银红胶囊对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的研究
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银红胶囊是由银杏叶提取物、三七提取物和红景天提取物优化配伍组成，其主要有效成分为银杏叶总黄酮醇苷、银杏内酯、三七总皂苷和红景天苷等，能有效增加脑血流量，降低外周血管阻力，本实验进一步观察了银红胶囊对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用。
1 材料与方法
1.1材料：分述如下。
1.1.1 药品与试剂：银红胶囊，内容物呈棕褐色，味微苦，性质稳定，常温干燥保存，由浙江省中医药研究院提供，批号：1104022；尼莫地平片：购于正大青春宝药业有限公司，批号0912007；多聚-L-赖氨酸；红四氮唑(TTC)；超氧化物歧化酶(sOD)、丙二醛(MDA)试剂盒：购于南京建成生物试剂公司；水合氯醛；AAA(A3)级MCAO栓线，购于北京沙东生物技术有限公司。
1.1.2动物：SD大鼠，清洁级，雄性，体重240±20g，由浙江省实验动物中心提供，合格证号：0014067号。大鼠饲养于浙江省中医药研究院实验动物室全屏障清洁级动物实验房内，实验动物使用许可证：SYXK(浙2009―0122)。
1.1.3实验仪器：酶标仪：Varjoskan Flash，美国Thermo公司。解剖显微镜，MZ9-5，德国LEICA公司。离心机，5702型，德国Eppendorf。微电脑恒温振荡器，HZ-9211，江苏太仓市科教器材厂。恒温水浴振荡器，HZ9212S，江苏太仓市科教器材厂。电子天平，XSl05，瑞士Mettler Toledo。电子天平，AI。104，瑞士Mettler Toledo。电子天平，PBl501-L，瑞士Mettler Toledo。冰箱，BCDl75，德国西门子。
1.2方法：分述如下。
1.2.1 动物分组与给药：SD大鼠50只，随机分为5组，即空白对照组(生理盐水lml／100g)，假手术组，银红胶囊分成低中高3个剂量组(15mg／kg，30mg／kg、60mg／kg)，阳性对照药组(尼莫地平1.5mg／kg，以下简称阳性组)。给药途径，所试药物均用CMC―Na配制成等体积(1ml／100g)，经灌胃预给药5天。
1.2.2动物模型制作：大鼠手术前1小时给药后，腹腔注射10％水合氯醛溶液350mg／kg麻醉，仰卧固定，分离右侧颈总动脉(CCA)、颈内动脉(ICA)及颈外动脉(ECA)，结扎ECA与CCA，用动脉夹夹闭ICA远心端，近心端结扎CCA后，迅速于距ECA与ICA分叉处约0.5cm的颈总动脉处作一切口，插入一端加热成光滑球形的尼龙线，这时用绕在CCA远心端的细线轻轻系牢拴线，再用眼科镊轻推拴线，从血管分叉处开始算距离，插入深度为18±0.5mm，实现大脑中动脉阻塞导致脑缺血。结扎入口处，尼龙线外留约1cm，缝合皮肤。假手术组只结扎右侧CCA。2小时后轻轻提拉所留线头至略有阻力以实现大脑中动脉再灌注。将动物放回笼中，待其自然苏醒，正常饮食。手术期间，利用热垫和台灯使肛温维持在37±0.5℃。待灌注后1小时，再给药1次。
1.2.3动物神经行为测定：手术后6小时，观察大鼠落地后活动情况，进行大鼠行为障碍评分。评分方法如下：0分：无神经功能缺失，活动正常；1分：病灶对侧不能完全伸展左侧前爪；2分：瘫痪侧不能够对抗来自对侧的推力；3分：爬行时出现左侧转圈(追尾征)；4分：摇动或行走时向瘫痪侧倾倒；5分：神志恍惚或意识丧失。
1.2.4脑梗死范围测定：各组大鼠于术后24h，10g／L戊巴比妥(40mg／kg)腹腔注射麻醉，经左心室灌注约150mL生理盐水，迅速断头取脑，去掉嗅球、小脑和低位脑干后，取手术侧大脑，-20度冰箱中速冻20分钟左右，便于切片，切成7片，每隔2mm切一片。第一刀在脑前极与视交叉连线中点处；第二刀在视交叉部位；第三刀在漏斗柄部位；第四刀在漏斗柄与后叶尾极之间。迅速将脑片置于2％TTC染液中.37℃避光振荡温孵30分钟，取出后置于10％甲醛液中避光保存6～24h。经染色后非梗死区为玫瑰红色.梗死区为白色。将TTC染色照片显微镜图像采集，用图像采集与分析系统测定梗死区范围面积，并计算梗死体积％。
1.2.5血清SOD、MDA钡0定：大鼠术后24小时，腹主动脉抽取2管血液：进行血清SOD、血清MDA测定。
1.2.6数据统计：实验结果采用统计学处理，给药组与空白对照组进行组间比较，以￡检验判断其显著性。
2 结果
2.1动物神经行为测定结果：受试药低剂量组(15mg／kg)与空白对照组相比，大鼠神经受损行为障碍评分无显著性差异(P>0.05)。中剂量组(30mg／kg)与空白对照组相比，大鼠神经受损行为障碍评分有显著性差异(P
2.2银红胶囊对大鼠脑梗死范围测定结果：银红胶囊低剂量组(1.5mg／kg)与空白对照组相比，大脑梗死范围有显著性差异(P
2.3血清SOD、MDA测定结果：银红胶囊低剂量组(15mg／kg)与空白对照组相比，并不能改变大鼠血清MDA水平，但能显著增加SOD水平(P
3 讨论
银红胶囊中高剂量组(30mg／kg、60mg／kg)均能有效改善大鼠局灶性脑缺血再灌注引起的神经功能损伤，对大鼠大脑梗死有显著的保护作用(P
4 参考文献
[1]徐淑云主编.药理实验方法学[M].第3版.北京：人民卫生出版社，2002：1203―1205.
[2]吕秋军主编.新药药理学研究方法[M].北京：化学工业出版社，2007：239 240.
[3]苗明三，朱飞鹏主编.常用医药研究动物模型[M].北京：人民卫牛出版社，2007：111-112.