PCR与ELISA检测乙型肝炎病毒标志物的比较研究
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【摘要】 目的 探讨乙型肝炎病毒HBV-DNA与常见HBV血清免疫学标志物之间的相互关系及其临床检测意义。方法采用pcr法对HBV-DNA、elisa法对HBV血清免疫学标志物同时进行检测,数据用SPSS 11.0统计软件处理。结果899例11种常见模式HBV-DNA阳性率依次为90.48%、79.12%、73.91%、66.67%、62.12%、30.68%、7.79%、7.69%、1.29%、8.54%、0.94%。HBV-DNA与HBsAg(P
我国是乙型肝炎高发区，约1亿人口为乙型肝炎表面抗原携带者。目前常用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中的HBV血清免疫学标志物来间接了解乙型肝炎的感染情况，近年来，迅速推广应用的聚合酶链反应(PCR)技术能直接检测乙型肝炎病毒DNA，为HBV复制状态、传染性及考核抗病毒疗效提供直接依据。本研究应用PCR法和ELISA法对899例门诊和住院的HBV感染者血清同时进行检测，对两种方法做出比较分析。
1 材料与方法
899例血清均来自2003年10月～2004年10月在我院门诊及住院的患者。用ELISA法检测HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe和抗HBc，同时用PCR检测HBV-DNA。ELISA乙肝检测试剂盒由上海科华实业技术公司提供，PCR试剂盒由深圳宝安公司提供，PCR仪为PE公司9600扩增仪。各项目检测均严格按照试剂盒说明书进行。
2 结果
2.1 11种HBV感染模式与PCR检测结果关系（表1）。899例血清11种常见模式HBV-DNA阳性率依次为90.48%、79.12%、73.91%、66.67%、62.12%、30.68%、7.79%、7.69%、1.29%、8.54%、0.94%。1～3种模式PCR检测阳性率较高，第1种模式（俗称“大三阳”）用PCR检测阳性率达到90.48%，第2种模式（俗称“小三阳”）PCR检测阳性率达到79.12%。另外，第11种模式（“两对半”五项全阴性）中有两例HBV-DNA为阳性，值得注意。
2.2 乙型肝炎病毒标志物与HBV-DNA的关系（表2）。899例血清中HBsAg(+)321例，其中PCR检测HBV-DNA(+)者205例，占63.86%。HBsAg(-)578例，其中PCR检测HBV-DNA(+)者21例，占3.63%. HBeAg(+)65例，其中PCR检测HBV-DNA(+)者55例，占84.62%。HBeAg(-)834例，其中PCR检测HBV-DNA(+)者171例，占20.50%。用统计软件SPSS 11.0行McNemar检验。
3 讨论
聚合酶链反应(PCR)是从分子水平检测病毒DNA或RNA，它在体外以病毒DNA为模板，特异地反复制靶DNA，拷贝数可达100万倍。因此，它可以检测出pg级或fg级的HBV-DNA [1,2]。只要病原体存在，机体就会有其核酸序列存在，因而用PCR及其相关技术检测病原体基因成为临床诊断病原体感染的有效方法之一。由于PCR技术敏感、特异且操作简便，加之近年来商品化PCR试剂盒的广泛应用，使PCR技术越来越成为病原体检测中一个必不可少的工具[3]。
本研究结果发现，前六种HBsAg(+)模式321例中，PCR法检出205例，阳性检出率为63.86%。第1种模式（大三阳）PCR检出阳性率最高，达90.48%。第2种模式（小三阳）PCR检出阳性率为79.12%，仅次于第1种模式。第3种PCR阳性检出率为73.91%。前三种HBsAg(+)模式PCR阳性检出率达81.41%（127/156），可以看出HBV血清标志物与HBV-DNA密切相关。同时也说明这三种HBV标志模式的HBV-DNA复制率最高,传染性最强。其余模式HBV-DNA复制水平相对较低，传染性弱。另外，不能认为HBeAg阴性者不需再查HBV-DNA[4] ，在HBeAg(-)834例中PCR检出HBV-DNA(+)者171例，占20.50%。可见HBeAg阳性不等于HBV-DNA全为阳性，且第11种模式两例乙肝“两对半”全阴者HBV-DNA为阳性，故ELISA法不能取代PCR法检测。
在HBsAg(+)321例中，HBV-DNA(-)者有116例，占36.14%，比例较高，这可能是由于乙型肝炎病毒整合于宿主肝细胞中，而血清中游离的HBV-DNA很少，或者由于病毒变异，使目标扩增片断缺失呈现假阴性[5],经过一段时间潜伏，当机体条件适合病毒复制时，PCR检测就可能转为阳性。只有当PCR与ELISA检测均为阴性时，我们才能认为不具传染性。说明PCR法并不能代替ELISA法对HBsAg的检测。
对PCR与ELISA检测的乙型肝炎血清标志物进行统计发现HBV-DNA与HBsAg，HBeAg和抗HBc有相关性(P
ELISA法检测结果全为阴性的212例中有两例阳性，占0.94%，可能是机体感染时间短，体内还没有产生抗体或病毒变异，复制时不表达HBsAg，所以，ELISA法检测呈阴性，PCR法检测呈阳性，这充分体现了PCR法比ELISA法更具高灵敏性和高特异性。
比较两种方法，PCR和ELISA的检测结果有良好的相关性，两者各有其优点，不可互相替代，且观察结果有互补之处，临床工作中宜将二者有机的结合起来，做出全面的观察和正确的判断，有利于早期发现传染源，更好地防治乙型肝炎，减少肝硬化、肝癌的发生。
参考文献
1Vrich Paul P,et al.Enzymatic amplification of hepatitis B virus DNA in serum compared with infectivity testing in chimpanzes. J Infection Dis，1989，160：37
2Zyzik E,et al.Assay of hepatitis.B.Virus genometites in sera of infected subjects.European Jaural of Clinical Microbiology，1986，5：330
3傅桂莲，樊绮诗.分子生物学检验技术.北京：人民卫生出版社，2003.138
4张留涛，吴淑华，钱霞，等.聚合酶链反应检测HBV-DNA在HBV不同血清免疫学标志组合中的应用价值[J].中华流行病学杂志，1998，15(5)：319
5王作强.广州医药，1994，6：41
6严根宝，等.中华传染病杂志，1992，10(2)：105
（收稿日期：2007-03-12）