HPLC法测定盐酸多奈哌齐口腔崩解片有关物质

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摘 要：目的：建立高效液相色谱法测定盐酸多奈哌齐口腔崩解片有关物质的方法。方法：采用Welchrom-C18（5？m，4.6*250mm）色谱柱，梯度洗脱；检测波长286nm柱温为50℃，流速为1.5ml/min，进样量为20ul，溶剂为乙腈-水（1：3）。结果：在该色谱条件下，盐酸多奈哌齐与各中间体、杂质分离良好，辅料对有关物质检测无干扰。结论：该方法专属性强、灵敏度高、重复性好，可用于该制剂中有关物质的检测。

关键词：盐酸多奈哌齐片 有关物质 高效液相色谱法

盐酸多奈哌齐（Donepezil hydrochloride）的化学名为1-苄基-4[（5，6-二甲氧基-1-茚满酮）-2-基）甲基]哌啶盐酸盐是治疗阿尔茨海默病的第2代胆碱酯酶（AchE）酶抑制剂，能够增加大脑乙酰胆碱含量，是治疗早、中期老年性痴呆的有效药物[1，2]。目前各国药典中尚未收载该品种的有关物质检查方法，国内文献亦尚未报道。为有效控制产品质量，本文采用高效液相色谱（hplc）法[3]，参考有关文献[4，5]对盐酸多奈哌齐口腔崩解片中有关物质进行了检测，结果该方法专属性强、灵敏度高、重复性好，可用于该制剂中有关物质的检测。

一、仪器与试药

1.仪器

岛津液相色谱仪（LC-10ATvp泵，SPD-10Avp紫外检测器，CBM-10Avp系统控制器）

2.样品

盐酸多奈哌齐对照品（中国药品生物制品检定所，批号：100650-200301，含量：99.7%）；盐酸多奈哌齐口腔崩解片（山东方明药业集团股份有限公司，批号：20100301、20100302、20100303，规格：5mg）；盐酸多奈哌齐杂质对照品A、 B、C、D、E均为试剂，乙腈、磷酸为色谱纯；水为纯化水。

二、方法与结果

1.色谱条件

色谱柱为Welchrom-C18柱（5μm，4.6*250mm），流动相A为0.1%磷酸溶液，流动相B为乙腈：水=5：3按表1进行梯度洗脱；检测波长为286nm，柱温为50℃；进样量：20μl，溶剂为乙腈-水（1：3）。

2.溶液的配制

2.1供试品溶液 取本品的细粉适量（约相当于盐酸多奈哌齐25mg），精密称定，置25ml量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

2.2对照溶液 精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。

2.3杂质对照品溶液 精密称取杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E适量，加溶剂溶解并稀释制成每1ml各含1.5ug的溶液，作为杂质对照品溶液。

3.方法学考察

3.1测定波长的选择

取盐酸多奈哌齐对照品、杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、空白辅料适量，用流动相溶解并稀释至约25μg/ml，参照紫外-可见分光光度法于200～400nm波长间扫描，结果显示多奈哌齐对照品、杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、空白辅料在286nm处吸收强度基本相当吸收系数比为1：1，辅料基本无吸收不干扰有关物质测定，故选择286nm为有关物质检测波长较为适宜。

3.2专属性考察

破坏性试验：取样品适量，经酸、碱、氧化、高温、光照破坏后，按“2.1”项下色谱条件进行测定，记录色谱图。结果表明，本品经酸、碱、氧化、热、光照破坏试验，破坏出的各降解产物峰均能与盐酸多奈哌齐主峰完全分离，且降解后总峰面积基本一致，根据物料平衡知，辅料未降解出杂质，表明该色谱条件适用。

即本色谱条件对降解产物专属性良好。

3.3 线性范围

取盐酸多奈哌齐对照品24.6mg，置于25ml容量瓶中，加溶剂使溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取5ml置于50ml容量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，作为线性贮备液。

精密量取线性贮备液0.2ml、0.5ml、1.0ml、2.0ml、3.0ml，分别置于10ml容量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀。

精密量取上述各溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，试验结果表明：在1.968μg/ml～29.52μg/ml范围内，供试品溶液浓度与峰面积线性良好。

3.4 精密度试验

取线性测定项下9.84μg/ml的溶液，作为精密度测定溶液，取此溶液20μl注入液相色谱仪，连续进样六次，记录色谱图，试验结果表明：此系统的精密度良好

3.5 定量限

精密称取盐酸多奈哌齐对照品9.4mg，置于100ml容量瓶中，加流动相使溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取1ml置于200ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为定量限测试溶液。精密量取此溶液20μl，注入液相色谱仪，S/N约为10，试验结果表明：在此色谱条件下盐酸多奈哌齐的最小定量限为9.4ng。

3.6检测限

精密量取定量限测定溶液3ml，置于10ml容量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，作为检测限测试溶液。精密量取此溶液20μl，注入液相色谱仪，在此色谱条件下，盐酸多奈哌齐的检测限为2.82ng。

3.7稳定性

按“2”项下方法配制供试品溶液、对照溶液，取对照溶液与供试品溶液各20μl，分别于0、2、4、6、8小时注入液相色谱仪，记录色谱图，结果表明：供试品溶液在8小时内稳定性良好。

3.8 样品测定

按“2”项下方法配制供试品溶液、对照溶液即杂质对照品溶液，精密量取20μl，照“1”项下色谱条件，进行测定，记录色谱图，杂质A、B、C、D、E按外标法计算，其他杂质按主成分自身对照法计算的有关物质，见表2。

三、 讨论

本实验对HPLC法测定盐酸多奈哌齐片有关物质的方法学进行了研究，结果表明在1.968μg/ml～29.52μg/ml浓度范围内线性关系良好（r=0.99996，n=6）。溶液在8h内稳定性良好。 故该法用于测定盐酸多奈哌齐口腔崩解片的有关物质，专属性强、简便，重复性好，结果准确可靠。

参考文献

[1] Thara M，Ohxishi A，Tomono Y，et al . Pharmacokinetics of E2020 ，a new compound for Alzheimer’s disease ， in healthy male volunteers[J].Int J Clin pharm Ther Toxi ， 1993 ，31（5）：223.

[2] OhnishiA，MiharaM，Kamakura H， et parison of the pharmacokinetics of E2020，a new compound for Alzheimer’s disease ， in healthy male volunteers[J].Int J Clin pharm Ther Toxi ， 1993 ，31（11）：1086.

[3] 国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版（二部）[S].北京：中国医药科技出版社，2010：765-768.

[4] 曹嘉，冉兰，陈霞.HPLC法检测盐酸多奈哌齐片中有关物质含量[J].中国药房，2010，21（13）：1239-1240.

[5] 赵海桥，苏贵勇，付建，刘存领.HPLC法测定甲磺酸伊马替尼片的有关物质[J].中国化工贸易，2013，5（7）：279-280.