Adipo-R2在妊娠糖尿病胎盘中的表达
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摘 要 目的：检测脂联素受体adipo-r2在妊娠糖尿病胎盘中的表达情况，探讨脂联素受体Adipo-R2在妊娠糖尿病发病机制中的作用。方法：采用口服50g葡萄糖-静脉血1小时血糖进行妊娠期糖尿病的筛查，静脉血-75g葡萄糖耐量试验行妊娠期糖尿病诊断。本研究采用免疫组化法和图像分析技术，观察在16例妊娠期糖尿病患者（A组）、18例妊娠期糖耐量异常患者（B组）和35例糖耐量正常、同期分娩的正常妊娠妇女（C组）中脂联素受体Adipo-R2的表达情况。结果：Adipo-R2阳性表达位于绒毛滋养层细胞（合体滋养细胞，细胞滋养细胞）的胞膜上，极少数滋养细胞胞浆内也可见阳性表达。与B组及C组比较，A组胎盘滋养细胞Adipo-R2的表达减弱，统计学差异显著（P＜0.01），（PU值：A组8.16±1.44，B组11.85±2.19，C组12.8±2.11）。B、C组胎盘滋养细胞Adipo-R2的表达比较，统计学差异无显著性（P＞0.05）。结论：Adipo-R2主要表达于妊娠胎盘滋养细胞胞膜上；妊娠期糖尿病患者胎盘Adipo-R2的表达显著减弱（P＜0.01）。胎盘滋养细胞Adipo-R2的低表达，是妊娠期糖尿病的病理变化之一。
关键词 妊娠糖尿病 脂联素受体2 胎盘
AbstractObjective:Investigate the expression of adiponectin receptor 2（Adipo-R2） in the placenta and its implication in the GDM,illustrate the role of Adipo-R2 in the GDM pathogenesis.Methods:GDM was diagnosed using 50g glucose screening test followed by 75g oral glucose tolerance test （OGTT）.16 GDM cases （group A）,18 GIGT cases （group B） and 35 cases of normal pregnant women with normal glucose tolerance delivered in the same period （group C） were included in this study.The expression of Adipo-R2 in the placenta was detected via immunohistochemistry and its intensity was valuated via image analysis.Results:The expression of Adipo-R2 was found in the membrane and in a few cytoplasm of villous trophoblasts （syncytiotrophoblasts,cytotrophoblasts）.The expression intensity of Adipo-R2 in the placental trophoblasts was lower in group A than in group B and group C,the difference was statistically significant（The PU value were 8.16±1.44 vs 11.85±2.19,12.8±2.11,P＜0.01）.There was no statistically significant difference for the expression intensity of Adipo-R2 in the placental trophoblasts between group B and C（P＞0.05）.Conclusion:The expression of Adipo-R2 was found mainly in the membrane（syncytiotrophoblasts,cytotrophoblasts）.The expression of Adipo-R2 in the placenta of GDM patients is reduced significantly（P＜0.01）.The low expression of Adipo-R2 in the placental trophoblasts is an pathological changes for GDM patients,which may correlate with the poor pregnancy outcome of GDM.
Key WordsGestational diabetes mellitus;Adipo-R2;Placenta
妊娠期糖尿病（gestational diabetes mellitus，GDM）是指妊娠期间发现或发病的糖耐量异常，也包括糖耐量异常在妊娠前已存在但伴随妊娠而发现者［1］。GDM的病因和发病机制较为复杂，至今未完全明了。自1995年，Scherer等［2］发现脂联素（adiponectin，APN）基因以来，大量研究证实,APN参与2型糖尿病的胰岛素抵抗［3］。近年APN与GDM关系的研究多集中在血清学方面，国内外文献中关于APN在GDM胎盘中表达情况的研究报道较少。脂联素受体Adipo-R1和Adipo-R2在大多数器官都有表达。Adipo-R2在胎盘有表达，Adip-R1则没有［4］。故本文检测了脂联素受体Adipo-R2在妊娠糖尿病胎盘中的表达情况，试探讨脂联素受体Adipo-R2在妊娠糖尿病发病机制中的作用。
资料与方法
2005年7月～2006年6月妇产科门诊建卡产检及住院分娩的妇女，各项资料收集完整，其中GDM患者16例，列入A组；GIGT患者14例，列入B组。另选取在妊娠24～28周进行50g葡萄糖筛查试验阴性、无严重高危因素的同期分娩的正常妊娠妇女共34例作为对照，列入C组。3组孕妇的年龄，孕产次，采血平均孕周等一般资料差异著性均无显（P＞0.05）。
诊断标准：于妊娠24～28周进行50g葡萄糖筛查试验，如1小时静脉血浆葡萄糖≥7.8mmol/L，则在1周内行75gOGTT。75gOGTT以空腹5.6mmol/L，1小时10.3mmol/L，2小时8.6mmol/L，3小时6.7mmol/L为标准，其中有2项或2项以上达到或超过正常值，诊断为GDM；仅1项达到或超过正常值，诊断为GIGT［4］。2次或2次以上空腹血糖≥5.8mmol/L，也可诊断为GDM［5］。
试验方法：三组孕妇均于胎盘娩出后即取胎盘中央组织约1cm×1cm×1cm，用10%甲醛溶液固定，常规石蜡包埋，4μm厚切片，采用采用免疫组化法和图像分析技术，检测脂联素受体Adipo-R2的表达情况。采用中山大学基础医学院图像分析室的全自动图像分析系统IBAS2.5，应用申洪等提出的阳性单位（positive unit，PU）概念定量表达免疫组化阳性反应度［6］。将排除了切片本底因素后的纯免疫组化反应度按灰度图像分,0～100个等级，每1个等级定义为1个PU。PU值大小与阳性反应强度成正比关系。
统计学方法：采用SPSS12.0统计软件包进行单因素方差分析的多重比较、配对样本t检验、X2>/sup>检验。显著性水准α0.05，双侧检验。图像分析测试结果用PU均值±标准差（X±S）表示。
结 果
3组一般情况比较：3组的一般情况，包括年龄、孕次、产次之间差异无统计学意义（P均＞0.05），3组具有可比性。见表1。
Adipo-R2在胎盘滋养细胞表达的定位，利用免疫组织化学方法检测Adipo-R2在GDM及正常足月妊娠胎盘滋养细胞中的表达，结果：在绒毛滋养层细胞的胞膜上可见棕色颗粒，在胞浆内也可见少数棕色颗粒。显示：Adipo-R2表达于绒毛滋养层细胞（合体滋养细胞，细胞滋养细胞）、绒毛间质细胞，且在滋养细胞的胞膜上表达最为明显。
Adipo-R2在胎盘滋养细胞表达的定量分析，与GIGT组及正常妊娠组比较，GDM组胎盘滋养细胞Adipo-R2的表达减弱，统计学差异显著（P＜0.01）；GIGT组、正常妊娠组胎盘滋养细胞Adipo-R2的表达比较，统计学差异无显著性（P＞0.05）。见表2。
胎盘滋养细胞Adipo-R2的表达A组与B组及C组比较，统计学差异显著（P＜0.01）；B组与C组比较，统计学差异无显著性（P＞0.05），见表2。
讨 论
GDM是孕妇一个重要的、常见的妊娠期合并症，随着人们生活水平的提高，其发病率有逐年增多的趋势。GDM孕妇的临床经过复杂，对母儿均有较大的危害。
滋养细胞的高度增生能力及对母体的侵蚀性均表明其生长特性介于正常组织与恶性肿瘤组织的中间状态。胎盘是维持胎儿在子宫内生长发育的重要器官，而且在整个孕期经历了巨大的发育、生长变化［7］。在胎盘内进行物质交换的部位，主要在血管合体膜（vasculo-syncytial membrane，VSM），是由绒毛合体滋养细胞无核区胞质、合体滋养层基膜、绒毛间质、毛细血管基膜和毛细血管内皮细胞5层组成的薄膜。子宫、胎盘缺血缺氧，胎儿循环灌注不足，以及非血管性疾病等，均可引起绒毛的病理性改变，表现为绒毛滋养细胞异常、绒毛间质和血管异常等。
GDM可引起孕妇胎盘的病理改变：毛细血管基膜分离，内皮细胞增生，绒毛周围纤维蛋白沉积，血管壁变厚，管腔变窄，血管合体膜减少，滋养细胞基膜增厚，合体滋养层合体细胞结节增多以及胎盘内未成熟绒毛或水肿绒毛间质内霍夫包细胞增多等［8～10］。这些将影响胎盘对胎儿的血及氧的供给，使孕晚期胎儿宫内缺氧增加，同时胎盘功能及代偿能力较低，当临产宫缩时易加重胎儿缺氧而致胎儿窘迫和新生儿窒息。
目前国内外文献中关于APN受体在GDM胎盘中表达情况的研究报道较少。本研究检测APN受体Adipo-R2在GDM、GIGT、正常妊娠三组的表达情况。研究显示，Adipo-R2阳性表达位于绒毛滋养层细胞（合体滋养细胞，细胞滋养细胞）的胞膜上，极少数滋养细胞胞浆内也可见阳性表达，有理由推测APN是在绒毛滋养层细胞的胞膜上与Adipo-R2结合的。与GIGT、正常妊娠组比较，GDM组胎盘滋养细胞Adipo-R2的表达减弱，统计学差异显著（P＜0.01）。这与Ranheim［11］等用RT-PCR法对妊娠妇女腹部皮下脂肪组织的研究结果基本一致。
本文推测，妊娠糖尿病时母体内分泌环境的变化严重地影响了胎盘的功能，使绒毛滋养层细胞内环境发生改变，抑制了绒毛滋养层细胞胞膜上Adipo-R2的表达，也间接使adiponectin在胎盘的表达减弱，其作用也随之减弱，包括活化腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）、刺激乙酰辅酶A羧化酶（ACC）磷酸化、促进脂肪酸氧化、降低血糖，调节糖代谢及胰岛素敏感性等［12］。另一方面，Adipo-R2表达的减弱，也可间接反映胎盘功能可能受损,不利于胎儿的正常生长与发育。
综上所述,Adipo-R2主要表达于妊娠胎盘滋养细胞胞膜上，妊娠期糖尿病患者胎盘Adipo-R2的表达显著减弱（P＜0.01）。胎盘滋养细胞Adipo-R2的低表达，是妊娠期糖尿病的病理变化之一，这可能与妊娠期糖尿病的不良妊娠结局有关。
参考文献
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11 Ranheim T,Haugen F,Staff AC,et al.Adiponetin is reduced in gestational diabetes mellitus nomal weight women［J］.Acta Obstet Gynecol Scand,2004,83（4）:341-347.
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表1 3组的一般情况比较（X±S）
表2 3组胎盘滋养细胞Adipo-R2的PU值（X±S）
注：与B、C组比较，>/sup>P/sup>P>0.05，差异无显著性。