子宫内膜癌组织中酪氨酸蛋白激酶的活性研究

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[摘要] 目的：通过比较子宫内膜癌、子宫内膜非典型增生及正常子宫内膜组织中蛋白酪氨酸磷酸化水平的差异，以探讨子宫内膜癌发生过程中酪氨酸蛋白激酶（TPK）活性改变的意义。方法：应用免疫组化S-P法测定40例子宫内膜癌、17例子宫内膜非典型增生、28例正常子宫内膜组织中磷酸酪氨酸蛋白（P-Tyr）的表达，从而反映3组中TPK活性水平。结果：在子宫内膜癌、子宫内膜非典型增生及正常子宫内膜组织中P-Tyr阳性表达率分别为75.00％、47.06％、14.29％，3组间差异有显著性（P

[关键词] 子宫内膜肿瘤；酪氨酸蛋白激酶；磷酸酪氨酸

[中图分类号] R737.33 [文献标识码]B [文章编号]1673-7210（2008）05（b）-023-02

The clinical significance of study on the activity of tyrosine protein kinase in endometrial carcinoma

LUO Xue-ying,WANG Zhan-ping

（Department of Obstetrice and Gynecology, The First People’s Hospital of Shenyang, Shenyang 110041，China）

[Abstract] Objective: To evaluate the change of tyrosine phosphorylation status in endometrial carcinoma,atypical hyperplasia and normal endometrium, and to explore the significance of the activity of tyrosine protein kinase in the occurrence of endometrial carcinoma.Methods: Using S-P immunohistochemisty method, the expression of phosphotyrosine(P-Tyr) in the specimens of 40 cases with endometrial carcinoma,17 cases with atypical hyperplasia and 28 cases with normal endometrium were examined,thus getting the activity of tyrosine protein kinase in the three groups.Results:The positive immunostaining rate of P-Tyr in cases with endometrial carcinoma, atypical hyperplasia and normal endometrium were 75％, 47.06%，and 14.29% respectively,there was significant difference between cancer tissues，normal endometrium and atypical hyperplasia(P

[Key words] Endometrial neoplasms；Tyrosine protein kinase；Phosphotyrosine

子宫内膜癌是妇科常见恶性肿瘤，发病机制目前还不十分清楚。近年来随着对细胞内信号传导途径的深入研究，专家发现癌变与异常的细胞间信息传递密切相关。其中由酪氨酸蛋白激酶（TPK）介导的细胞内信号传导途径是调节细胞分化、生长和增殖的关键环节。许多恶性肿瘤的发生都伴随有TPK的活性增高或异常表达。

本研究采用免疫组化方法，通过对子宫内膜癌、子宫内膜非典型增生及正常子宫内膜3组中磷酸化的酪氨酸蛋白(P-Tyr)测定，反映3组间TPK活性差异，以探讨TPK在子宫内膜异常增生中的作用。

1资料与方法

1.1 临床资料

随机选取我院病理科2004年5月~2006年3月病理石蜡标本，患者年龄43～70岁，术前均未接受过放、化疗和激素治疗；其中子宫内膜癌标本40例，组织学类型均为内膜腺癌，根据FIGO标准（1988年）进行临床分期，Ⅰ~Ⅱ期28例，Ⅲ~Ⅳ期12例；高分化19例，中－低分化21例。子宫内膜非典型增生标本17例；正常子宫内膜标本28例。3组年龄比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。

1．2 试剂和方法

鼠抗人磷酸酪氨酸单克隆抗体PY99 为美国Santa Cruz产品，S-P试剂盒及DAB显色剂购自北京中山生物技术有限公司。石蜡标本片厚4 μm连续切片备用，并做苏木精-伊红染色以确定诊断。按免疫组化S-P法测定，染色步骤参照说明书进行，以PBS代替一抗做阴性对照。

1．3结果判定

用已知乳腺癌阳性切片作阳性对照。镜下观察胞浆棕黄色颗粒状染色者为阳性细胞。按染色程度计分：无色0分，浅黄色1分，棕黄色2分，棕褐色为3分。镜下观察随机选取10个视野，计数1 000个细胞，按阳性细胞所占百分比分为：1％~10％ 1分，11％~50％ 2分，51％~80％ 3分，≥81％ 4分。对阳性细胞百分比及染色程度评分，两者乘积≥3分者为阳性。

1．4 统计学分析

应用SPSS11.0统计分析软件进行χ2检验分析数据。

2 结果

2.1子宫内膜癌、内膜非典型增生及正常子宫内膜中P-Tyr表达情况

子宫内膜癌、内膜非典型增生及正常子宫内膜中P-Tyr阳性表达率分别为75.00％、47.06％、14.29％，3组间差异有显著性（P

子宫内膜癌组与正常子宫内膜组中P-Tyr表达阳性率比较，非典型增生组与正常子宫内膜组中P-Tyr表达阳性率比较

2.2 P-Tyr表达与子宫内膜癌各种临床病理参数的关系

内膜癌组中，中－低分化组P-Tyr表达明显高于高分化组，差异有显著性（P

3讨论

TPK是一类具有酪氨酸激酶活性的蛋白质，能够催化蛋白质酪氨酸残基磷酸化反应，在细胞转化和生物信号转导中发挥关键作用[1]。已有研究表明，TPK与细胞增殖和癌变有关，TPK活性异常已成为细胞恶性增殖的标志之一。已知许多癌基因编码的产物都是具有TPK活性的生长因子受体或生长因子信号传导通路中的某一成分或类似物，这表明癌变与TPK、生长因子受体之间存在着本质联系。目前在数种肿瘤的研究中，如乳腺癌、鳞状细胞癌和胶质瘤等，都发现TPK活性异常升高，且有研究显示，细胞生长、分化、转移行为与细胞内蛋白质酪氨酸磷酸化水平紧密相关。在正常细胞中，蛋白质的磷酸化和去磷酸化反应是在酪氨酸蛋白激酶（TPK）和酪氨酸蛋白磷酸酶（PTP）协调作用下，处于相对平衡状态，磷蛋白的多少直接反映了TPK和PTP综合作用结果，故测定磷蛋白含量比单独测定TPK或PTP的活性更有意义[2]。研究发现，在正常细胞的蛋白质中，酪氨酸磷酸化的比例很小，但在肿瘤细胞中可以升高10~20倍。由于细胞内P-Tyr含量是衡量所有酪氨酸蛋白受体家族成员及其下游信号传递通路活化水平的共同指标，因此，通过测定细胞内P-Tyr含量，可以在一定程度上客观地反映TPK活化水平[3]。

近年来，在子宫内膜癌病因分子机制研究中，已证实其发生与PTEN抑癌基因突变密切相关，PTEN是迄今为止发现的第一个具有PTP活性的抑癌基因，它可能是一种促凋亡因子，能增加细胞对凋亡刺激的敏感性[4]。其编码的蛋白质具有PTP活性，参与蛋白质酪氨酸磷酸化过程，其作用与TPK相拮抗[5]。目前已有研学者发现，子宫内膜癌中VEGF/VEGFR、IGF/IGFR的异常表达与PTEN抑癌基因的缺失同时存在，并成为子宫内膜癌发病的重要机制之一[6，7]。而体外实验发现这一过程能被特异性TPK 抑制剂所阻断[8]。

本研究发现，在正常子宫内膜、非典型增生及子宫内膜癌组织中P-Tyr表达水平依次增高，且三组间存在显著差异，这表明子宫内膜增生愈明显，其组织细胞内酪氨酸蛋白的磷酸化程度愈高，从而反映出TPK的活性也愈高，提示了TPK活性异常是引起子宫内膜异常增生的原因。根据内膜癌发病途径，非典型增生可能是导致子宫内膜癌早期病变的一种因素，本研究结果显示，在非典型增生时期TPK活性异常就已经存在，因此，在癌前病变早期，为应用特异性TPK抑制剂来阻断或逆转子宫内膜异常增生，阻止其进一步向内膜癌转化，提供了理论依据；并为子宫内膜癌的治疗提供了新方向。此外，本研究还发现中、低分化癌组的P-Tyr表达水平高于高分化癌组，两组间差异有显著性，提示TPK活性有可能在一定程度上反映了子宫内膜癌的分化程度。目前，有关TPK活性异常是否与PTEN抑癌基因缺失相关，以及TPK在肿瘤细胞增生和凋亡的调控机制中涉及的途径及其下游信号分子的研究还不十分清楚，有待进一步研究。

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[8]Uckun FM, Narla RK, Zeren T, et al. In vivo toxicity,pharmacokinetics, and anticancer activity of genistein linked to recombinant human epidermal growth factor[J].Clin Canc Res, 1998,4:1125-1134.

（收稿日期：2008-01-31）

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