超高效液相色谱法在西药分析中的应用探讨

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摘 要：近年来，社会各行业对色谱分析法的研究日益深入，作用越来越明显，已成为药物、化学等工业部门主要的检验手段，也是目前化学、药品质量控制的关键技术。本文从超高效液相色谱法的概念入手，深入阐述了其在西药分析中的应用情况。

关键词：超高效液相色谱法；药物分析；西药；质量控制

高效液相色谱法是于上个世纪六十年代产生的一种现代化分析方法，它有着分析速度快、分离效率高、操作自动化的优势，是目前药物分析领域的重要检验手段和分析技术。超高效液相色谱法是基于高效液相色谱法的基础上形成的药物分析新技术，它是以高压输液泵、高效固定相、信息化、机械化以及高灵敏度的检测机械构成的，具备着分离速度快、分析效率高、灵敏度高且能反复测试的优点，时至今日已经被广泛的应用在各种药物质量检测中，对制药企业的生存和发展有着积极的推动意义。

1、超高效液相色谱法概述

超高效液相色谱法是基于过去高效液相色谱法的基础上结合现代化信息技术、电子技术和机械设备构成的检测新方法，是通过在传统的色谱法基础上引入气相色谱的概念和理论，并将两者结合加以改进，从而形成的一种现代化分离、分析方法。这种方法在应用的过程中是以高压输液泵、高效固定相为基础的现代化检测手段，具备着分离速度快、分析效率高、结果准确、灵敏度高且可以反复使用的优势。

就多年的工作实践分析，目前超高效液相色谱法有着流动相收集速度快、适用范围广、安全性高、节能的优势，特别适用于那些挥发性低、稳定性差、分子量大的高分子化合物当中，目前被广泛的应用在医学、药物学、化学、生物学等科学领域中。随着科技的进步和经济的发展，超高效液相色谱法的药物分析中的作用越来越重要，特别是在鉴定药物、化学制品的时候，它在世界范围内受到广泛的重视，是西药研究和检测的主要手段。

2、超高效液相色谱法在西药分析中的准备

在超高效液相色谱法中，药物成份保留时间和组成方式、药物性质有着密切的关系，这些数据都是定性数据，因此被广泛的应用在药物质量和药效鉴别当中。如：我国药典明确的规定了在药物分析检验工作中必须要注重设备、条件、适应性等多方面的研究。

2.1、仪器选择

在西药分析的过程中，所选用的仪器主要是高效液相色谱仪，在工作的过程中，色谱柱、流动相均应当按照国家药典规定进行，同时所采用的色谱柱填料主要是以有硅胶、化学键和硅胶构成的。其中化学键和硅胶主要是通过十八种烷基硅烷键合硅胶最为常见，其他的化学键和硅胶虽然也较为常见，但是在应用方面没有这种键合硅胶常见。

2.2、色谱条件

在西药分析的过程中，按照药品自身特性的不同，对于仪器的选择和适用性实验器械也不相同，也就是在工作中要按照预计规定选择仪器，并对这些仪器进行合理、科学的调试，确保其能够达到预计规定要求，或者是能够满足我国药典规定。在本次试验分析当中，整个分析条件如下：

（1） 色谱柱的理论板数（n） 在选定的条件下，注入供试品溶液或各品种项下规定的内标物质溶液，记录色谱图，量出供试品主成分或内标物质峰的保留时间tR（以分钟或长度计，下同，但应取相同单位）和半高峰宽（Wh/2），按n=5.54（tR/Wh/2）计算色谱柱的理论板数，如果测得理论板数低于各品种项下规定的最小理论板数，应改变色谱柱的某些条件（如柱长，载体性能，色谱柱充填的优劣等），使理论板数达到要求。

（2） 分离度

定量分析时，为便于准确测量，要求定量峰与其他峰或内标峰之间有较好的分离度。分离度（R）的计算公式为：

2（tR-tR）

R=──────────

W+W

式中：tR为相邻两峰中后一峰的保留时间；

tR为相邻两峰中前一峰的保留时间；

W及W为此相邻两峰的峰宽。

除另外有规定外，分离度应大于1.5。

（3） 拖尾因子

为保证测量精度，特别当采用峰高法测量时，应检查待测峰的拖尾因子（T）是否符合各品种项下的规定，或不同浓度进样的校正因子误差是否符合要求。拖尾因子计算公式为：

W

T=──────

2d

式中：W为0.05峰高处的峰宽；

d为峰极大至峰前沿之间的距离。

除另有规定外，T应在0.95～1.05间。

也可按各品种校正因子测定项下，配制相当于80%、100%和120%的对照品溶液，加入规定量的内标溶液，配成三种不同浓度的溶液，分别注样3次，计算平均校正因子，其相对标准偏差应不大于2.0%。

3、超高效液相色谱法的应用

3.1、在含量测定中的应用

用高效液相色谱法测定含量可以消除药物中的杂质，制剂中的附加剂及共存的药物对测定的干扰，因此药物成分含量测定中HPLC法应用广泛。测定供试品（或经衍生化处理的供试品）中各杂质及杂质的总量限度采用不加校正因子的峰面积归一法。计算各杂质峰面积及其总和，并求出占总峰面积的百分率。但溶剂峰不计算在内。色谱图的记录时间应根据各品种所含杂质的保留时间决定，除另有规定外，可为该品种项下主成分保留时间的倍数。

3.2、在添加违禁药物检查中的应用

近年来，食品、药品、保健品以及动物饲料等各方面频频出现非法添加违禁药物的事件，这类成分往往对患者造成病情不受控制、药物中毒等不良反应，严重者甚至威胁到患者生命。高效液相色谱法对添加违禁药物的日常检验工作提供了有力的技术支持。

3.3微柱高效液相色谱法

高效液相色谱法具有很多优点但也存在一些不足，如流动相消耗量大，所用溶剂大多有毒且价格昂贵等。特别是对于一些较复杂样品的分析，用单相分离分析方法往往很难完成。微柱高效液相色谱由于填充粒度小而密集，就等效于理论塔板数的增多，可使色谱柱的柱效提高。采用内径较小的柱子，可使纵向扩散减少，峰展宽效应大大降低，进而缩短了分析时间又提高了检测灵敏度。采用微柱还可以分析极少量的样品，使流动相用量大为减少，利于节约溶剂和环境保护。

3.4、主成份自身对照法

当杂质峰面积与成分峰面积相差悬殊时，采用主成分自身对照法。在测定前，先按各品种项下规定的杂质限度，将供试品稀释成一定浓度的溶液作为对照溶液，进样，调节检测器的灵敏度或进样量，使对照溶液中的主成分色谱峰面积满足准确测量要求。然后取供试品溶液，进样，记录时间，除另有规定外，应为主成分保留时间的倍数。根据测得的供试品溶液的各杂质峰面积及其总和并和对照溶液主成分的峰面积比较，计算杂质限度。

4、结束语

高效液相色谱法是现代药物分析中最高效、快捷的方法之一，具有专属性强、灵敏度高等特点，既可用于药物分离，也可用于定性定量分型，适用范围广因此在药物成分的分离与测定方面能够充分发挥其它分析方法无与伦比的优势。而且随着计算机软件的开发、专家系统的应用、检测手段的进步、各种联用技术的出现以及其他一些相关问题的解决，HPLC将称为今后质量规范化，国际化的重要途径之一。■

参考文献

[1] 刘斌. 高效液相色谱法在药物分析领域中的应用[J]. 中国中医药咨讯， 2009.1（4）：107.

[2] 孙毓庆. 现代色谱法及其在医药中的应用[M]. 北京：人民卫生出版社.2000.

[3] 吕璨慧，温哲. 高效液相色谱在中药研究中的应用进展[J]. 科技与生活， 2010（13）：91.