食品中三聚氰胺的检测方法进展

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摘 要：三聚氰胺是一种用途十分广泛的有机化工产品，由于其含氮量高达66%，因此近年来被不法商家利用。国内外三聚氰胺的分析方法很多，本文综述了三聚氰胺的各种检测方法，并且比较了不同方法的优缺点及其实用性，意在找出最快速、便捷、成本低的检测方法。

关键词：三聚氰胺 检测 食品 方法

中图分类号：TS201 文献标识码：A 文章编号：1672-3791（2013）06（a）-0229-02

三聚氰胺作为一种重要的化工原料，常用于制造三聚氰胺树脂该物质，是建筑业中常用的防火阻燃燃料[1]。三聚氰胺既不是食品原料，也不是食品添加剂，但与蛋白质相比其含氮量更高，并且价格较蛋白质便宜很多，因此一些不法商家将其添加在食品或饲料中，钻国家目前蛋白质检测方法的空子，以形成产品中蛋白质含量高的假象[2]，从而获得更高的利益。这种手段造成了极其恶劣的社会影响，也给国家带来了严重的经济损失。如今三聚氰胺的分析检测问题已成为一个热点问题，受到广泛的关注。本文对三聚氰胺的各种检测方法进行归纳总结，为三聚氰胺的快速检测提供理论依据。

近几年三聚氰胺的检测方法发展迅速，已经由早期的苦味酸法和升华法到后来的高效液相色谱法、液相色谱法-质谱联用法、气相色谱-质谱联用法，到现在的酶联免疫法、金纳米粒子光度法和胶体金免疫层析法等。三聚氰胺的分析检测方法在仪器上不断提高，在精确度上也是逐步提升，时间上不断缩短。

1 重量法

重量法包括苦味酸法和升华法，其反应原理简单，但精确度不高。

苦味酸法方法原理是将水加入试样，加热溶解后，加人苦味酸溶液，称量所生成的苦味酸三聚氰胺沉淀的质量，即测得三聚氰胺纯度含量。升华法测定原理是在升华装置中将试样在负压下进行加热，让三聚氰胺完全升华后，称其残渣量，即测得三聚氰胺纯度[3]。

2 高效液相色谱法（HPLC）

国家标准GB/T 22400-2008[4]公布了原料乳中三聚氰胺快速检测的高效液相色谱法，采用乙腈作为原料乳中的蛋白质沉淀剂和三聚氰胺提取剂，0.2μm微孔滤膜过滤后供HPLC测定。采用紫外/二极管阵列检测器检测，该方法的检出限为0.05 mg/kg，重复性好，再现性强。

王辉等[5]建立用高效液相色谱-二极管阵列法测定高蛋白食品中的三聚氰胺的检测方法。对不同样品采用不同的前处理方法，流动相为0.02 mol/L硫酸铵∶甲醇=94∶6（V∶V），二极管阵列检测器于235 nm波长下进行检测，并以保留时间和三维光谱图相似性系数进行定性，外标法定量。不同样品的加标回收率98.8%～101.5%，RSD小于1.2%。方法线性范围为0.1～150μg/mL，检测限为0.01μg/mL，相关系数R=0.9999。张美金[6]等人建立了采用HPLC检测宠物食品和饲料中的三聚氰胺，得出最低检测限位1.0 mg/kg，加标回收率为80%～110%，RSD

3 液相色谱-质谱联用法（HPLC-MS）

该检测方法检测过程很简单，灵敏度高，最重要的是它可以不需要标准品就可以进行定性和定量分析。

栾伟[7]建立了液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）用于宠物食品中三聚氰胺检测的方法，并将其与美国食品药品监督管理局US FDA公布的气相色谱-质谱和液相色谱方法进行了对比，结果发现LC-MS/MS的方法，前处理过程简单，是一种高灵敏度、高选择性的分析方法。

李爱军[8]等应用液相色谱-串联质谱法测定饲料中三聚氰胺残留，试样提取后，供液相色谱-串联质谱仪定性定量分析。采用电喷雾离子源，定性离子对为127.2/85.2和127.2/68.2；定量离子对为127.2/85.2。在添加了0.5～10.0 mg/kg的三聚氰胺标准品时的回收率为92.6%～103.2%，相对标准偏差在0.8%～2.0%，检出限为0.2 mg/kg。

4 气相色谱-质谱联用法（GC-MS）

气相色谱-质谱联用法就是进样后利用气相色谱将各物质分离，定性的测定三聚氰胺，再用质谱的方法测定该成分的分子量从而确定该物质的存在。娄大伟[9]等利用三乙胺、水、甲醇超声萃取样品中的三聚氰胺，结合气相色谱-质谱法对奶粉中三聚氰胺进行测定。使用三乙胺/去离子水/甲醇混合液对奶粉中的三聚氰胺进行提取后，进一步采取硅烷化衍生法，有效地去除了基质所带来的干扰，而在前处理中加入苯代三聚氰胺做内标，显著地提高了方法的精密度。

5 酶联免疫法

利用抗原与抗体的高特异性反应，通过合适的载体，使酶标抗原或抗体与待测样品反应，形成酶标抗原抗体复合物，在相应的酶底物参与下，复合物上的酶催化底物使之水解成有色物质。一定条件下，呈色物质与待测物的含量直接相关，因此可以根据呈色物质颜色的深浅，对待测样品进行定性定量分析。

陈俊峰[10]等将标准液和待测液置于酶联免疫试剂盒中振荡反应一段时间后，将混合液用酶标仪在双波长450 nm、630 nm下检测吸光度。试验结果表明使用酶联免疫吸附法进行三聚氰胺的含量测定，具有快速、简便、准确、灵敏度高等特点。但是此法对与三聚氰胺结构相似的也有一定程度的交叉反应，导致测得的结果偏高，因此一旦出现阳性样品还需要用GC-MS法加以确定，而且此法受温度影响较大。

6 金纳米粒子光度法

2011年，曾国平[11]等报道在PBS缓冲体系中，金纳米粒子与三聚氰胺形成粒径较大的聚集体，导致共振瑞利散射强度显著增强。在一定条件下，散射强度与三聚氰胺浓度成正比，由此建立了以金纳米粒子作光谱探针检测鲜牛奶中三聚氰胺的新方法。在优化的实验条件下，三聚氰胺的检出限为2.7×10-8 mol/L，本方法金纳米粒子无需修饰，在体系中仅加入一定量的单链寡聚核苷酸，实验表明该方法具有简便、快速、灵敏度高及选择性好等特点。2012年，孙海燕[12]等报道以金纳米粒子作为比色探针，建立了快速检测牛奶和鸡蛋中三聚氰胺的方法，该方法的加标回收率为95.0%～105.0%。

7 胶体金免疫层析法

胶体金免疫层析法是近10年发展起来的一项新技术，它是基于抗原抗体的特异性反应，用胶体金作为标记物。该方法操作简单、快速、特异灵敏，不需要仪器，不需专业技术人员操作，几分钟内即可通过目视判断检测结果，并可保持检测结果，比酶联免疫吸附法操作更简单，更适合在现场应用。2012年，周彤[13]等人采用戊二醛法制备三聚氰胺-BSA偶联抗原，胶体金标记三聚氰胺单克隆抗体，建立了检测三聚氰胺的胶体金免疫层析试验。结果显示，该试验具有良好的敏感性，胶体金免疫层析试验对鲜奶、奶粉和饲料样品中三聚氰胺的最低检测量分别为1.0、2.0和2.5μg/g，该法适合现场快速检测三聚氰胺。

8 结语

理想的分析技术应该满足以下条件：高灵敏度或低检测限，高度专一，分析时间短，成本低廉，便捷易携带，少量或不用预处理程序，适合复杂基质测定。由于三聚氰胺对食品安全构成的威胁，迫切要求开发更快速、低成本的检测方法，笔者全面分析了目前食品中三聚氰胺的检测方法，胶体金免疫层析法具有操作简单、快速、特异灵敏，不需要仪器，可以广泛地应用于实际生活。

参考文献

[1] 王延吉.有机化工原料[M].北京：化学工业出版社，2004：727-728.

[2] 朱鹤云，关皎，王黎明.三聚氰胺检测方法的国内外研究进展[J].吉林医药学院学报，2008，31（5）：289-292.

[3] 石向群，刘建云.三聚氰胺检测方法的研究进展[J].卫生职业教育，2009，27（2）：157-159.

[4] ICS 67.100 C 53 GB/T 22400～2008原料乳中三聚氰胺快速检测液相色谱法.2008（10）：132-134.

[5] 汪辉，曹小彦，彭新凯，等.高效液相色谱-二极管阵列法测定高蛋白食品中的三聚氰胺[J].食品与机械，2007，23（5）：114-116

[6] 张美金，林海丹，林峰，等.高效液相色谱法测定饲料和宠物食品中三聚氰胺含量[J].中国卫生检验杂志，2007，17（12）：2205-2206.

[7] 栾伟.液相色谱串联质谱法（LC-MS/MS）分析宠物食品中三聚氰胺[J].分析测试学报，2007，26（1）：285-286.

[8] 李爱军，张代辉，马书民，等.液相色谱-串联质谱法测定饲料中三聚氰胺残留.分析化学，2008，36（5）：699-701.

[9] 娄大伟，孙秀云，姜久媛，等.气相色谱-质谱联用法测定奶粉中的三聚氰胺[J].安徽农业科学，2012，40（17）：9461-9462，9505.

[10] 陈俊峰，贾敬亮，张红艳，等.酶联免疫法检测饲料中的三聚氰胺[J].黑龙江畜牧兽医，2012（4）：86-88.

[11] 曾国平，向东山，李丽，等.金纳米粒子作探针共振瑞利散射光谱法测定牛奶中三聚氰胺[J].化学学报，2011，69（23）：2859-2864.

[12] 孙春燕，张明伟.纳米粒子比色探针检测牛奶和鸡蛋中的三聚氰胺[J].生物技术与方法，2012（3）：98-99.

[13] 周彤，危丽俊，程祥磊，等.胶体金免疫层析法快速检测三聚氰胺[J].分析化学实验室，2012，31（9）：58-60.