维胃方对胃溃疡大鼠胃粘膜氨基己糖含量的影响

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关键词 维胃方 胃溃疡 氨基己糖 大鼠 实验研究

维胃方是刘晓伟教授治疗消化性溃疡的验方。我们通过对实验性大鼠胃液PH值测定、胃粘膜氨基己糖含量变化的观察，探讨维胃方治疗胃溃疡的作用机制。

1 材料与方法

1．1 实验动物：Wistar雄性大鼠56只，180～220g，SPF级，由南方医科大学实验动物中心提供，动物合格证号：2006A052号。室温22～26℃，安静环境下适应性饲养3天，喂以固定的平衡饲料。

1．2 实验用药：维胃方（白及、三七、蒲公英、茯苓）均购自南方医院中药房，上述药物按一定比例混合后，按汤剂要求常规煎煮2次后浓缩取汁700ml，按人和大鼠体表面积系数换算方法，大鼠等用剂量=（人用剂量×0．018×5）g/kg，高、中、低剂量组生药量分别按1．5g/ml、0．75g/ml、0．375g/ml配制，放入4℃冰箱保存备用。雷尼替丁胶囊，每粒150mg（批号：0707146 广东佛山阿特维斯制药有限公司），按0．003g/ml浓度配置雷尼替丁混悬液200ml备用。

1．3 主要试剂和仪器：100%冰乙酸；1．0mg/ml标准牛血清蛋白溶液；考马斯亮蓝蛋白染色液；40ml/L乙酰丙酮溶液；0．1mg/ml的盐酸氨基葡萄糖标准液；显色剂：对-二甲氨基苯甲醛试剂；8．0ml/L盐酸溶液；8．3mol/L的NaOH溶液。UV-845+紫外分光光度计（惠普上海分析仪器有限公司）；高速台式离心机LD5-2A（北京医用离心机厂）；LeicaRM2135切片机（德国）；Olympus光学显微镜（日本）。

1．4 实验方法：详见于下。

1．4．1 模型制备：按照文献[1]方法。将大鼠禁食24小时后，常规消毒，按3．5ml/kg体重腹腔内注射10%水合氯醛麻醉，铺上手术洞巾，自剑突下沿腹中线剪一2cm切口，将胃体移出腹腔，用直径约5mm的圆形滤纸，蘸100%冰乙酸贴于胃窦前壁60秒后还纳胃体，缝合腹肌、皮肤，缝合线处及其周围再次消毒。

1．4．2 给药方法：根据完全随机法分7组，每组8只。正常组，正常饮食；模型组、自愈组，冰乙酸造模后，正常饮食；维胃方高、中、低剂量组，雷尼替丁组，均于造模术后第4天开始分别灌服各剂量维胃方、雷尼替丁混悬液2ml，时间7天。模型组造模术后4天麻醉处死取材；其余各组大鼠在造模术后第11天麻醉处死取材。

1．4．3 胃液PH值、胃粘膜大体标本观察及周围粘膜病理组织检测：由大鼠胃贲门取少量胃液滴于PH试纸，测定PH值。之后沿胃大弯剪开，展平，观察胃粘膜大体标本。取部分溃疡周围腺胃组织放入含10%甲醛溶液中固定12～16h（4℃）。经常规脱水，石蜡包埋，HE染色后置光学显微镜下观察。

1．4．4 胃粘膜中氨基己糖的测定：详见于下。

1．4．4．1 胃粘膜匀浆上清液的制备：用玻片将新鲜腺胃部胃粘膜组织及粘液轻轻刮下,低温冷冻后称重,置于2ml生理盐水中,按常法制备成匀浆,置玻璃试管中,3000r/min离心10min，取上清液储于-20℃备用。分别用于测定蛋白和氨基己糖。

1．4．4．2 胃粘膜蛋白含量测定[2]：根据考马斯亮蓝G-250染色法制作蛋白标准曲线。按表1操作,室温放置15min后于595nm波长处比色测定，空白管调零，比色记录吸光度，常法计算蛋白质浓度(mg/ml)。

1．4．4．3 胃粘膜氨基己糖含量测定：参考冯敬池等[3]报道的方法进行。精密称取盐酸氨基葡萄糖50mg溶解于500ml去离子水中配置成0．1mg/ml的盐酸氨基葡萄糖标准液。制备标准曲线:在试管中分别加入0．1mg/ml的盐酸氨基葡萄糖标准液0．25,0．5,0．75,1．0,1．25ml,分别加水至2．5ml,加乙酰丙酮0．5ml，置沸水浴15min，流水中迅速冷却,各加显色剂1ml,震荡混匀，置37℃水浴保温10min，空白用2．5ml去离子水代替标准样品液，空白管调零，立即于530nm波长处测定OD值。每个标本步骤同上。

1．4．4．4 氨基己糖含量的计算:氨基己糖(mg/g)=匀浆上清液氨基己糖(mg/L)/蛋白质浓度(g/L)。每个标本测得的OD值代入标准曲线的函数，计算出每个标本的氨基己糖浓度和蛋白浓度。

1．4．5 统计学处理：实验数据用均数±标准差（x±s）表示。用SPSS13．0软件包进行统计。

2 实验结果

2．1 光学显微镜下观察：①正常组：粘膜层完整，腺体排列整齐，浆膜层完整。②模型组：造模处粘膜缺损，偶及肌层，腺体完全破坏，粘膜下小动脉可见有血栓闭锁性动脉内膜炎；非造模处炎性细胞浸润严重，粘膜下层可见渗血；浆膜层有纤维蛋白渗出，亦有较多炎性细胞浸润。③自愈组：造模处粘膜缺损，偶及肌层，胃底腺轻度不典型性增生，再生腺细胞排列不整齐，粘膜下层炎性细胞浸润，并可见瘢痕纤维生成及血栓或炎性栓塞。④雷尼替丁组：造模处可见被新生的胃上皮细胞和腺细胞覆盖，粘膜全层均有炎性浸润，但较模型组和自愈组少，粘膜下层有部分小动脉血管内皮肿胀、增生，可见少量血栓，浆膜层偶见炎性浸润。⑤维胃方组：低、高剂量组与雷尼替丁组差别不大，其中高剂量组粘膜愈合情况相对较好，粘膜下血管未见明显病理改变，但炎性细胞浸润仍较严重；中剂量组粘膜基本完整，胃上皮细胞与腺细胞形态及分布良好，粘膜下微循环未见明显病理改变，浆膜层完整。

2．2 蛋白标准曲线、盐酸氨基葡萄糖的标准曲线：图1是在595nm波长处比色测定，图2是在530nm波长处比色测定，Y轴为测得的OD值，X轴为标准品浓度（mg/ml）。绘出一条表示X与Y之间的直线线性关系的曲线，相关系数R2表示曲线的线性是否很好,两条曲线相关系数均在0．99以上。

2．3 维胃方对胃液PH值及胃粘膜氨基己糖含量的影响：详见表2。

3 讨论

胃溃疡属于中医“胃脘痛”、“嘈杂”等范畴，脾胃虚弱、气滞血瘀是其病机，胃络损伤为基本病变。维胃方中茯苓健脾和胃、利水渗湿；蒲公英清热解毒、善疗疔肿、肠痈之疾；白及、三七收敛止血、消肿生肌。诸药同用，故收佳效。

氨基己糖水平被认为是衡量胃粘膜重要防御因子糖蛋白含量的重要指标。结果显示：造模胃溃疡的形成和氨基己糖含量显著降低相关。治疗后，维胃方高中低剂量均能使大鼠胃粘膜氨基己糖含量有所提高，其中以中剂量组最明显。雷尼替丁组与维胃方高、低剂量组比较无显著性差异（P＞0．05），与中剂量组比较有显著性差异（P＜0．05）。说明维胃方中剂量组效果优于雷尼替丁组。总之，维胃方治疗胃溃疡的机制在于提高大鼠胃壁粘液的分泌量，从而达到保护胃粘膜的目的。当然，维胃方抗溃疡效应是多种作用的综合效果，尚有待于进一步研究。

4 参考文献

［1］Okabe S.Chronicity of acetic and unclear in the rat stomach［J］.Am J Dig Dis,1972,17:619-620.

［2］ 朱雄伟，施文兴，湛先保，等.大鼠腹部开放伤海水浸泡后胃粘膜氨基己糖和磷脂的变化［J］.中国现代普通外科进展，2006，9(2)：77-79.

［3］冯敬池，冯丽英，宫心鹏.胃粘膜氨基己糖测定方法的研究及临床应用［J］.陕西医学检验，2001，16(4)：22-24.

收稿日期 2008-04-16