夏膝口服液对自发性高血压大鼠心肌AT1蛋白含量的影响
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摘要 目的：观察夏膝口服液对自发性高血压大鼠(SHR)血压、心肌血管紧张素Ⅲ型（at1）受体蛋白含量的影响。方法：以缬沙坦为对照，用ELISA法测心肌AT1受体蛋白含量。结果：缬沙坦组降压幅度最大，与夏膝口服液中、低剂量组相比有显著性差异（P＜0.05），而与高剂量组比较则无显著差异（P>0.05）；心肌AT1受体蛋白含量，SHR空白组显著高于缬沙坦组和夏膝口服液高剂量组（P＜0.05），而缬沙坦组与夏膝口服液高剂量组之间则无明显差异（P>0.05）。结论：夏膝口 服液具有降低SHR血压及心肌血管紧张素Ⅲ型（AT1）受体蛋白含量作用，说明本药在某种程度上有类似ARB的作用机制。
关键词 夏膝口服液 自发性高血压大鼠 血压 血管紧张素受体 ELISA法
夏膝口服液经多年来临床应用降压效果理想，作者观察其对SHR血压、心肌血管张素II 1型受体表达的影响，从而进一步证明了夏膝口服液的降压作用，同时对其机理做出初步的探讨。
材料与方法
动物分组：12周龄SHR50只，均为雄性，体重200±20g。按体重用随机数字表法将50只大鼠随机分成空白组、阳性对照组、夏膝口服液高、中、低剂量组，每组10只。
药物制备及给药方法：夏膝口服液，缬沙坦。试验时5组动物每天按下列剂量灌胃给药1次：降压1号口服液高、中、低剂量组分别按21g/(kg・日)、14 g/(kg・日)、7 g/(kg・日)、给药，阳性对照组按0.013g/(kg・日)给予缬沙坦水溶液。空白组给同体积的生理盐水。连续用药2个月。
血压测定：采用无创测量大鼠血压的尾动脉搏动法，所有大鼠分别于给药前及给药后1个月、2个月各测血压1次，每次血压取3次测量的平均值。
用ELISA法测量心肌血管紧张素II1型受体蛋白含量：取心室肌用冷生理盐水制成10%心肌匀浆，用包被缓冲液稀释样本，取96孔板，以200μl/孔包被,4℃过夜,PBST洗板3次(0.05%吐温PBS),血清封闭(1%牛血清白蛋白PBS)37℃反应1小时,PBST洗板3次,以1:1000稀释一抗,200μl/孔, 37℃反应1小时,PBST洗板3次,以1:800稀释二抗辣根过氧化物酶,200μl /孔, 37℃反应1小时,PBST洗板3次,DAB洗板3次,DAB显色,50μl硫酸终止,测OD值。
结果
血压结果见表1。
讨论
中医认为肝肾阴阳失调是高血压产生的内在基础，黄永生导师经多年的临床实践对于高血压病的认识有独到之处，认为其病机关键是毒伤血络，而毒的产生责之于气血运行不畅。本着治病必求其本的原则，治疗以调整肝肾、化瘀通络为主，以达到除毒降压的目的。夏膝口服液由夏枯草、牛膝、茺蔚子三味药物组成。其中夏枯草：味苦辛、性寒，归肝、胆经，即可补益肝之阴血、清肝之热邪，又有疏通气血之功。其滋阴潜阳用以纠正高血压之阴阳失衡，而通络散结之能恰以调畅营气以散毒，是该方之君药；牛膝：味甘酸，性平，归肝、肾经，具有补益肝肾，滋阴潜阳之功，为臣药；茺蔚子：味甘、微寒、性凉，归肝，心包经。具有滋补肝肾之阴，活血通络之能。为佐使药。三药组合具有滋阴潜阳，活血通络之效，使肝肾阴阳平衡，气血畅通，营行毒除而降压。
RAS是机体内调节心血管活动和水电解质平衡的一个很重要的系统，在血压调节和高血压的发病中起重要作用，目前认为AngⅡ的经典生物学作用由AT1受体介导的。AT1受体分布广泛，在全身几乎所有组织都能找到，如血管、肾、肾上腺、心脏、肝、大脑、肺、生殖系统等。激动剂与AT1受体结合，引起G蛋白（Gq/11或Gi/o）与受体胞内第3环和C端结合，从而触发多条信号途径。通过这些途径，引起血管收缩、细胞增生和心肌收缩力增强等生理病理效应，导致血压升高、血管壁肥厚及心肌肥厚等异常情况。AT1受体激动时，通过上述一系列信号途径，血管收缩反应增强，血管平滑肌过度增生引起外周血管阻力增高，同时心肌收缩性增强引起心输出量增多，肾脏醛固酮分泌增加，肾小管重吸收增加，水钠潴留引起血容量增加，这些作用相互影响，成为高血压的重要发病因素，AT1受体发生异常变化，破坏体内升压系统与降压系统（包括缓激肽/NO/cGMP和前列腺素等途径）之间的平衡，可能是高血压形成的一个重要因素。本研究显示缬沙坦组降低自发性高血压大鼠血压幅度最大，与夏膝口服液中、低剂量组相比有显著性差异（P0.05）；心肌AT1受体蛋白含量，SHR空白组显著高于缬沙坦组和夏膝口服液高剂量组（P0.05）。说明夏膝口服液有降低心肌AT1受体蛋白含量的作用，这可能与组方中夏枯草，牛膝，茺蔚子三味药物的药理学效应用关。说明本药物在某种程度上有类似ARB的作用机制。
（鸣谢指导教师：黄永生）