临床实验室血清酶活性浓度测定方法和条件优化与分析
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【摘要】目的观察分析血清酶活性浓度测定方法和条件优化的效果。方法对所用仪器，试剂选择最适条件，在所选择温度下能使酶促反应的催化活性达到最大速度。结果观察组1800份，经酶学监测方法优化条件、标本等致结果误差仅24份，占1.33%。对照组1800份，为没有进行最适条件优化，结果误差为108份，占6%。二者经统计学处理，P
【关键词】血清酶活性；浓度测定方法；条件优化
文章编号：1004-7484（2013）-01-0459-02
随着现代检验学的快速发展，血清学酶类检测越来越多的应用于临床各科的疾病诊断。怎样选择测定酶活性的浓度方法和最适宜的条件，是保证监测数据正确性的首要措施。
1资料与方法
1.1一般资料回顾分析2010年1月——2010年6月1800份（对照组），因条件优化不足，标本采集、运输和储存不妥而导致部分结果误差。2010年7月后对仪器，试剂和标本等进行优化调节（最适条件），再次随机选取1800份（观察组）酶学生化检测试验，并对结果进行统计分析。
1.2优化方法对所用仪器，试剂选择最适条件，在所选择温度下能使酶促反应的催化活性达到最反应速度。我国检验学会文件中对最适条件是这样提出：①选合适的底物、辅因子、活化剂、变构剂的种类和浓度。②指示酶和辅助酶的种类和浓度。③反应混合液的最适pH，缓冲液种类和浓度。④其它影响酶活性的因素，如去除各种抑制剂。并提出：在某些情况下，为了获得更好的测定重复性或更大的临床价值，可考虑对上述“最适条件”作适度的修改[1]。
2结果
观察组1800份，对酶学监测浓度方法、仪器最大优化、合理采集标本等致结果误差仅24份，占1.33%。对照组1800份，为没有进行最适条件优化，结果误差为108份，占6%。二者经统计学处理，P
3讨论
3.1生物酶监测方法的选择对于临床需要进行酶学监测的，尽可能采用连续检测法。减少操作步骤，以避免过多的吸量和接触太多的容器表面而引起误差。
3.2仪器和设备及试剂监测前应明确规定仪器和设备的各种性能规范，使用全自动生化分析仪及其相应的配套设备。化学试剂必须有一定的纯度。不含影响反应速度的杂质。试验用水为双蒸水。
3.3自动生化分析仪参数设置在监测方法中应详细列出测定酶催化浓度的全部操作过程。可参考仪器和试剂盒给出的方法和参数进行设置。避免人为因素造成误差。
3.4方法类型及波长选择终点法或连续测定法。反应方向分正向/向上/+（吸光度增加）或负向/向下/-（吸光度减低）。如ALT/AST选用负向反应。选择酶促反应体系吸光度最大的波长，如用双波长应写明主波长和次波长，因双波长能有效消除干扰的影响，确保监测数据的可靠性。
3.5样品量、试剂量及稀释水量在实际操作中，应考虑测定的灵敏度和测定上限选用合适的样品与试剂体积比。我们主张样品与试剂体积比为1：10。如样品所占比例过小会减低灵敏度，样品量过大则测定线性下降，样品要复检的机会增多。稀释水量：添加样品稀释水能洗出黏附试管内壁上的微量血液，减少加样误差。添加试剂稀释水可避免试剂间的交叉污染。
3.6调节掌握反应、孵育及延迟、监测时间观察反应进行曲线，测出孵育时间、延迟时间和连续监测时间，求出反应线性时间范围。线性时间范围宽者，愈适用于临床。葡萄糖、总胆固醇、甘油三酯等都是酶法的Trinder反应，37℃酶反应较慢，必须测定这些酶试剂达到终点的时间。自动分析仪用试剂盒一般可在加样后5分钟内反应完全。所以，应选择分析仪的最大反应时间[2]。延迟时间：酶与底物混合后需要一定的时间使酶被激活，直至线性反应期才能开始检测。有的反应需要用工具酶将内源性代谢产物耗尽。一般单试剂法只需30s，常用项目ALT/AST/CK-NAC需特别注意。监测时间：测酶的连续监测法至少90-120s或至少4点（3A）少于3A不能称为连续检测法，因为不能计算线性度（不知是否为线性反应），监测时间过长则容易发生底物耗尽，可测范围变窄。
3.7试剂吸光度上、下限，底物耗尽限额不同型号分析仪的设计不一样。有的为零点与监测第一点吸光度的差额；有的为MAX OD/MIN OD，即吸光度上升或下降至指定吸光度的数值；超过限额说明样品的酶活性非常高，底物将要耗尽，随后监测的吸光度已不可靠，不打印结果而只能打印出底物耗尽警号，样品应稀释5-10倍重测。
3.8线性度、线性范围和试剂空白率连续检测法用。线性度大说明A之间已不成线性或为各个读数点最小二乘法的均方差限额。超过限额说明底物不足，检验结果会变低，打印警号，应稀释重测。一般设15%。线性范围：按试剂质量而设，超过范围应增加样品量或稀释后重测。不同的试剂公司试剂质量不一样，不同试剂比的线性范围也不一样，应实测试剂盒的范围。试剂空白速率：连续检测法用。试剂在检测过程中，底物自动降解达到的结果。此结果会在会在样品测定结果中自动扣除。不同批号试剂的试剂速率不一样，连续检测法的试剂应每天测此参数。测试方法为选择试剂速率程序，应用该项目参数，以水代样品，测得结果储存在仪器中，样本测定结果能自动扣除空白速率的数值。
3.9标本的采集、运输与保存的技术误差因素溶血：大部分酶在细胞内外浓度差异明显，且其活性远高于血清，少量血细胞破坏就可能引起血清中酶明显增高。抗凝剂：草酸盐、柠檬酸盐和EDTA等抗凝剂为金属螯合物。可抑制Ca的AMY也可抑制Mg的CK和5-NT；草酸盐即可与丙酮酸或乳酸发生竞争性抑制，又能与LD和ANDH或NAD形成复合物，从而抑制催化剂的氧化还原反应。肝素是粘多糖，对ALT、AST、CK、LD和ACP无影响，适用于急诊时迅速分离血浆进行检测，但可使r-GT升高，使AMY降低。温度：血清清蛋白对酶蛋白有稳定作用，如无细菌感染，某些酶存在于清蛋白中可在室温保存1-3d，而活性不受影响。有些酶极不稳定，如血清前列腺ACP在37℃放置1h，活性可下降50%[2]。大部分比较稳定，一般应在血清分离后当天进行测定，否则，应放冰箱冷藏。
总之，加强临床实验室血清酶活性浓度测定方法和条件优化（最适条件），可以提高酶学监测的可靠性，降低误差率。
参考文献
[1]张惠中.临床生物化学.人民卫生出版社，2009：368-372.
[2]周新，府伟灵.临床生物化学与检验.第4版.人民卫生出版社，2007：104-106.