腹腔注射依托咪酯对老年大鼠认知功能的影响

开篇：润墨网以专业的文秘视角，为您筛选了一篇腹腔注射依托咪酯对老年大鼠认知功能的影响范文，如需获取更多写作素材，在线客服老师一对一协助。欢迎您的阅读与分享！

【中图分类号】R971【文献标识码】B【文章编号】1008-6455（2011）08-0459-01

依托咪酯是咪唑类衍生物，具有良好的镇静作用，其起效快，诱导迅速，对呼吸循环影响轻微，是老年病人麻醉的常用药物［1,2］。有研究表明，物可能是术后认知功能障碍发生的原因之一［3］。依托咪酯在老年患者中是否产生术后认知功能障碍目前还不清楚，本研究拟探讨依托咪酯对老年大鼠认知功能的影响，对依托咪酯在老年患者应用的安全性进行评价。

1 材料与方法

1.1 主要试剂及药品:依托咪酯，批号：7505C33，德国B.Braun公司提供；NMDAR一抗及二抗，由北京中杉生物制剂有限公司提供；Total RNA Ioslation System试剂盒、advantageTM RT-for-PCR Kit试剂盒、TITANIUM TM Taq PCR Kits试剂盒均由美国BD biosciencs Clontech公司提供。Western及细胞裂解液由江苏碧云天生物有限公司提供。

1.2 实验动物及分组:雄性Wistar大鼠（广东省动物实验中心提供）24只，月龄18月，体重350g～450g。随机分为3组（n8）：即对照组（C组）、腹腔单次注射依托咪酯组（E1），腹腔多次注射依托咪酯组（E2）。E1组腹腔单次注射依托咪酯20 mg/kg；E2组腹腔注射依托咪酯 20 mg/kg，间隔2h再重复注射，连续注射三次；C 组腹腔注射等容量的生理盐水。

1.3 Morris水迷宫试验:于给药后1d（T1）、2d（T2）、3d（T3）、4d（T4） 和5d（T5）时，参照文献［4］采用的方法进行Morris水迷宫实验。选择一个象限的固定位置将大鼠入水，通过自动图像拍摄系统记录游泳轨迹，以入水时找到平台的时间为潜伏期，其总行程为游泳距离，每天测试4次，取其平均值。

1.4 western blot:水迷宫结束后60min时，断头处死大鼠，取海马，放置于-70℃冰箱保存备用，采用western blot方法测定海马N-甲基D-天冬氨酸受体（NMDAR）的表达。取脊髓标本，加入裂解液，匀浆，4℃14000g离心5分钟，取上清，加入4倍样本缓冲液，变性5分钟，将样本加至7.5%SDS-聚丙烯酰胺凝胶恒压电泳，半干法转移至硝酸纤维素膜。3%BSA封闭3h，加入NMDAR一抗（1：200），4℃孵育过夜。TBST冲洗15min×3次，加入辣根酶标记的兔抗羊二抗（1：500），室温孵育1.5h，TBST冲洗15min×3次，DAB显色检测反应条带，以各组NMDRA表达与β-actin的比值为各组NMDAR的相对表达量。

1.5 RT-PCRNMDAR上游引物：5`-CACAGGAGAGGGTAAACAACAGCC-3`，下游引物5`-GAATCGGCCAAAGGGACTGAACC-3`，扩增片断长度为311 bp。取在-70℃冰箱中保存的海马大约50mg，参照Total RNA Ioslation System 试剂盒说明进行总RNA的提取。采用advantage TM RT-for-PCR Kit（BD biosciencs Clontech公司），按照说明，将上述提取的总RNA进行逆转录获得cDNA。采用TITANIUM TM Taq PCR Kits（BD biosciencs Clontech公司）取上述所得的cDNA进行PCR，扩增条件：94℃预变性 3 min，94℃ 40s，55℃ 40s，72℃ 50s，35个循环后72℃延伸 5 min。所得产物电泳后，将凝胶置于Image Master VDS（Pharmacie Biotech，USA），用Image Master 1D Version 2.0图像分析软件分析。PCR产物用光密度表示，以NMDAR cDNA条带和内参照条带的光密度的比值作为NMDAR的相对表达量。

表1 三组大鼠游泳潜伏期及游泳距离（x±s，n8）

与T1比较，*P

1.6 统计学处理： 采用SPSS11.0统计软件进行分析，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，组间及组内比较采用单因素方差分析，P

2 结果

与T1比较，三组大鼠在T2～T5潜伏期及游泳距离逐渐缩短（P0.05）,见表1。

与C组比较，E1 组NMDAR蛋白表达无统计学意义（P>0.05），但E1组大鼠NMDAR mRNA表达增加（P

表2 三组大鼠NMDAR蛋白表达及mRNA表达（,n8）

与C组比较，*P

3 讨论

认知功能障碍（Postoperative cognitive dysfunction,POCD）是老年患者术后常见的并发症，物可能是导致POCD发生的原因之一。 依托咪酯由于具有良好的呼吸循环稳定性，常常用于老年患者的麻醉诱导。本研究选择老年大鼠，观察依托咪酯单次给药和多次给药对其认知功能的影响。

Dixon等的研究表明［5］，依托咪酯预先给药可以减轻创伤性脑损伤，改善创伤后认知功能障碍，但创伤后给与依托咪酯其保护作用不如创伤前给药。在本实验中，各组大鼠在给药后潜伏期及游泳距离逐渐缩短，提示大鼠在此期间有一个学习记忆的过程发生。本实验提示单次注射依托咪酯对大鼠认知功能无影响，反复多次注射依托咪酯后可对大鼠的认知功能障碍产生一过性影响，但短期内可恢复。

依托咪酯作用于GABAA受体，通过竞争性地增加高亲和力结合位点的数目而增强与GABA的结合力，产生内向性Cl-电流。NMDAR是分布于神经元突触后膜上的特殊离子通道，是与学习功能有关的重要物质，既受突触电压调控也受谷氨酸神经递质控制。它可调控神经元的激活或死亡,树突、轴突结构发育及突触可塑性,影响神经元回路的形成及学习、记忆过程。本研究表明，反复多次腹腔注射依托咪酯后，海马NMDAR表达上调，NMDAR过度兴奋，导致神经细胞迟发性损伤，从而导致大鼠认知功能障碍。

总之，单次腹腔注射20mg/kg依托咪酯对大鼠认知功能无明显影响，反复多次腹腔注射依托咪酯20mg/kg后可致大鼠一过性认知功能障碍，可能与NMDAR表达上调有关。

参考文献

［1］ Sams L,Braun C,Allman D, Hofmeister E. A comparison of the effects of propofol and etomidate on the induction of anesthesia and on cardiopulmonary parameters in dogs. Vet Anaesthe Analg. 2008,35（6）:488-94

［2］ Zuckerbraun NS, Pitetti RD, Herr SM, et al. Use of etomidate as an induction agent for rapid sequence intubation in a pediatric emergency department.Acad Emerg Med. 2006,13（6）:602-9

［3］ Fodale V, Santamaria LB, Schifilliti D, Mandal PK. Anaesthetics and postoperative cognitive dysfunction: a pathological mechanism mimicking Alzheimer's disease. Anaesthesia. 2010; 65（4）:388-95

［4］ 胡镜清，温泽淮，赖世隆.Morris 水迷宫检测的记忆属性与方法学初探.广州中医药大学学报.2000.17:117-19

［5］ Dixon CE, Ma X, Kline AE.Acute etomidate treatment reduces cognitive deficits and histopathology in rats with traumatic brain injury. Crit Care Med. 2003;31（8）:2222-7