松果菊组织培养的初步研究
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摘要：文章对松果菊的组织培养进行了初步的研究，选用松果菊的叶柄、叶片为外植体，实验中使用不同的激素组合，采用继代培养的形式对芽进行大量繁殖的诱导，以获取大量的组培苗，进而满足花卉市场和药物植物市场的需求。
关键词：松果菊；组织培养；研究；分析
中图分类号：S567.239 文献标识码：A 文章编号：1674-0432（2011）-03-0088-1
1 研究目的
对松果菊的组织培养进行初步研究的目的主要在于通过诱导种子发芽和以叶柄及叶片作为外植体进行愈伤组织诱导和芽诱导，再通过对愈伤组织的分化诱导和对芽的增殖继代培养，进而建立起松果菊快速繁殖的基本框架，来为细胞培养研究进一步的开展奠定基础、指明方向。
2 材料和方法
2.1 材料
2.1.1 植物材料 选取生长期为5个月的松果菊植株，后将其移栽至玻璃温室中进行盆栽，实施常规的水肥管理，每盆一株。松果菊的愈伤组织经过了前期的实验室诱导和多次的继代培养。
2.1.2主要的仪器设备 研究所需要的主要仪器设备包括：超净工作台、高压灭菌锅、分析天平和酸度计
2.1.3化学试剂 萘乙酸、6-苄基腺嘌呤、琼脂。所选用的化学试剂为化学纯或分析纯。
2.2 方法
2.2.1 外植体的处理 40℃的温水中，对松果菊的种子实施2-3h的浸泡，随后用70%的乙醇对其灭菌2min，用0.1%的升汞灭菌12min，后对其进行5次的冲洗，备用。选择无病虫害，生长健康的松果菊植株，剪下其叶柄和叶片，后进行自来水的冲洗，随后浸泡于洗衣粉水中15min，之后进行自来水的反复冲洗，冲洗干净后，备用。叶柄和叶片均先浸泡于75%的乙醇中30s，再采用0.1%的氯化汞进行灭菌。叶柄灭菌时间为8min，叶片灭菌时间为6min，灭菌过程用干玻璃棒进行轻轻的搅动，后用蒸馏水冲洗5次，备用。
2.2.2 培养基和灭菌 MS为基本培养基，外加3%的蔗糖和0.8%的琼脂，灭菌前的PH值调为5.8-6.0之间，后将培养基装于50mL的三角瓶中，每瓶20mL。随之在121℃的高温下对培养基进行20min的高压灭菌。
2.2.3 培养条件 培养温度在23-27℃、湿度70-80%，并每天在强度1000-1500Lx进行40h左右的光照
2.2.4 种子诱导出芽 松果菊种子在灭菌之后在培养基中进行诱导，每瓶对6粒种子进行接种，在接种之后，先于0-5℃的黑暗条件下培养7d，后转入23-27℃黑暗条件下的培养室继续培养7d，最后实施光照培养。
2.2.5 叶柄和叶片的诱导 松果菊叶柄在灭菌后切成1cm的小段，将叶片切成边长为0.7cm的方块，一次出来进行40瓶的接种，叶柄和叶片分别接种20瓶，每瓶进行3个外植体的接入，在接入时，叶片背面向上，后进行黑暗培养8d，最后实施光照培养。
2.2.6 愈伤组织的继代培养 将经前期诱导和多次继代培养的愈伤组织接种在MS和MS混合液两种培养基中，每瓶中对2块愈伤组织进行接种，30d实施一次继代。
2.2.7 芽的继代培养 在愈伤组织的培养过程中，将高于1cm的芽接种到无激素的MS和两种不同的MS混合液当中，每瓶进行一个芽的接种，实施光照培养。
2.2.8 对种子发芽率的测定
3 结果与分析
3.1 结果
3.1.1 不同的激素组合对于诱导叶片外植体发芽的影响 叶片在三种激素组合中的诱导率均在100%以上，其诱导率随着浓度的增加和递减。从叶片外植体的诱导出芽情况，可以看出，具有较低浓度的6-BA诱导出芽的效果更好。其结果如下：
表1
3.1.2 不同的激素组合对诱导叶柄外植体出芽的影响 叶柄在三种激素组合中的诱导率均在100%以下。培养时间一定的情况下，培养液浓度越高，其芽的诱导率则越低。其结果如下：
表2
3.2 分析
研究结果表明：松果菊的叶片经气管存在着诱导分化进而产生根的潜能。松果菊的愈伤组织液存在着较强的分化能力，这种分化与激素水平有着密切的联系，在不同的培养基中，其分化有较大的差异。
参考文献
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