石榴皮中鞣花酸的提取工艺研究
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[摘要] 目的：考察石榴皮中鞣花酸的提取工艺。方法：选用4因素3水平正交表L9(34)，以薄层扫描法测定鞣花酸含量，考察4个因素（溶剂类型，提取时间，提取次数，溶剂用量）、3个水平对鞣花酸提取率的影响。结果：鞣花酸的最佳提取工艺为用1 mol/L的盐酸水溶液、8倍量、回流提取60 min、提取2次；结论：溶剂类型对鞣花酸的提取率影响最大，本研究确定的鞣花酸提取工艺合理、可行。
[关键词] 石榴皮；鞣花酸；提取工艺；正交试验
[中图分类号] R927[文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2008）08（c）-050-02
Study on extract technology of ellagic acid in the peels of Punica granatum
LI Hai-xia1,WANG Cai-fang1, ZHANG Hong-ling1, FANG Xiao-yan2,DONG Bao-guo3
(1. College of Pharmacy, Zhengzhou University, Zhengzhou450051，China;2. Henan College of Traditional Chinese Medicine，Zhengzhou450003，China;3.Technology Limited Company of Zhengzhou Times Flagship, Zhengzhou450008，China)
[Abstract] Objective:To investigate the extract technology of ellagic acid in the peels of Punica granatum. Methods:The thin layer scanning method was used to determine the content of ellagic acid. The orthogonal design with three levels of four factors (the solvent, the extracting time, the extracting times and the amount of solvent) was adopted, using ellagic acid as index to evaluate the results. Results: The best extracting condition for ellagic acid was to add 8 times amounts of the water solution of 1 mol/L hydrochloric acid, and to reflux for 60 min and extract twice. Conclusion: The solvent has the maximal influence to the dissolutions of ellagic acid. The extract technology of ellagic acid was feasible and reasonable.
[Key words] Peels of Punica granatum.;Ellagic acid;Extract technology;Orthogonal test
石榴皮为石榴科植物石榴（Punica granatum.L）的干燥果皮，在传统中药及临床上较为常用。《中华人民共和国药典》2005年版一部用没食子酸法对石榴皮中的总鞣质进行了含量测定，而鞣花酸(ellagic acid, EA)为石榴皮中的有效成分之一，具有抗癌、抗菌、抗病毒、抗氧化等作用[1]。石榴皮中富含生鞣花酸，并且在酸性条件下水解可产生更多的鞣花酸，本文利用正交试验优选石榴皮中鞣花酸的提取工艺，为今后科学利用和开发石榴皮奠定基础。
1仪器与试剂
1.1仪器
JT2002型电子天平（上海精天公司），CAMAG-Ⅱ型薄层扫描仪，RE-52A旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)，SHZ-D循环水式真空泵(巩义市英峪予华仪器厂)。
1.2试剂与材料
石榴皮药材(购自河南郑州，由河南中医学院刘若庸教授鉴定)，鞣花酸对照品为自制（经1HNMR、13CNMR光谱鉴定），丙酮、乙醇、盐酸等其他所用试剂均为分析纯。
2方法与结果
2.1正交实验设计
鞣质极性较强，故在正交实验中选用极性较大的溶剂(A)：70%丙酮、1 mol/L HCl水溶液、95%乙醇，并考察提取时间(B)，提取次数(C)，溶剂用量(D)对鞣花酸提取率的影响,见表1。
2.2鞣花酸含量测定
2.2.1鞣花酸线性关系考察取鞣花酸对照品溶于10%二甲基亚砜(DMSO)乙醇中，制成3.20 mg/ml的溶液，分别取1、2、4、6、8 μl点于同一薄层板上，展开，取出，晾干，以鞣花酸含量为横坐标(X)，积分值为纵坐标(Y)绘制标准曲线，结果表明鞣花酸在3.20~25.60 μg之间，吸光度值与其浓度呈良好线性关系，回归方程：Y=0.088 69X+0.009 72，r=0.999 9。
2.2.2供试品溶液的制备平行取9份过40目筛的石榴皮粉末约0.5 g，精密称定，按照正交设计表中内容，加入不同溶剂，回流提取不同时间，滤过，残渣用提取溶剂20 ml洗涤，合并滤液和洗涤液，减压浓缩至干，残渣用10% DMSO乙醇溶液溶解，定容于100 ml量瓶中，经0.45 μm滤膜滤过，取续滤液，即得。
2.2.3薄层层析条件及扫描条件照薄层色谱法(《中国药典2005年版一部附录VIB》试验)。吸取供试品溶液4 μl，对照品溶液适量，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-甲酸-水(9∶2∶2)为展开剂，二次展开，每次10 cm，晾干，紫外光灯下显色，采用单波长线性扫描，狭缝0.3 mm×4 mm，选择鞣花酸最大吸收波长255 nm为λ[2]。
2.2.4精密度考察取同一供试品溶液，按“2.2.3”项下操作，连续测定6次，结果RSD为2.53%，表明精密度良好。
2.2.5重现性试验取同一供试品6份，分别按供试品溶液制备法制备，测定其中鞣花酸的含量，RSD为3.33%，表明样品处理过程和测定方法的重现性良好。
2.2.6稳定性试验制备的同一份供试品溶液，按“2.2.3”条件测定鞣花酸含量6次，每次间隔约4 h，RSD为2.67%，表明样品在24 h内稳定性良好。
2.2.7验证实验按其最佳提取工艺进行验证实验，鞣花酸的提取率平均为15.49% (n=3),与正交实验最大值接近，方法可行。
2.3结果
按上述供试品溶液制备方法及薄层层析色谱条件进行测定，由表2直观分析结果可知，对于鞣花酸的提取，影响因素的大小次序为A>B>D>C；最佳提取工艺为A2B3C1D2，即用1 M HCl、回流提取60 min、提取2次、8倍量溶剂，见表2。
3讨论
由本研究结果可知溶剂类型(A)对鞣花酸的提取率影响最大。1 mol/L HCl水溶液的提取率最高，其原因可能是在1 mol/L HCl水溶液回流提取时，石榴皮中所含鞣花鞣质在酸性条件下水解可生成鞣花酸，使其含量比其他两种提取溶剂都高。因素B、C、D极差(R)较小，与A相差10倍，所以对于因素B、C、D在实际应用中可视具体情况选择。天然鞣花酸，可作为保健品、化妆品、医药及科研的原料，当以获得鞣花酸为主要目的时，本研究确定的鞣花酸提取工艺合理、可行。
[参考文献]
[1]李海霞,王钊,刘延泽.石榴科植物化学成分及药理活性研究进展[J].中草药,2002,33(8):765.
[2]晋艳曦.葡萄汁中鞣花酸的定性和定量[J]. 饮料工业,1999,2(5):33.
（收稿日期：2008-07-15）
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