HPLC法测定环戊硫酮及其片剂的含量
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摘要：目的建立测定环戊硫酮的hplc方法。方法采用Agilent zorbax XDB C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5μm），流动相为甲醇-水（80∶20）；柱温35 ℃；检测波长348 nm。结果环戊硫酮能与其它杂质分离，线性范围为0.05~500 μg/mL，r=0.999 9，精密度和重复性较好。结论此方法准确、简便、快速，适用于环戊硫酮的质量控制。
关键词：环戊硫酮；含量测定；高效液相色谱法
中图分类号：TQ460.7文献标识码：A文章编号：1672-979X(2008)09-0042-03
Determination of Anethol Trithione and Its Tablets by HPLC
XU Yu-wen1, LI Yu-mei2, WANG Xiao-bing1
(1. Shandong Provincial Institute of Drug Control, Jinan 250101, China; 2. Shandong Bausch & Lomb Freda Phar. Co., Ltd., Jinan 250012, China)
Abstract：Objective To establish a HPLC method for the determination of anethol trithione and its tablets. Methods An Agilent Zorbax XDB C18 column (250 mm×4.6 mm, 5 μm) was used with the mobile phase consisting of methanol-water(80:20). The temperature of column was 35 ℃and the detection wavelength was 348 nm. Results An excellent separation was achieved for anethol trithione and other impurities. The calibration curve of anethol trithione was linear within the range of 0.05～500μg/mL (r=0.999 9). The precision and reproducibility of the method was good. Conclusion This method is accurate, simple and fast for the quality control of anethol trithione and its tablets.
Key words：anethol trithione; assay; high performance liquid chromatoraphy
环戊硫酮（anethole trithione）是肝细胞复活真性利胆药，胆囊炎、胆结石、胆道运动障碍以及急慢性肝炎时用作利胆剂。近年国内外研究发现，此药还具有临床新用途，如促进唾液分泌、调血脂、抗氧化的化学保护作用等。环戊硫酮原料及片剂在欧美等国外药典中均未收载，我国现行质量标准为试行标准，测定其含量是用分光光度法[1，2]。为了更好的控制环戊硫酮原料及片剂的产品质量，我们采用了高效液相色谱法。
1材料与方法
1.1药品
环戊硫酮对照品（含量99.9 %，山东省药品检验所标化提供）；环戊硫酮片及环戊硫酮样品（山东某制药公司提供）。
1.2仪器
1200高效液相色谱仪（美国Agilent，含四元泵，紫外检测器，自动进样器，Agilent色谱工作站，柱温箱）； BP211D电子天平（德国Startorious）；UV-2550紫外分光光度计（日本岛津）。
2方法与结果
2.1对照品溶液和供试品溶液的制备
对照品溶液的制备：精密称取环戊硫酮对照品12.5 mg置入100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为环戊硫酮对照品储备液。临用时取对照品储备液适量，加甲醇稀释成浓度5 μg/mL的溶液，作为对照品。
供试品溶液的制备：精密称定环戊硫酮样品适量，用甲醇溶解并稀释成5 μg/mL的溶液，作为供试品Ⅰ；另取环戊硫酮片20片，研细，取细粉适量精密称定，用甲醇溶解并稀释成5 μg/mL的溶液，滤过，取续滤液作为供试品Ⅱ。
2.2色谱条件
Agilent zorbax XDB C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为甲醇-水（80∶20），柱温35 ℃，流速1.0 mL/min，检测波长348 nm。在选定的色谱条件下，供试品和对照品的色谱图见图1。由图1可见，环戊硫酮的保留时间为11.1 min，分离度和理论塔板数均符合要求。
2.3线性关系
取环戊硫酮对照品储备液适量，加甲醇稀释成500，50，5，0.5，0.05 μg/mL溶液，各取20 μL按上述色谱条件注入液相色谱仪，记录色谱图、环戊硫酮峰面积。以环戊硫酮峰面积为纵坐标，环戊硫酮浓度为横坐标进行线性回归。回归方程：A = 57.448 C+0.002，r = 0.999 9。结果表明，环戊硫酮在0.05～500 μg/mL浓度范围内线性关系良好。
2.4精密度
取环戊硫酮对照品储备液适量，加甲醇稀释成高、中、低（6，5，4 μg/mL）3种不同浓度的对照品溶液，每种浓度制备5个溶液，分别取各溶液20 μL按上述色谱条件注入液相色谱仪，记录色谱图，以环戊硫酮峰面积计算，高、中、低3种浓度对照品溶液的RSD（n = 5）分别为0.95 %，0.32 %，0.67 %。
2.5回收率
取环戊硫酮对照品储备液适量，加甲醇稀释成4，5，6 μg/mL 3种不同浓度溶液。每种浓度制备5个溶液，分别取各溶液20 μL 按上述色谱条件注入液相色谱仪，记录色谱图，以测得含量与实际加入量之比计算回收率，3种溶液的平均回收率（n = 5）为99.8 %，100.1 %和99.9 %，RSD分别为0.23 %，0.31 %和0.35 %。
2.6稳定性实验
取环戊硫酮对照品储备液适量，加甲醇稀释成5μg/mL溶液。立即在室温下测定，分别与放置4，8，12，24 h后测得的峰面积比较，考察其稳定性，计算所得含量的RSD为0.42 %。
2.7供试品的测定
精密量取对照品溶液与供试品溶液Ⅰ、Ⅱ各20 μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算含量；同时按国家药品标准[1，2]以紫外-分光光度法测定环戊硫酮及其片剂含量，两种方法测定的结果见表1、表2。
3讨论
环戊硫酮是一种含有S原子的杂环化合物，在200～400 nm的紫外区有较强的紫外吸收。我们以甲醇为溶剂，将环戊硫酮溶解后在紫外区进行波长扫描，见图2。
由图2可见，环戊硫酮在235，270和348 nm有3个吸收峰，以348 nm波长处的吸收值最大，故测定波长确定为348 nm。
在建立方法学的过程中，我们选用了甲醇-水、乙腈-水以及甲醇和缓冲盐等系统，都获得了较满意的结果。综合各种因素，最后确定甲醇-水（80∶20）为最佳选择。与国家标准采用的分光光度法相比，本方法准确性和灵敏度较高，重现性较好，比较适合企业有效控制环戊硫酮产品的质量，同时为今后提高环戊硫酮的质量标准提供了理论基础和方法依据。
参考文献
[1]国家药品监督管理局. 国家药品监督管理局药品标准（试行）WS-200（X-175）-2002 [S]. 2002.
[2]国家食品药品监督管理局. 国家食品药品监督管理局药品标准WS1-（X-）-2006Z [S]. 2006.