HPLC法测定蒙药当玛-5中胡椒碱的含量

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[摘要]目的：建立蒙药当玛－5中胡椒碱的高效液相含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法，用C18色谱柱(150×4.6mm)，以甲醇－水(77：23)为流动相，流速为0.6ml/min，检测波长为343nm，定量法为外标法。结果：胡椒碱的线性范围为0.0345μg－0.08051μg(r＝0.9998)，平均加样回收率为99.50％，RSD＝1.09％。结论：该方法灵敏、准确、重复性好，可用于蒙药当玛－5的质量控制指标。

[关键词]高效液相色谱法；当玛－5；胡椒碱

[中图分类号]R284.1　[文献标识码]A　[文章编号]1007-8517(2011)09-0005-02

蒙药当玛－5由石榴、豆蔻、荜茇、红花和肉桂等五味药材组成，具有暖胃消食，清糟归精等功效，临床上主要用于食欲不振、消化不良、胃脘冷痛、满闷暖气等病症，是蒙医临床上常用传统制剂之一，收载于《中国药典》。为建立该制剂含量测定方法，本文采用反相高效液相色谱法对当玛－5中荜茇所含有效成分胡椒碱进行含量测定，为蒙药当玛－5的质量标准制定和进一步开发研究奠定了良好的基础。

1、仪器与试剂试药

高效液相色谱仪(日本岛津)Lc－10ATVP泵，SPD－10AVP检测器，浙江大学N－3000色谱工作站；KQ－100型超声波清洗器(昆山市超声波仪器有限公司)；BS210S型电子天平(北京赛多利斯天平有限公司)；甲醇为色谱纯，水为高纯水，其他试剂均为分析纯；胡椒碱对照品(批号：0775－9702)由中国药品生物制品检定所提供；供试品当玛－5(批号：20090211、20090317、20090423)乌兰浩特中蒙制药有限公司提供。

2、色谱条件

色谱柱：采用C18柱(150×4.6mm)；以甲醇一水(77：23)为流动相；柱温：室温；检测波长：343nm；流速：0.6ml/min；定量法为外标法。

3、试验溶液的制备

3，1供试品溶液的制备

称取各批号当玛－5约0.7g，精密称定(n＝3)，分别置50ml具塞三瓶中，加甲醇50ml，超声40min，放冷，称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀滤过，精密吸取滤液2ml置10ml棕色容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

3.2对照品溶液的制备

精密称取胡椒碱对照品4.6mg，置10ml棕色容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，精密吸取1ml用甲醇稀释并定容至100ml，制成每1ml含4.6μg胡椒碱的对照品溶液。

3.3阴性溶液的制备

按处方量比例称取各味药(缺荜茇)制得空白样品，照供试品溶液制备方法制得空白(阴性)溶液。

4、干扰试验

供试品溶液、阴性溶液和对照品溶液在上述色谱条件下进样10.0μl，结果见图1、2、3。由图谱可知样品中胡椒碱与其他组分可达基线分离，阴性溶液无干扰。

精密吸取已制备的对照品溶液7.5μl、10μl、12.5μl、15μl、17.5μl进样，按上述色谱条件测定，以外标法峰面积定量，峰面积值Y为纵坐标，进样量x(μg)为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程：A＝17221＋6822669C，r＝0.9998；结果表明，胡椒碱进样量在0.0345μg－0.0805μg范围内峰面积与进样量呈良好的线性关系。标准曲线见图4。

5、方法学考察

5.1线性关系考察

5.2精密度试验

精密吸取对照品溶液及样品溶液各10.0μl，分别进样，重复5次测定峰面积，结果对照品RSD为1.25％，供试品RSD为0.83％。

5.3稳定性试验

精密吸取同一批号(20090317)的供试品溶液10.0μl，每隔2小时在上述色谱条件下连续进样5次，结果胡椒碱在8小时内峰面积值基本一致，测得峰面积平均值为408061，RSD为0.92％。

5.4重复性试验

精密吸取同一批号(20090317)供试品溶液10.01μl。各5份，分别按含量测定项下方法操作，并测得胡椒碱的含量，其结果RSD为0.87％。

5.5加样回收试验

称取已知含量的供试品(n＝5，批号：20090317)约0.37g，精密称定，分别依次加入适量对照品并置于具塞三角瓶中，再精密加入甲醇溶液50ml，密塞，称定重量，超声40min，放置室温，称定重量，用甲醇补足减失重量，摇匀后过滤，精密吸取滤液2.5ml置10ml棕色容量瓶中加甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，即得。按样品处理方法处理后进样10.0μl测定，计算胡椒碱回收率，结果见表1。

6、供试品的含量测定

分别精密吸取供试品溶液10.0μl，在上述色谱条件下测定峰面积，计算含量，结果见表2

7、讨论

蒙药当玛－5由石榴、豆蔻、荜茇、红花和肉桂等五味药材组成，荜茇为该复方制剂中的主药之一，胡椒碱为其主要活性成分。为提高药品质量、确保临床疗效，我们采用高效液相色谱法对蒙药当玛－5中荜茇所含胡椒碱进行了含量测定，为蒙药当玛－5的质量标准奠定了良好的基础。此外本实验用甲醇提取纯化样品，能使样品中的胡椒碱得到良好的分离，此方法简便、易于操作，为其他含荜茇蒙成药的质量分析提供了一种准确可靠的方法。

参考文献：

[1]内蒙古自治区卫生厅编，内蒙古蒙成药标准[s]，呼和浩特：内蒙古科学技术出版社，1984：78

[2]国家药典委员会编，《中国药典》(2005版一部)[S]，北京：化学工业出版社，2005：163，366