益气活血方对大鼠颈总动脉球囊损伤后血管壁的影响

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摘要：目的：观察益气活血方对大鼠颈总动脉球囊损伤后血管壁的影响。方法：SD大鼠48只，随机分成4组。用2.0F球囊导管自右股动脉插管建立大鼠左颈总动脉球囊损伤模型，治疗结束，麻醉，心脏放血处死大鼠，取损伤大鼠左颈总动脉，常规固定、包埋、切片，做HE染色和Masson染色。用HMIAS－2000型全自动彩色图象分析系统，观察动脉球囊损伤后不同时相点血管壁病理改变，进行比较分析。结论：成功复制球囊损伤术后颈总动脉再狭窄动物模型；益气活血方可显著防止或减轻大鼠颈总动脉球囊扩张后所致的血管狭窄，益气活血方大剂量作用更明显。

关键词：经皮腔内冠状动脉成形术；益气活血；再狭窄；中医药疗法

中图分类号：R－33　文献标识码：A　文章编号：1673－7717(2007)09－1929－03

经皮腔内冠状动脉成形术(PTCA)已成为越来越多冠心病患者广泛的治疗选择。PTCA后3－6个月再狭窄(restenosis，RS)发生率高达32％－57％，阻碍了其在临床上的应用和发展。现代研究表明PTCA后RS是一个多环节，连续的组织反应过程。为了预防和治疗PTCA后RS，人们对其进行了大量的基础和临床研究，但总体效果仍不尽人意。再狭窄的基本病理变化，中医认为本病属于“血瘀症”范畴，基本病机是本虚标实。本虚是以脏气亏虚为主；标实以血瘀多见，故治宜益气活血为主。在中医气血理论指导下，笔者根据RS发病机制遣方用药，选择黄芪、川芎、三七组成益气活血方，观察益气活血方对球囊损伤大鼠颈总动脉后再狭窄的干预作用，以期为中医药防治再狭窄提供初步的实验依据。

1　材料与方法

1．1　实验动物　清洁级雄性SD大鼠48只，体重350－450g，由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供。

1．2　主要仪器和试剂　2.0F Fogarty球囊导管(EdwardsLifesciences公司产品)；SSW－3X显微外科手术器械包：上海医疗器械有限公司手术器械厂(沪药械字2001第2020198号)；德国Leica2135切片机；HMIAS－2000型全自动彩色图象分析系统；戊巴比妥钠：中国医药集团上海化学试剂公司(批号F20020915)。

1．3　中药制备　益气活血方由(黄芪25g，川芎15g，三七5g)配伍组成。药物制备：三七粉碎过百且筛研成末，川芎采用水蒸汽蒸馏法提取挥发油，提药后药渣和黄芪一起加适量水煎煮2次，药液合并浓缩至一定浓度，加入三七粉、川芎挥发油混匀，高温消毒，分别制成大、小浓度为0.9g／mL和0.45g／mL浓度的汤药。

1．4　动物分组　雄性SD大鼠48只，按体重排序编号，随机数字表法将动物分成4组，每组2个时相点(5天和28天)，每个时相点6只动物。A假手术组：麻醉大鼠及分离左颈总动脉行右侧股动脉分支插管至左颈总动脉同模型组，但不使球囊充盈即撤出导管，余处理亦同模型组；B模型组；C益气活血方小剂量组；D益气活血方大剂量组。

1．5　动物造模　具体方法如下：腹腔注射戊巴比妥钠(40mg／kg)麻醉大鼠，手术中需要时给予10mg／kg补加。祛毛备皮(颈部下正中和右皮肤)，大鼠仰卧固定于手术台上。消毒大鼠颈部皮肤，沿颈正中线切开，暴露左颈总动脉。消毒大鼠右侧腹股沟处皮肤，分离股动脉，选择股动脉分支下约１cm处结扎远心端。用弹簧片手术剪在结扎上方作一适度切口，将2.0F球囊导管插入股动脉，在特定动物下(使大鼠颈部向上倾斜约30°角)，将球囊导管沿股动脉插至左侧颈内外动脉分叉处(从颈部暴露切口确认)。球囊充盈生理盐水(约0.2mL)，牵拉导管(移行约1.5cm)，造成颈动脉损伤，回抽生理盐水，使球囊恢复原状，然后再度送人导管。重复上述操作3次。撤出导管，结扎动脉切口近心端，缝合皮肤，术后肌肉注射青霉素20万U／(d・kg)3天。

1．6　动物给药　模型组不给药，造模前1天，中药各组根据体表面积换算法，分别按相应的浓度，以0.8mL／(100g・d)方案给大鼠灌胃，模型组及假手术组以0.8mL／(100g・d)生理盐水灌胃，连续治疗5天或28天。

1．7　取材切片与染色术后第5天和28天，大鼠麻醉(腹腔注射戊巴比妥钠30mg／kg)，心脏放血处死，取左颈总动脉损伤段约1.0cm，4％中性多聚甲醛固定液固定，石蜡包埋，做病理切片，切片厚度约5μm。做HE染色和Masson染色。

1．8　病理学观察指标　将图片输入HMIAS－2000型全自动彩色图象分析系统，观察内皮剥脱后5天、28天血管的炎性反应、血栓形成、内膜增生以及VSMC增殖反应和细胞外基质生成情况。

1．9　统计方法　数据统计采用SPSS12.0软件包，各组数据用x±s表示，各组均值两两比较，t检验。

2　结　果

2．1 大鼠颈总动脉球囊损伤程度分析。

各组动物球囊扩张术后5天与球囊扩张前比较，扩张后动脉管径明显增加(*P＜0.05)；但各组动物扩张后动脉管径差异均无显著性意义，说明各组动物球囊损伤的程度基本一致。

2．2　大鼠颈总动脉球囊损伤后病理学改变。

假手术组：光镜下，大鼠颈总动脉内膜光滑完整，管腔通畅，内膜、中膜和外膜分界清楚。内膜和中膜以波浪状完整连续的内弹力板为界。内膜为单层扁平状内皮细胞及其基质，中膜主要成分是平滑肌细胞，呈长梭形，以管腔为中心呈同心圆排列，约4－6层，细胞周围充满胶原和弹力纤维组织。

5天模型组：光镜下，可见损伤动脉管腔扩大，内皮细胞脱落，暴露内皮下的网状结构。内膜表面炎性细胞浸润．有些切片可见极少的内膜增生，部分内弹力板断裂，损伤达中膜层，近弹力板处平滑肌细胞坏死后消失，细胞层数减少。

28天模型组：光镜下，可见内膜明显不规则增生，内弹力板断裂，假腔形成，管腔明显变窄，迁移至内膜的细胞过度增殖，使内膜／中膜比达1:1以上，增生的细胞呈梭形状，这些细胞趋向于沿长轴排列或与血管腔的轴线垂直，其胞质呈嗜酸性，胞核呈椭圆形或圆形，支持平滑肌细胞来源。中外膜亦可见不同程度的增厚，并有少量泡沫细胞浸润，平滑肌细胞排列紊乱。

益气活血方大剂量组：经益气活血方治疗后，大鼠血管内膜增生程度较模型组明显减轻。中药各组内皮损伤后5天，内皮缺损面减少，动脉中膜无明显增厚，管腔无再狭窄。28天时中药各组也有内膜不规则增生，但其程度较模型组明显减轻，泡沫细胞减少，尤以益气活血方大剂量组为优。

3　结　语

本实验是在参考国外大鼠颈动脉再狭窄模型的基础上加以改进，利用2.0Fogarty球囊导管自右股动脉插管建立大鼠左颈总动脉再狭窄模型。国内报道较多的是自颈外动脉插管建立颈总动脉再狭窄模型。笔者通过比较发现，自右股动脉插管建立大鼠左颈总动脉再狭窄模型失血少，创面小，有利于提高手术成功率；而且该模型操作简便迅速，不必借助X光机，新生内膜形成可靠。最重要的是，本实验大鼠颈总动脉球囊扩张术所致管腔壁再狭窄的病理组织学改变与文献报道基本一致，即再狭窄形成的主要原因是平滑肌细胞向内膜迁移并增殖、细胞外基质大量形成和血管重构，故本法造成的再狭窄可作为模拟PTCA后再狭窄的实验动物模型。

从祖国医学理论看，PTCA后RS属“胸痹心痛”病范畴，与“血瘀理论”关系最为密切，其病位在心之络脉，基本病机是脏气亏虚，瘀血阻络。根据中医气气血理论，“血为气之母，气为血之帅”，通过组方研究，结果初步显示，益气活血方对球囊扩张大鼠颈总动脉后所导致的动脉再狭窄有一定的干预作用，说明益气活血是治疗PTCA术后RS的有效方法。