20种水产养殖常用中草药体外抑菌试验研究

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摘要 采用试管倍比稀释法，选择大黄、黄芪、黄芩等20种中草药对淡水养殖常见2种主要致病菌进行体外抑菌试验，测定其最低抑菌浓度（MIC）。试验结果表明，大黄、黄芩、穿心莲、连翘、贯众的抑菌效果最好，从而为研制水产用的中草药方剂提供理论依据。

关键词 中草药；水产养殖；抑菌试验；最低抑菌浓度

中图分类号 S948 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2013）03-0303-01

我国水产养殖模式大部分属于高密度养殖，高密度养殖有较高的投资回报，但是容易大规模暴发病害，在实际生产中为了防治病害，大量使用化学药品及抗菌药物，进而给水产品质量带来隐患。目前，利用我国传统中草药防治水产病害、减少抗生素使用量及提高免疫力成为兽医药理学研究热点之一[1-3]。课题组根据2010年出版的兽药国家标准汇编中中药部分的内容结合实际应用，挑选出大黄、鱼腥草、黄芪等多种中草药进行抑菌效果测定，为增加抗菌中草药种类和制剂研发提供科学依据[4]。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 供试菌株。试验菌株共有3株，分别为：标准株嗜水气单胞菌嗜水亚种菌株（购于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号：cgmcc1.0927）；嗜水气单胞菌（从湖州地区患病甲鱼中分离得到）；爱德华氏菌。后2组菌株由浙江省淡水水产研究所实验室分离鉴定[5]。

1.1.2 供试药物。供试大黄、黄芪、黄芩、甘草、穿心莲、金银花、虎杖、大青叶、鱼腥草、板蓝根、柴胡、川楝子、黄柏、地锦草、五倍子、茵陈、连翘、陈皮、贯众、苦参，购于湖州开心人大药房。

1.1.3 培养基。营养肉汤培养基购于杭州天和生物制剂公司，121 ℃灭菌15 min备用。

1.2 试验方法

1.2.1 药液提取。水提法，取各种单味中药50 g，粉碎后加超纯水300 mL，温室浸泡过夜，煎30 min，纱布过滤药液，重复3次，最后将过滤液蒸馏浓缩至药液内含原药1 g/mL。

1.2.2 最小抑菌浓度（MIC）测定。采用试管倍比稀释法：1号试管加1.8 mL营养肉汤，2～6号试管加1 mL营养肉汤。在1号试管中加入配好的药液0.2 mL，充分混匀后用移液器吸取1 mL混合液加入第2管中，依次倍比稀释至第6管，混匀后弃去第5管中的1 mL液体，最后试管里的药液浓度比依次为1∶10、1∶20、1∶40、1∶80、1∶160、1∶320。第7管为生理盐水对照组[6]。将细菌置于营养肉汤中37 ℃培养24 h，校正细菌浓度至1×106 cfu/mL，取菌液0.025 mL加到各管中，混匀后，置于37 ℃培养箱培养24 h。MIC判定：以药物最低浓度管中无细菌生长者为该试验药物的MIC值[7]。

2 结果与分析

20种中草药提取液对3种细菌的体外抑菌试验结果见表1。除黄芪、甘草、鱼腥草、黄柏、陈皮外，其他中草药提取液对嗜水气单胞菌均有一定的抑菌效果，其中大黄、黄芩、穿心莲、连翘、贯众的抑菌效果最好，达到0.006 25～0.012 50 g/mL。虎杖、川楝子、茵陈、苦参、五倍子、大青叶等有较好的抑菌效果。中草药对爱德华氏菌的抑菌效果与嗜水气单胞（上接第303页）

菌的结果相近。

3 结论与讨论

在本试验中发现各种中草药的抑菌效果对嗜水气单胞菌和爱德华氏菌效果相似，可能是由于这2种菌都是革兰氏阴性菌，具体原因有待进一步的论证。

本试验采用试管倍比释法研究了20种中草药对水产中常见的2种细菌的体外抑菌效果，其中大黄、黄芩、穿心莲、连翘、贯众的抑菌效果最好，达到0.006 25～0.012 50 g/mL。但是根据我国传统的中兽药学，常见的单味药的作用要比复方制剂效果差。根据不同的配伍，效果相差较大，不同的药物有协同或者拮抗作用。科学配伍不同的药物组成复方制剂，能明显提高疗效[8]。

中草药具有来源广、毒性低、副作用小、不易产生抗药性等特点，近年来，中草药在水产养殖业中的应用越来越多，如提高水产动物营养、防治疾病、提高非特异性免疫等。2010年出版的兽药国家标准汇编中药方子有40个，其中水产用的有9种[9]。中草药中的多种生物碱、挥发油、有机酸等有效成分既有抗菌作用也有免疫作用，能够提高水生动物的免疫力进而提高自身的抗菌能力。本试验为研发提高水生动物免疫力的中草药复方制剂提供了一定的理论基础[10]。

4 参考文献

[1] 王雄，赵志光，邵爱华，等.八种中草药对常见病原菌的体外抑菌试验[J].甘肃农业大学学报，2010，45（2）：25-29.

[2] 曾健滢，何耀松，何春兰，等.金银花等8种中草药的体外抑菌试验[J].兽药与饲料添加剂，2008，13（1）：9-10.

[3] 闫茂仓，陈少波，单乐州，等.22味中草药对创伤弧菌和灿烂弧菌体外抑菌作用筛选[J].水利渔业，2010（2）：95-98.

[4] 李茜，张懿瑾，华汝泉，等.23种中草药及复方对鲫肠道3种细菌的体外抑菌试验[J].淡水渔业，2007，37（4）：7-11.

[5] 周冬仁，叶雪平，罗毅志，等.黄颡鱼鲇鱼爱德华氏菌的鉴定及生物学特性研究[J].水生生物学报，2010，34（2）：865-866.

[6] 姜新发.中草药提取物对水生动物常见病原菌的体外抑菌试验[J].饲料工业，2005，26（22）：28-29.

[7] PERRY J D，RILEY G，GOULD F K，et al.Alafo sfalin as a Selective Agent for Isolation of Salmonella from Clin-icalSamples[J].Cline Microbial，2002（400）：3913-3916.

[8] 王玉娥，邢晨光，王国良.5种海洋致病性弧菌对34种中草药敏感性的测定[J].水产科学，2008，27（5）：221-225.

[9] 段文龙，梁先明，徐士新，等.兽药国家标准汇编[M].北京：中国农业出版社，2010.

[10] 刘春，白瑞珍.双黄连口服液杀菌效果的实验研究[J].辽宁中医学院学报，2001，3（4）：305.