HPLC法测定安胎丸中黄芩苷的含量
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[摘要] 目的：测定安胎丸中黄芩苷的含量。方法：采用高效液相色谱法，色谱柱：Diamonsil C18柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流动相：甲醇-水-冰醋酸(50∶50∶1)；检测波长：315 nm。结果：黄芩苷的线性范围为12.75~127.50 μg/ml，平均加样回收率为99.48%，RSD为1.49%。结论：本法简便、准确、灵敏，可用于安胎丸中黄芩苷的含量测定。
[关键词] 黄芩苷；含量测定；药品标准
[中图分类号] R917 [文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2007）11（c）-080-02
Content determination of baicalin in Antai Pill by hplc
CHEN Xiao-qiong1,HUANG Wen-feng2
(1.Xinhui Hospital of TMC, Jiangmen529100,China;2.Yangjiang Institute for Drug Control, Yangjiang529500,China)
[Abstract] Objective:To determine the content of baicalin in Antai Pill. Methods: High performence liquid chromatography(HPLC) was used with chromatographic column of Diamonsil C18(4.6 mm×150 mm,5 μm). The mobile phase consised of methanol-water-glacial acetic acid(50:50:1) and the detective wavelength was 315 nm. Results: Baicalin had a good linearity in the range of 12.75~127.50 μg/ml, and the average recovery rate was 99.48% with RSD of 1.49% . Conclusion: This method is simple,quick,accurate, and suitable. It can be used for the quality control of Antai Pill.
[Key words] Baicalin;Content determination;Drug standard
安胎丸由黄芩、当归、白芍、白术、川芎五味中药组成，有养血安胎的作用，可用于治疗妊娠血虚、胎动不安、面色淡黄、不思饮食、神疲乏力。其药品标准已收载于《卫生部药品标准中药成方制剂》第1册[1]，但无含量测定项。为确保药品质量，保证用药有效，笔者建立了HPLC法对主药黄芩中黄芩苷成分的含量测定项，现将研究结果报道如下，以供读者参考：
1 仪器与试药
1.1 仪器
LC-10ATvp型岛津高效液相色谱仪；SPD-10Avp紫外检测器；Diamonsil C18色谱柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）。SK3300H型超声波清洗器（160 W，50 kHz）。
1.2 试药
黄芩苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：715-200111，含量测定用）；安胎丸（广东阳江制药有限公司生产，批号：060105、060106、060107、060108、060601、060602）；缺黄芩的阴性丸剂（广东阳江制药有限公司生产，批号：060106）；甲醇（Dima Technology Inc.，色谱纯）；其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 方法依据
参照《中国药典》2005年版一部“双黄连片”项下的含量测定方法[2]来制定本品含量测定的方法。
2.2 色谱条件与系统适用性试验
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-水-冰醋酸（50∶50∶1）为流动相，检测波长为315 nm。理论塔板数按黄芩苷峰计算应不低于2 000。
2.3 溶液的制备
2.3.1 对照品溶液的制备 取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 ml含0.127 5 mg的溶液即得。
2.3.2 供试品溶液的制备 取本品，剪碎，取约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇100 ml，密塞，称定重量，超声处理（160 W，50 kHz）30 min，取出，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液即得。
2.3.3 阴性对照溶液的制备 按处方比例及制法制备缺黄芩的阴性样品（批号：060106，广东阳江制药有限公司提供），按“2.3.2”方法制备缺黄芩的阴性对照溶液。
2.3.4 测定波长的选择 取黄芩苷对照品溶液（50 μg/ml）适量，在200~400 nm波长范围内扫描，结果在278 nm和315 nm波长处有最大吸收，但278 nm波长处杂质较多，峰面积所占比例较小，故选择315 nm波长处测定。
2.4 专属性试验
分别吸取黄芩苷对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液10 μl注入色谱仪。结果表明，对照品溶液、供试品溶液均在相同保留时间处出现色谱峰，阴性对照溶液的峰面积为样品峰面积的0.3%（＜0.5%），可认为无干扰，色谱行为图见图1。
2.5 线性关系的考察
精密称取黄芩苷对照品12.75 mg于100 ml容量瓶中，加50%甲醇适量，振摇使溶解，加50%甲醇稀释至刻度。然后分别精密吸取1，3，5，7，10 ml加入10 ml容量瓶中，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀；分别吸取10 μl，注入高效液相色谱仪中，测定峰面积。
以对照品浓度（C）作为横坐标，峰面积（A）作为纵坐标，进行线性回归，得回归方程：A=2.74×105C-2.65×104，r=0.999 9。结果显示，黄芩苷在12.75~127.50 μg/ml范围内具有良好的线性关系。
2.6 精密度试验
取黄芩苷对照品溶液(63.75 μg/ml)10 μl注入液相色谱仪中，测定6次，测得峰面积平均值为1 696 615，RSD=0.22%。
2.7 重复性试验
取同一批供试品（批号060106）约0.5 g，按“2.3.2”方法制备并测定，测得平均含量为58.04%，RSD=0.70%，表明方法重复性很好。
2.8 加样回收率试验
取同一批供试品（批号060106，黄芩苷含量为58.85 mg/丸）6份，精密称定，分别精密加入黄芩苷对照品2.420 0 mg，按“2.3.2”方法制备并测定，结果见表1。
2.9 稳定性试验
精密吸取同一批供试品（批号060106）溶液，分别在0， 2，4，6，8，10，24 h，注入高效液相色谱仪测定，结果RSD=0.60％，表明样品在24 h内具有很好的稳定性。
2.10 样品含量测定
在本实验的色谱条件下，分别取10 μl对照品溶液和供试品溶液注入液相色谱仪，测定6批安胎丸黄芩苷的含量，结果见表2。
3 讨论
笔者曾将流动相甲醇-水-冰醋酸（50∶50∶1）和流动相甲醇-水-磷酸（50∶50∶0.2）比较，发现前者的理论塔板数相对较高，故将磷酸改为冰醋酸。
该法简便、准确、灵敏度高、重现性好，可用于该药的含量测定，暂定本品每丸含黄芩以黄芩苷（C21H18O11）计，不得少于43.0 mg。
[参考文献]
[1]中华人民共和国国家药典委员会.卫生部药品标准中药成方制剂[S].1989.76.
[2]中华人民共和国国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京:化学工业出版社, 2005.407,附录114.
（收稿日期：2007-09-03）
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