地佐辛注射液细菌内毒素检查法研究

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【摘要】 目的 建立地佐辛注射液细菌内毒素检查方法。方法 参照《中国药典》2010版（二）部附录细菌内毒素检查法及其原则进行实验。结果 当地佐辛注射液稀释至100倍时可消除对鲎试剂与细菌内毒素凝聚反应的干扰。 结论 可以用细菌内毒素检查法对地佐辛注射液进行热原检查。

【关键词】 地佐辛注射液； 细菌内毒素检查； 鲎试剂； 干扰试验

地佐辛是一种强效阿片类镇痛药， 能有效缓解术后疼痛， 其镇痛强度、起效时间和作用持续时间与吗啡相当。当稳态血药浓度超过5～9 ng/ml时， 能较好的缓解术后疼痛， 但是对阿片类镇痛药过敏的患者禁用。笔者通过研究， 发现地佐辛注射液目前没有细菌内毒素检查法这方面的研究。为了控制地佐辛注射液的质量和减少临床热原反应的发生， 笔者参照有关文献[1， 2]，对地佐辛注射液细菌内毒素检测方法进行了可行性试验，现总结如下。

1 试验材料

1. 1 样品 地佐辛注射液3批， 规格1 ml（0.5 mg）， 批号 13042721，13051621 13062921， 生产厂家：扬子江药业集团有限公司。

1. 2 试剂 鲎试剂：批号121206， 规格0.1 ml：λ=0.5 EU/ml， 湛江安度斯生物有限公司；批号130120， 规格0.1 ml：λ=0.25EU/ml， 湛江博康海洋生物有限公司。

细菌内毒素工作标准品：批号2012-3， 效价120EU 规格1ml， 中国药品生物制品检定所。细菌内毒素检查用水， 以下简称（BET）， 批号1207150， 规格5 ml/支 湛江安度斯生物有限公司。

1. 3 仪器 XW_80A旋涡混旋器， 上海医科大学仪器厂；HH.214电热恒温水浴锅，江苏医疗器械厂。

2 试验方法与结果

2. 1 鲎试剂灵敏度复核[3] 按照《中国药典》2010版（二部）进行鲎试剂的标示灵敏度复核， 结果见表1所示。

2. 2 样品内毒素理论限值（L）的确定及最大有效稀释浓度倍数MVD的计算[3]。

2. 2. 1 样品内毒素理论限值（L）的确定 本品临床使用每次最大剂量是20 mg，成人体重按60 kg计，人体致热阀（k）为5.0 EU/（kg·h）则L=K/M=5.0 EU·（kg·h）-1÷（20 mg÷60 kg）=15 EU·mg-1。

2. 2. 2 最大有效稀释浓度倍数的计算MVD 根据公式计算MVD=CL/λ计算。

MVD（λ=0.5）=5.0 mg·ml-1×15 EU·ml-1÷0.5 EU·ml-1 =150倍。

MVD（λ=0.25）=5.0 mg·ml-1×15 EU·ml-1÷0.25 EU·ml-1 =300倍。

2. 3 样品干扰试验

2. 3. 1 干扰预试验 为排除样品自身对TAL与细菌内毒素凝胶反应可能存在干扰，取样品批号为13042721的原液， 分别按表2所列的稀释倍数稀释， 制成样品溶液浓度系列， 并制备含2λ 细菌内毒素的样品稀释液（PPC）进行干扰预试验， 同时作阳性和阴性对照。结果见表2。

由干扰预试验可见， 两个厂家鲎试剂对地佐辛注射液用细菌内毒素检查在100倍稀释时无干扰。

2. 3. 2 干扰确证试验 为了最终确定是否存在干扰， 现进行以下正式干扰试验。取地佐辛注射液用细菌内毒素检查用水进行稀释100倍， 按《中国药典》2010版（二部）附录细菌内毒素检查供试品干扰试验项进行试验， 结果见表3。

干扰试验表明， 最大浓度2.0λ管均为阳性， 最低浓度0.25λ管均为阴性， 阴性对照管均为阴性， 用BET水和样品溶液制成的内毒素溶液的反应终点浓度几何平均值Es在0.5～ 2.0λ， Et在0.5～2.0Es范围内， 说明样品在该浓度下对两批鲎试剂均无干扰， 可进行细菌内毒素检查。

2. 4 样品细菌内毒素检查 取地佐辛注射液3批， 将原液1：100倍稀释后用以上两批鲎试剂分别按《中国药典》2010版（二部）附录细菌内毒素检查法进行细菌内毒素检查， 结果3个批号供试品的内毒素检查均符合规定， 与家兔法检查一致。结果见表4。

3 讨论

地佐辛注射液的原液对TAL凝聚反应存在干扰， 通过预试验确证样品在1：100倍稀释时， 对细菌内毒素检查无干扰作用。本法操作简单， 精确度高， 重现性好， 因此本试验细菌内毒素法代替热原检查法是可行的[4]。通过本试验证明了地佐辛注射液的细菌内毒素检查法的可行性。本文通过干扰预试验确定样品的有效稀释倍数， 再由干扰试验进一步验证， 从而减少干扰试验的盲目性。用不同厂家的鲎试剂进行试验且结果相同， 由此说明鲎试剂可以用于本品的细菌内毒素检查。

参考文献

[1] 蔡彤，张国来，李波，等. 84种注射液药品细菌内毒素检查法的方法学研究.中国药学杂志， 2010，45（2）：150-155.

[2] 朱勤.复合磷酸氢钾注射液的细菌内毒素检查法.安徽医药， 2012，16（8）：1190-1192.

[3] 国家药典委员会.中国药典（二部）.北京：中国医院科技出版社， 2010：附录99-102.

[4] 王群，谢冬梅.阿扎司琼注射液的细菌内毒素检查法的探讨.安徽医药， 2011，15（5）：564-565.