健康受试者醋酸环丙孕酮片的生物等效性测定

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【摘要】目的：研究检测比较人体单次口服受试制剂醋酸环丙孕酮片和参比制剂醋酸环丙孕酮片的生物利用度。方法：18名男性健康志愿者采用两制剂双周期交叉试验设计，口服醋酸环丙孕酮片受试制剂和参比制剂各100 mg，于不同时间采集血样，并采用高液相色谱法测定血药浓度。结果：受试者口服两种醋酸环丙孕酮片受试制剂和参比制剂后，Tmax分别为（3.7±0.8）h和（3.9±0.5）h，Cmax分别为（145.0±46.8）和（151.1±47.9）ng/ml，AUC0~96分别为（2303.6±446.2）和（2182.2±426.5）ng/（h・ml）。醋酸环丙孕酮片受试制剂和参比制剂消除均较缓慢，消除半衰期分别为（29.4±10.3）和（26.4±7.4）h。AUC0~96和Cmax经对数转化后进行方差分析和双单侧t检验，Tmax进行秩和检验，结果表明受试制剂的AUC0~96、Cmax和Tmax与参比制剂比较差异无统计学意义。结论：醋酸环丙孕酮片受试制剂的人体相对生物利用度为（107.4±19.2）%，与参比制剂具有生物学等效性。

【关键词】醋酸环丙孕酮；药动学；生物利用度；高效液相色谱法

文章编号：1009-5519（2007）22-3324-02 中图分类号：R9 文献标识码：A

Bioequivalent study of cyproterone acetate tablet in healthy human

ZHU Da-li1，ZHU Hong-mei1，HU Yan-qun2，et al.

（1.College of Health Technology，Jianghan University，Wuhan 430016，China；2.Tongji Medical College，Huazhong University ofScienceandTechnology，Wuhan 430030，China)

【Abstract】Objective：To make a comparison study of the bioavailability of test cyproterone acetate and reference cyproterone acetate by using HPLC method. Methods：In a randomized cross over study，two types of cyproterone acetate in single oral dose 100 mg each were given to 18 healthy volunteers every two weeks，and the blood tests were taken in different time.Results：The main pharmacokinetic parameters of these two types of cyproterone acetate were as follows：Tmax was （0.6±0.12） and （0.5±0.0）h respectively；Cmax was （25.1±2.2） and （26.6±2.4）ng/ml respectively；AUC0~96 was （163.2±12.1） and （163.7±11.6）ng/h/ml respectively；The elimination half-life was （10.4±4.3） and （10.6±2.9）h respectively；After the logarithmic conversion of AUC0~96 and Cmax，the analysis of variance and two one sided test statistical analysis for AUC0~96 and Cmax and rank sum test for Tmax showed that two formulations had no significant difference.Conclusion：Compared with reference cyproterone acetate，the bioavailability of the test cyproterone acetate was （107.4±19.2）%. According to the statistic analysis，the two types of cyproterone acetate were bioequivalent in human.

【Key words】Cyproterone acetate；Pharmacokinetics；Bioavailability；HPLC

醋酸环丙孕酮(cyproterone acetate)是一种抗雄性激素制剂，兼具孕激素和抗促性腺激素样作用，因此可抑制垂体促性腺激素的分泌，降低血中睾酮的浓度[1]。本实验采用高效液相色谱分离测定的方法，研究湖北葛店人福药业有限责任公司生产的醋酸环丙孕酮片（受试制剂）的药动学，并以广州先灵药业有限责任公司生产的醋酸环丙孕酮片作为参比制剂进行生物等效性测定，以考察受试制剂的药品质量。

1 资料与方法

1.1 试验对象：18名男性健康志愿者，年龄20～26岁，体重58～74 kg（按身高计算在标准体重( 10%范围内），无心、肺、肝、肾、脾、消化道、神经系统及精神异常及代谢性疾病，无烟酒等不良嗜好，试验前2周内未服用任何药物，半年内未使用任何甾体类药物。经体格检查心率、血压、心电图、血尿常规、肝功能及X-线透视等正常。试验前向参加试验的志愿者说明试验目的、药物性质、临床应用范围、可能出现的不良反应及保障措施等，由受试者签署知情同意书，报伦理委员会批准备案。

1.2 仪器和试药：检测仪器为戴安公司HPLC系统，进样阀为手动式，定量环为50 ?滋l，色谱工作站为戴安色谱工作站，柱温25 ℃。受试制剂（T）醋酸环丙孕酮片由湖北葛店人福药业有限责任公司提供，批号：040601，含量：98.0%。参比制剂（R）醋酸环丙孕酮片为广州先灵药业有限公司产品，片剂50 mg，国药准字1999J-40。乙酸乙脂为上海马陆产品，AR级，重蒸后使用。乙腈为德国Merck产品，色谱纯。实验用水为双蒸水经Milli-Q处理后的超纯水。

1.3 试验设计：双周期交叉试验设计。单剂量（100 mg）交叉口服两种制剂。即18名受试者随机分为2组，每组9名。一组先用受试制剂，经2周清洗期后再用参比制剂；另一组先用参比制剂，后用受试制剂。

受试者服药前24小时及采血期间，禁烟、酒、咖啡及其他含药品的饮料，服药后禁止剧烈运动，亦不得长时间卧床。试验前12h进清淡晚餐后禁食，次日清晨7时按随机分组的安排服用T或R各100 mg，200 ml温水送服。服药后2小时方可饮水，4小时后统一进餐，服药及采血期间受试者均留I期临床试验室观察。

1.4 试验方法

1.4.1 样品收集：受试者服药前留取空白血，服药后0.5、1、2、4、6、8、12、24、48、72和96小时静脉采血。血标本经3000 r/min离心10分钟，分离血清，-70℃保存备测。

1.4.2 样品抽提：血清样本0.5～1.0 ml加等体积NaOH(0.25N，1/1：v/v)，充分混匀，加5 ml乙酸乙脂充分混匀5分钟，4000 r/min离心5分钟，收集有机相，40℃蒸发，氮气吹干，残留物用流动相溶解，并定溶至0.3～1.0 ml，待测。

1.4.3 色谱条件：C18反相柱(Inertsil ODS)，流动相为80∶20（v∶v）的乙腈，流速为1 ml/min，检测波长为283 nm，进样量50 ?滋l。

1.4.4 标准曲线及质量控制：称取一定量的醋酸环丙孕酮，用流动相配制成标准储备液，然后稀释成标准系列浓度（0.075、0.125、0.25、0.5、1.0 ?滋g/ml），50 ?滋l进样测定峰面积，以浓度对峰面积作图绘制标准曲线（Sigma-Plus软件）。

样品测定时，控制稀释倍数，使其浓度落在标准曲线范围内。每天测量时，均以0.075和0.25 ?滋g/ml的标准液作为质量控制样品，利用峰面积计算。

1.4.5 回收率：取刻度离心管10支，分别加入醋酸环丙孕酮0.075和0.25 ?滋g，氮气吹干，每管加空白血清1 ml，充分混匀过夜，依血样处理方法进行抽提，用流动相定溶，使最终浓度为0.075和0.25 ?滋g/ml，HPLC测定峰面积，并计算回收率。

1.5 数据处理：采中国数学药理学会编制的3P97药代动力学程序包，计算受试制剂的生物利用度和有关药代动力学参数。

2 结果

2.1 HPLC分离情况：空白血清与受试者服药后血清样品HPLC分离图谱见图1，可见本方法分离效果好，与其它杂质峰无干扰，专属性好。本条件下醋酸环丙孕酮最小检测浓度为2 ng/ml。

2.2 标准曲线及质量控制：以不同浓度的醋酸环丙孕酮对相应峰面积作图，共制5条标准曲线，回归方程：y =346.68+8.619 X，r值为0.999。HPLC测定峰面积并计算变异系数，日间和日内变异系数均小于5%(见表１)。

2.3 回收率：浓度为0.075 μg/ml（n=5）和0.25 μg/ml（n=5）的血清样品中，经乙酸乙脂提取后，醋酸环丙孕酮的回收率分别为（94.2±4.5）%和（92.3 ±1.4）%（见表2）。

2.4 血药浓度：18名健康志愿者随机、交叉、双周期单次口服T和R（100 mg），平均血药浓度-时间曲线见图2。

2.5 药代动力学参数和相对生物利用度：用3p97药代动力学计算程序，用非房室模型估算醋酸环丙孕酮药代动力学参数。结果见表3。由于T和R剂量相同，根据二者的总吸收量，按下式计算醋酸环丙孕酮片的相对生物利用度。T与R比较，相对生物利用度见表3。

2.7 生物等效性分析：ln(AUC0~96h)和ln(Cmax)方差分析显示，在两种制剂及给药顺序间差异无显著性(P>0.05)，而个体间具有一定的差异性。对ln(AUC0~96h)和ln(Cmax)进行双单侧t检验，结果H0均不成立而接受H1，T的90%置信区间都在生物等效性范围内。对Tmax进行非参数检验，表明两种制剂间无显著差异性。

2.8 临床观察：试验期间未见不良反应发生，中途无受试者退出试验。

3 讨论

醋酸环丙孕酮是一种17-羟孕酮类药物，具有抗雄激素作用，也有孕激素活性，能抑制垂体促性腺激素的分泌使体内睾酮水平降低，临床用于治疗妇女多毛症、痤疮、青春期早熟及前列腺癌等[2]。

本试验采用高效液相色谱分离[3，4]测定的方法，研究醋酸环丙孕酮受试制剂和参比制剂的生物等效性。受试制剂和参比制剂ln(AUC0~24h)和ln(Cmax)经方差分析和双单侧t检验，Tmax进行非参数检验，结果表明两制剂的药代动力学参数在吸收过程和吸收速度方面具有生物等效性，18名健康志愿者口服两种醋酸环丙孕酮片后在体内吸收比较迅速，消除均较缓慢，且无药物不良反应出现，与文献[5]报道的相似。和R比较，两种制剂在个体间存在差异，提示临床给药后宜监测血药浓度，给药方案要注意个体化。

参考文献：

[1] 王 战.色普龙[J].中国新药杂志.2003，12(4):300.

[2] 吕立群，刘 义.联合应用醋酸环丙孕酮和二甲双胍治疗多囊卵巢综合征[J].华中科技大学学报(医学版)，2004，33(2):189.

[3] 胡卫红，张 文，吴水仙. 复方醋酸环丙孕酮的HPLC法测定[J].中国医药工业杂志，2004，35(6):354.

[4] Segall A，Vitale M，Perez V，et al. A stability-indicating HPLC method to determine cyproterone acetate in tablet formulatings[J].Drug Vev Ind Pharm，2000，26(8):867.

[5] 谭文明，丁 黎，扬 劲，等.人血浆中醋酸环丙孕酮的LC-MS法测定及其制剂的生物等效性研究[J].药物分析杂志，2005，25(6)：621.

收稿日期：2007-07-03