的变化趋势不一致：脾气虚大鼠的血浆MTL水平低于正常，差异有统计学意义（P＜0.01）；而脾阳虚大鼠的血浆MTL水平高于正常，差异亦有统计学意义（P＜0.01），两者变化趋势相反；经相应健脾中药治疗后，原模型大鼠的血浆MTL紊乱情况得以复健。说明检测血浆MTL水平可作为脾气虚证和脾阳虚证的微观辨证指标，其在脾气虚证中表现为下降，而在脾阳虚证中表现为升高；且血浆MTL可用以鉴别该二证。

脾气虚时，食欲减退，胃内容物减少，使MTL的释放减少，血浆MTL水平下降；脾阳虚时，虽然亦出现纳呆，进食减少等运化障碍之症，但并存畏寒肢冷，大便稀溏，甚至尿少、肢肿等虚寒之象，而这些虚寒之象则因于脾阳失于温煦及升清。由此推测，脾阳虚时，一方面，由于升清降浊不利，阳不化气、水湿内停，导致胃肠道扩张，腔内充满未消化的食物、液体、气体等，肠壁水肿、充血，张力增加，反馈性使MTL分泌增强，以促进胃肠活动和内容物的运行；另一方面，由于胃肠道内环境严重失调及某些代谢产物的蓄积，可能抑制胃肠道平滑肌MTL受体的敏感性，从而导致血浆MTL水平的反馈性增高。因此，血浆MTL在脾气虚和脾阳虚证中的变化不一致，可作为二证的鉴别指标。

参考文献

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