弗氏完全佐剂对小鼠细胞免疫功能的影响

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弗氏完全佐剂(CFA)是一种常用免疫佐剂，其提高体液免疫应答的作用已被公认，而对细胞免疫应答的影响鲜有报道。作者测定了一些注射佐剂后小鼠的细胞免疫应答指标，同时测定体液免疫指标对CFA剂量作一监测，报告如下。

1材料和方法

1.1实验材料

1.1.1实验动物昆明种小鼠24只，由本校实验动物室提供。

1.1.2主要试剂弗氏完全佐剂，为sigma公司生产。

1.2实验方法

1.2.1CFA对小鼠产生抗卵黄抗体水平的影响昆明种小鼠24只，体质量18～22 g，雌雄随机分组，8只/组，以5倍稀释鸡卵黄为抗原。免疫方法及程序见表1。

表1卵黄抗原免疫程序

组别注射物第1天第4天第10天佐剂组佐剂(ml)0.2抗原(ml)0.20.2非佐剂组抗原(ml)0.20.2空白对照组生理盐水(ml)0.20.20.2注：以上均为背部皮下多点注射

末次注射7 d后，将小鼠眼球取血并分离血清，用ELISA方法测定待检血清中抗卵黄抗体：鸡卵黄抗原5倍稀释包板，待检血清1∶10稀释，HRP-SPA按说明书配制。

1.2.2CFA对小鼠足跖肿胀的影响实验动物及免疫程序同表1，末次注射6 d后每只小鼠右后掌皮下注射卵黄(5倍稀释)0.02 ml/只致敏，第2天测量其足的后掌至踝关节体积(ml)，并与小鼠自身左后足体积作对照，计算足肿率，如下：

足肿率(%)=免疫后右足体积-自身左足体积自身左足体积×100%

1.2.3CFA对小鼠碳粒廓清实验的影响昆明种小鼠16只，体质量18～22 g，雌雄随机分组，分为佐剂组与对照组，8只/组。佐剂组小鼠腹腔注射CFA 0.2 ml/只，对照组腹腔注射无菌生理盐水0.2 ml/只，1 w后给2组小鼠分别经尾静脉注射20%墨汁0.2 ml/只，注射后1 min与5 min于小鼠眼球采血20 μl，置于2.0 ml 0.1%碳酸钠溶液中混匀，于680 ml波长下测定A值，并按如下公式计算K值：

K=logA5-logA1[]T5-T1=[SX(]logA5/A1[]4[SX)]

1.3统计分析数据均采用SPSS统计软件进行组间t检验，方差不齐时行t′检验。

2结果

2.1CFA对小鼠产生抗卵黄抗体水平的影响佐剂组小鼠产生抗卵黄抗体水平明显高于非佐剂组。见表2。

2.2CFA对小鼠足跖肿胀率的影响佐剂组比非佐剂组的足肿率明显提高。见表3。

2.3CFA对小鼠碳粒廓清能力的影响佐剂组小鼠碳粒廓清能力明显高于非佐剂组，结果见表4。

3讨论

实验表明，弗氏完全佐剂能显著增强机体细胞免疫应答能力。足肿胀实验是体内测定细胞免疫功能的指标，佐剂组足肿率高于非佐剂组，证明佐剂提高体液应答能力的同时，也能增强细胞免疫功能。

佐剂作用机制，以往比较侧重于与抗原混合后起到油包水作用，从而增强抗原表面积，或者使抗原缓解，增强与免疫细胞接触，从而达到增强免疫应答效果的作用。本次实验并未将抗原与佐剂混合为油包水状态，而是与抗原分离，先将抗原注射给小鼠，结果小鼠特异性抗体产生能力明显高于未注射佐剂组，其机制之一可能与活化巨噬细胞有关。通过碳粒廓清实验得以证实，佐剂确能显著提高小鼠巨噬细胞吞噬能力，而巨噬细胞在免疫应答中起到递呈抗原的作用，这与佐剂提高免疫应答有密切关系。

随着人们对佐剂的深入了解，目前对新型佐剂的研究开发进入了新的阶段。本实验为免疫调节剂的选择提供了一个客观的参照依据。

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