胃黏膜COX-2\p53表达与Hp感染及癌变的关系研究

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【摘要】 目的：探讨Hp感染组和非感染组CSG、CAG、IM、Dys及GCa胃黏膜的cox-2、p53表达情况，并进行相关性分析。方法：选择经胃镜检查及病理组织学证实为CSG、CAG、IM、Dys及GCa患者各100例，通过快速尿素酶试验(hpUT法)和组织学改良Giemsa染色联合检测Hp，通过免疫组化对Hp感染组和非感染组患者胃黏膜联合检测COX-2、p53。结果：(1)Hp检出率以CAG中的IM最高，其次为Dys及GCa，与CSG比较差异有统计学意义；(2)COX-2蛋白在IM、Dys、GCa均有表达，差异无统计学意义；(3)Hp阳性的胃黏膜病变中COX-2的阳性表达率高于Hp阴性的胃黏膜病变，差异有统计学意义；(4)p53表达的阳性率从CSG、CAG、IM到Dys逐渐增加，GCa时达最高峰；CSG组p53表达的阳性率明显低于CAG组、IM组及Dys组(P

【关键词】 Hp； COX-2； p53； GCa

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2012.13.008

目前，国内外学者普遍接受Correa提出的胃癌发生多步骤假设，从慢性浅表性胃炎(chronic superficial gastritis，CSG)、慢性萎缩性胃炎(chronic atrophic gastritis，CAG)、肠上皮化生(Intestinal metaplasia，IM)、不典型增生(Dysplasia，Dys)到胃癌(Gastric Carcinoma，GCa)的演变过程。幽门螺杆菌(Helicopter pylori，Hp)感染是慢性胃炎的主要病因，与胃癌的发生亦有密切的关系。环氧化酶(cyclooxygenase，COX)是前列腺素(prosta glandins，PGs)合成的限速酶[1]。现已证明，Hp感染诱导胃黏膜COX-2表达，与胃癌的发生关系密切，突变型p53对肿瘤的发生有促进作用[2]。本研究通过免疫组化对Hp感染组和非感染组CSG、CAG、IM、Dys及GCa胃黏膜的COX-2、p53表达进行检测，并进行相关性分析。

1 资料和方法

1.1 一般资料 均为2006年1月-2010年12月因上消化道症状在丽水市人民医院经胃镜检查及病理组织学证实为CSG、CAG、IM、Dys及GCa患者各100例。所有病例均无Hp根除史，4周内无质子泵抑制剂(PPI)、抗菌药物等应用史。各组例数、年龄及性别构成见表1。

1.2 方法

1.2.1 Hp现症感染 应用快速尿素酶试验(HPUT法)和组织学改良Giemsa染色联合检测Hp。二者均为阳性(定为Hp+)，两者均为阴性(定为Hp-)，一阴一阳者不入选研究组。病理检查方法：在胃窦距幽门约5 cm以内区域取3~4块胃黏膜组织进行病理学检查。标本经福尔马林液固定，普通石蜡包埋，4 μm厚度连续切片备用(切片事先用多聚赖氨酸处理)，常规染色以确定病理学诊断。

1.2.2 COX-2、p53的免疫组化染色方法 本实验所用试剂COX-2、p53鼠抗人多克隆抗体，采用链霉素-生物素-辣根过氧化物酶复合物法(SP)免疫组织化学技术。石蜡切片常规脱蜡，水化，取0.01 M柠檬酸型缓冲剂作为修复液进行热修复，冷却至室温，滴加3%H2O2，在室温下孵育10 min。10%正常山羊血清封闭，室温孵育30 min，倾去血清，滴加1：200稀释的COX-2、p53鼠抗人多克隆抗体，4 ℃过夜，滴加生物素标记的第2抗体，在室温下孵育10 min，滴加新鲜配制的DAB溶液显色，苏木素复染，酒精脱水，干燥后封片。

1.2.3 免疫组化结果判定 以PBS替代1抗作为阴性对照，用已知强阳性的结肠癌切片作为阳性对照。阳性反应判定标准：以细胞胞浆中呈现颗粒状棕黄色染色者为COX-2、p53阳性细胞。对每个标本中胞浆阳性的表面上皮和固有腺上皮进行计数，以计数10个高倍视野细胞为准。评价阳性反应，依据每张切片的阳性细胞百分率和阳性反应强度分别进行，阳性着色细胞占10%以上定为阳性表达。阳性反应强度分别用阳性(+)和强阳性(++)表示。

1.3 统计学处理 采用PEMS 3.2 进行统计分析，采用字2检验，P

2 结果

2.1 Hp感染在各种胃黏膜病变中的表达 不同组织类型中Hp检出率以CAG中的IM最高，其次为Dys及GCa，它们与CSG比较差异有统计学意义(P

2.2 COX-2在不同阶段的表达 COX-2蛋白在IM、Dys、GCa均有表达，它们之间的表达率差异无统计学意义(P>0.05)，见表2。

2.3 Hp感染与COX-2感染的关系 Hp阳性的胃黏膜病变中COX-2的阳性表达率高于Hp阴性的胃黏膜病变，差异有统计学意义(P

2.4 p53在各种胃黏膜病变中的表达 p53表达的阳性率从CSG、CAG、IM到Dys逐渐增加，GCa时达最高峰。p53表达阳性率比较差异有统计学意义(P

2.5 Hp感染与p53表达的关系 Hp阳性组总体p53表达的阳性率明显高于Hp阴性组总体(P0.05)。

3 讨论

有学者认为，Hp感染作用于胃癌发生的起始阶段而扮演一个“首要推动因子”作用[3]，Hp的持续感染引起、促进萎缩和肠化的发生发展，并最终导致癌变，也就是说Hp感染伴随着癌变的全过程。本研究显示，Hp在CSG、CAG、IM、Dys及GCa中的阳性率分别为28%、51%、73%、54%及61%，以IM阳性率最高，CAG、IM、Dys及GCa4组的Hp感染率无显著性差异，而胃癌患者的Hp感染率与慢性浅表性胃炎比较差异有统计学意义(P

COX是PGs合成的限速酶，COX-2是其诱导型异构体，是一种“早期即刻反应”基因[4]，通常情况下在正常组织中不表达，在受到各种物质刺激下迅速表达，参与多种病理生理过程[5]，其高表达与炎症及肿瘤的发生发展有关[6]。本研究采用免疫组化检测COX-2在胃癌及癌前病变中的表达，结果显示，COX-2的阳性表达率随着胃黏膜病变程度的加深而呈上升趋势，表达强度从CSG、CAG、IM、Dys到GCA不断增高，其中在CSG组和GCa组COX-2的阳性表达率分别为9%、70%，GCa组与CSG组相比较，阳性表达率显著增高(P

许多研究证实，Hp是诱导COX-2表达的重要因素，Hp感染和COX-2的表达有明显的相关性。本研究结果显示，在Hp感染的胃黏膜疾病中，COX-2阳性表达率高于非Hp感染的胃黏膜病变，差异有统计学意义(P

突变型p53刺激和促进恶性细胞的生长[7]。本研究结果显示，从CSG、CAG、IM到Dys，p53蛋白表达逐渐增强，GCa时达最高峰；CSG组p53表达阳性率明显低于CAG组、IM组及Dys组，而CGa组p53表达阳性率明显高于CAG组、IM组及Dys组。提示p53过度表达不但与胃癌发生有关，而且与癌前病变的发生亦有关。因此可以认为，p53突变和过表达是胃癌发生发展中的早期分子事件之一[8]。本研究还发现，Hp阳性组总体p53蛋白表达明显高于Hp阴性组总体，提示Hp感染的胃黏膜处于一种高增殖状态，Hp感染与p53蛋白的过表达有关。Hp感染可能具有使野生型p53转变为突变体p53的作用，从而使p53基因丧失抑癌活性，因而有促进恶性转化的功能，这可能是Hp参与的致癌机制之一[9]。但同一病变类型中，Hp阳性组p53蛋白表达的阳性率虽均高于Hp阴性组，但两者差异不显著，与文献报道不甚一致，可能与各组例数太少有关，有待于进一步研究。

参考文献

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(收稿日期：2012-02-22) (本文编辑：李)