水杉种子中总黄酮含量及其清除自由基能力分析

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摘要：用紫外分光光度法，以芦丁作对照，测定水杉（Metasequoia glyptostroboides）种子中的总黄酮含量，以BHT和维生素C作对照，比较其对DPPH自由基的清除能力。结果表明，水杉种子中总黄酮含量为34.7 mg/g，其清除DPPH自由基的能力随质量浓度升高而增强，达到EC=145.6 μg/mL，低浓度时低于BHT，随着浓度增高，高于相同质量浓度的BHT，低于维生素C，但在400 μg/mL时，与维生素C持平。水杉种子中黄酮有较高利用价值，作为天然抗氧化剂有良好的应用价值。

关键词：水杉（Metasequoia glyptostroboides）种子；总黄酮；抗氧化；自由基

中图分类号：O657.32；R285 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）02-0423-02

水杉（Metasequoia glyptostroboides）为裸子植物门杉科水杉属，是世界珍稀孑遗物种。据《中国中药资源志要》[1]记载，其叶、种子有清热解毒、消炎止痛功效，常用于治疗痈疮肿痛，藓疮等症，《名医别录》列为中品，谓煮汤洗，可治臁疮，《本草纲目拾遗》载杉木油治一切顽癣[2]。水杉中化学成分较为复杂，包括黄酮类、萜类、木脂素、类胡萝卜素、甾醇等[3]。水杉中的黄酮具有抗心肌肥厚和心律失常的药理作用[4]，其叶中的总黄酮具有抗氧化功能[3]，早期研究表明，肿瘤、冠心病和衰老均与自由基引起的膜脂质氧化性损伤有关。目前已有的研究主要集中在水杉叶方面，而对水杉种子的研究较少。本试验对水杉种子中黄酮的自由基清除能力进行分析，为其进一步的开发应用提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

供试水杉种子于2011年11月采自信阳农业高等专科学校校园内。

TU-1810紫外可见分光光度计购自北京普析通用仪器有限公司，芦丁标准品（批号10080-200707）购自中国药品生物鉴定所。

1.2 方法

1.2.1 总黄酮的提取 称取1.0 g水杉种子粉末于25 mL三角瓶中，加60%（V/V，下同）乙醇10 mL，超声萃取30 min，静置，冷却至室温，过滤，药渣再加60%乙醇10 mL超声萃取30 min，过滤，药渣用60%乙醇5 mL清洗1次，过滤，合并滤液，定容至25 mL，得样品液。

1.2.2 标准溶液的制备 精确称取10.30 mg芦丁，以60%乙醇溶解并定容至10 mL，配成浓度为1.03 mg/mL的标准溶液。

1.2.3 含量测定 分别移取0.2、0.4、0.6、0.8、1.0和1.2 mL芦丁对照品溶液于25 mL容量瓶中，加 60%乙醇4 mL，摇匀，静置6 min，加5%（m/V，下同）NaNO2 0.4 mL，摇匀，静置6 min， 加10% Al（NO3）3 0.4 mL， 摇匀，静置6 min，再加入4% NaOH 4 mL，摇匀，用60%乙醇定容到刻度，放置15 min。同时作空白对照，分别在510 nm处测定吸光度，以对照品浓度C（mg/mL）为横坐标、吸光度A为纵坐标，绘制标准曲线，得A=0.079 5C-0.001 6，R2=0.996 8

1.2.4 DPPH自由基清除作用 1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（1，1-diphenyl-2-picrylhydrazyl radical 2，2-diphenyl-1-（2，4，6-trinitrophenyl）hydrazyl，DPPH）是一种稳定的自由基，在517 nm处有一强吸收峰，DPPH自由基与自由基清除剂的电子配对后吸收峰逐渐消失，并与其接受的电子数成定量关系，可用分光光度法对其抗氧化性进行定量分析[5，6]，用二丁基羟基甲苯（butylated hydroxytoluene，BHT）和维生素C作对照。分别吸取样品液2.0 mL，加入DPPH溶液 （0.2 μg/mL）2.0 mL，摇匀、静置30 min，以溶剂（70%乙醇）为空白，测定试液在517 nm处吸光度D1；同时测定样品液2.0 mL与70%乙醇2.0 mL的混合液在517 nm处吸光度D2；再测定DPPH溶液2.0 mL与70%乙醇2.0 mL的混合液在517 nm的吸光度D0。每组测定3次，按下式计算样品的清除率：清除率=[1-（D1-D2）]/D0×100%。

2 结果与分析

2.1 总黄酮含量

精确吸取样品提取液0.01 mL于5 mL容量瓶中，定容后，测得吸收度，重复3次，计算总黄酮含量（以芦丁计）为34.7 mg/g。

2.2 DPPH自由基清除能力分析

由图2可知，水杉种子总黄酮提取液清除DPPH的能力随其浓度升高而增强。总黄酮浓度低于100 μg/mL时，低于BHT的清除能力，随着浓度增高，其清除能力高于同水平的BHT，而低于维生素C，当浓度为400 μg/mL时，其清除能力与维生素C相当，且该结果与文献报道[6，7]基本一致。水杉种子总黄酮清除能力EC=145.6 μg/mL与BHT清除能力EC=149.2 μg/mL接近。

3 讨论

本试验测定的水杉种子总黄酮含量为34.7 mg/g，高于水杉叶的总黄酮含量[3，8]，因此水杉种子中总黄酮的利用价值高于水杉叶。水杉种子中的总黄酮比BHT抗氧化能力稍强，与维生素C的抗氧化能力相当，而大量的油溶性抗氧化剂如BHT不仅可导致动物肝脏肿大，还会增加微粒体酶的活性，具有一定的负作用[9]，因此水杉种子总黄酮作为天然抗氧化剂具有良好的开发和应用前景。

参考文献：

[1] 中国药材公司.中国中药资源志要[M].北京：科学出版社，1994.

[2] 姜明凯，厉建燕，孟昭礼，等.水杉叶甲醇提取物的农用抑菌活性研究[J].现代农业科技，2007（10）：55-56.

[3] 翁德宝，臧 蓉，阎白洋.水杉落叶中黄酮类化合物的测定与抗氧化作用的初步研究[J].中国野生植物资源，2005，24（4）：46-62.

[4] 刘维莞，杨晓茹，屠治本，等.水杉总黄酮抗实验性心肌肥厚及抑制心室C-Fos蛋白表达的作用[J].中草药，2001，32（4）：329-332.

[5] 胡喜兰，韩照样，陶 莹，等.DPPH・法测定17种植物抗氧化活性[J]. 食品科技，2006，31（10）：264-268.

[6] 鲁晓翔，唐津忠.紫背天葵中总黄酮的提取及其抗氧化性研究[J].食品科学，2007，28（4）：145-148.

[7] 罗开梅，黄轶群，曹 芳，等.莴苣总黄酮抗氧化活性研究[J].江苏农业科学，2011，39（6）：507-509.

[8] 王 ，王有为.不同季节水杉叶总黄酮含量变化的研究[J].武汉植物学研究，2003，21（5）：449-451.

[9] 朱宇旌，张 勇，王纯刚，等.红三叶黄酮抗氧化性研究[J].食品科技，2006，31（4）：708-811.