乙型肝炎患者外周血细胞及其与肝功能的相关性
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[摘要]目的:研究乙肝患者外周血CD5+B细胞百分率的高低与病情发展的关系;方法:检测50例乙型肝炎患者外周血CD5+B细胞,结果:急性乙肝组与正常对照组无显著性差别,其余各疾病组均显著高于对照组。将各疾病组CD5+B细胞百分率与肝功能指标进行相关性分析,发现慢性乙型肝炎和慢性重症乙型肝炎患者外周血CD5+B细胞百分率与谷丙转氨酶(ALT)和总胆红素(TB)呈正相关,乙肝后肝硬化患者外周血CD5+B细胞百分率与ALT、谷草转氨酶(AST),x-谷氨酸基转移酶(γ-GT),TB和直接胆红素(DB)的升高呈正相关,提示CD5+B细胞百分率的增高与肝功能的损伤有密切的伴随关系。结论:检测CD5+B细胞对乙肝的发病呈慢性化发展判断有一定的参考价值。
[关键词]CD5+B细胞;乙型肝炎;肝功能指标
我国是乙型肝炎的高发区,约有10%-20%的急性乙肝将转成为慢性乙肝、肝硬化,甚至发展成肝癌,严重地威胁着人们的健康。现在有证据表明,自身免疫在慢性肝病的发病中起作用。近年来发现一组独特的B细胞亚群,能分泌多反应性抗体,此种细胞为CD5+B细胞,与自身免疫病的发病关系密切。考虑此种细胞可能在乙型肝炎发病中起一定作用,本项研究检测了急性乙型肝炎、慢性乙型肝炎、慢性重症乙型肝炎和乙型肝炎后肝硬化患者外周血CD5+B细胞水平,并探讨其与肝功能指标的相关性。
1材料和方法
收集2008年长沙市第一社会福利院的急性乙型肝炎10例,其中男6例,女4例,年龄24~66岁,平均43.9岁;慢性乙型肝炎15例,其中男7例,女8例,年龄2~69岁,平均45.3岁;慢性重症乙型肝炎10例,其中男5例,女5例,年龄27~65岁,平均43.2岁;乙型肝炎后肝硬化15例,其中男8例,女7例,年龄21~70岁,平均47.1岁。各组男女患者比例1:1,均按1995年5月北京第五次全国传染病、寄生虫病学术会议讨论制定的诊断分型标准。健康志愿者10例,男女比例1:1,年龄25~62岁,平均42.2岁,经方差齐性检验,病例各组与对照组在年龄、性别方面均衡可比(P>0.05).
所有研究对象于早上7:00-8:00空腹采集静脉血8ml,分装于2支无菌试管中,第一管5m1,EDTA-Na:抗凝,进行CD5+B细胞百分率测定,第二管3m1,不抗凝,凝固后迅速分离血清,测定各种生化指标等。采用SPSS统计软件进行统计处理,用t检验和相关分析进行组间比较。
2结果
1)CD5+B细胞百分率比较
急性乙型肝炎、慢性乙型肝炎、慢性重症乙型肝炎和乙型肝炎后肝硬化患者与正常人外周血CD5+B细胞的百分率见表1。
表1显示急性乙型肝炎组外周血CD5+B细胞百分率与正常对照组无显著性差异,慢性乙型肝炎、慢性重症乙型肝炎和乙型肝炎后肝硬化组均显著高于正常对照组,而且慢性乙型肝炎和慢性重症肝炎组高于急性肝炎组,乙型肝炎后肝硬化组高于慢性乙型肝炎和慢性重症乙型肝炎组。
2)慢性乙型肝炎和慢性重症乙型肝炎患者外周血CD5+B细胞百分率与ALT的关系
由于慢性乙型肝炎和慢性重症乙型肝炎患者外周血CD5+B细胞百分数相近,故将两组合并,分析与肝功能指标的关系。为了解CD5+B细胞与ALT的关系,比较了本组不同ALT水平的患者CD5+B细胞的百分率,表2提示,随着ALT水平的升高,CD5+'B细胞百分率也升高,二者之间有一定的伴随关系。
3)慢性乙型肝炎和慢性重症乙型肝炎患者外周血CD5+B淋巴细胞百分率与胆红素的关系
25例慢性乙型肝炎患者按总胆红素不同水平分为两组,观察CD5+B细胞的百分率,两组CD5+B百分率相差显著(P
表3结果表明本组患者外周血CD5+B细胞百分率与其他肝功能指标无明确的相关性。
4)乙肝后肝硬化患者CD5+B细胞与肝功能的关系
肝硬化患者外周血CD5+B细胞百分率的增高与ALT,AST,γ-GT、总胆红素(TB)和直接胆红素(DB)的升高呈正相关,而与碱性磷酸酶(ALP)、乳酸脱氢酶(LDH)、总蛋白(TP)和白蛋白(ALB)的变化不相关。
3讨论
CD5分子存在于全部T细胞表面,它对T细胞活化起调节作用。1980年Royston在慢性淋巴细胞白血病患者B细胞表面发现了CD5分子,Caligaris等报告了健康人外周血的某些B细胞也有CD5分子表达.1988年Casali等证明CD5+B细胞是一组独立的B细胞亚群,此种细胞与自身免疫疾病的发病关系密切[1,2]。由于自身免疫反应参与慢性肝病的发病。因此,CD5+B细胞是否参与了慢性肝病的发病以及CD5+B细胞百分率的高低与疾病的活动性有无关系值得探讨。本项研究结果表明,正常人外周血B细胞中CD5+B细胞约占23%,与文献报道基本相符[]3,4],慢性乙型肝炎、慢性重症乙型肝炎和肝炎后肝硬化患者外周血CD5+B细胞百分率明显高于健康对照组和急性乙肝患者,说明肝炎后肝硬化、慢性重症乙肝、慢性乙型肝炎患者体内有较多的CD5+B细胞活化,而肝炎后肝硬化患者外周血CD5+B百分率又显著高于慢性乙肝和慢性重症乙肝患者,提示随着急性乙肝转为慢性乙肝、慢性重症乙肝最后转为肝硬化的病情恶化,CD5+B细胞百分率有逐步升高趋势,其原因可能是慢性乙肝患者体内存在T细胞的功能异常及多种细胞因子分泌失常,其中某些因子的失常或多种因子联合作用激活了CD5+B细胞,使之脱离静止状态,发生活化和扩增。
对慢性乙肝、慢性重症乙肝以及肝炎后肝硬化患者CD5+B细胞百分率与肝功能指标进行的相关性分析,发现慢性乙肝和慢性重症乙肝患者外周血CD5+B细胞百分率与ALT和TB呈正相关,肝炎后肝硬化患者外周血CD5+B细胞百分率与ALT,AST,r-GT,TB和DB的升高呈正相关,而与ALP,LDH,TP和ALB不相关。提示CD5+B细胞百分率的增高与肝功能的损伤有某种程度的伴随关系。
本组资料中肝硬化患者均为乙型肝炎后肝硬化,尽管目前对肝炎后肝硬化的发病机制不十分明了,但病毒抗原持续存在、肝损害的持续或反复发生是发病的重要原因之一。由于长时间的肝内炎症反应,导致大量CD5+B细胞活化,致使肝硬化患者CD5+B细胞百分率高于慢性乙型肝炎(含慢性重症乙肝),慢性乙肝患者CD5+B细胞百分率又高于急性肝炎患者。肝硬化患者CD5+B细胞的升高与病情的发展及肝功能的损害相伴,它们可能是同一病理过程的不同表现,故检测CD5+B细胞对乙型肝炎的发病及慢性化的判断有一定参考价值。
本研究中将B细胞从外周血中完全分离出来,是试验成功和数据可靠的关键。在正常情况下,外周血中T淋巴细胞占单个核细胞总数的75%左右,且所有T细胞表面都存在CD5分子。B细胞占淋巴细胞总数的20%左右,而CD5+B细胞又是其中的一小部分(约25%)。所以,若分离后B细胞组分中混有较多T细胞,将大大影响实验结果的准确性和数据分析。为此,磁性细胞分选技术进行B细胞的分离,磁式细胞分选仪特有专制的B细胞磁珠直径只有30nm,相当于一个病毒粒子大小,扫描电镜也仅刚能看见细胞表面的磁珠。MACS磁珠能形成稳定的胶体溶液,在磁场中既不沉淀,也不聚合。磁珠的大小和成分(铁氧化合物和多糖)使它不影响细胞活性。采用MACS分离B淋巴细胞,分离纯度高,经FACS鉴定可达96%,特异性高,细胞分离后,为本研究用免疫组织化学法检测CDS+B细胞百分率及进一步的RNA提取创造了有利的条件。
4结论
用磁式细胞分选仪自外周血单个核细胞中分离纯化CD19+B细胞,再用免疫组化法检查其中CD5+B细胞百分率,发现慢性乙肝、慢性重症乙肝、乙肝后肝硬化患者外周血中CD5+B细胞百分率显著高于正常对照组,依次为肝炎后肝硬化患者、慢性重症乙肝、慢性乙肝患者、急性乙型肝炎患者。肝炎后肝硬化患者CD5'B细胞百分率的升高与ALT,AST.γ-GT,TB.DB的异常呈正相关。