铁线莲里昂城的组织培养研究

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摘要 以铁线莲里昂城的茎段、茎节和花为外植体，在MS基本培养基中添加2.0、3.0 mg/L6-BA，0.05、0.1 mg/LNAA和1.5、2.0 mg/L KT，对其进行初代诱导和继代增殖培养。结果表明：粗嫩茎的成活率远高于细嫩茎，可达到96.7%；MS+2.0 mg/L6-BA+0.05 mg/LNAA+1.0 mg/L KT对里昂城花的诱导优于茎段和茎节，高达100%；MS+3.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+1.5 mg/L KT适合愈伤组织的增殖，茎段、茎节和花的愈伤增殖率均在90%以上。

关键词 铁线莲；里昂城；组织培养；诱导；增殖

中图分类号 S682.3 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2013）17-0186-01

毛茛科（Ranunculaceae）铁线莲属（Clematis L.）植物为常绿或落叶攀援灌木，该属植物枝叶扶苏，花大色艳，花型多变，花期长，园艺用途广泛，观赏价值高，是非常优良的垂直绿化材料，可点缀于围墙、栅栏、棚架或作绿篱，同时也可配置于假山或岩石园中彰显独特风格，是非常优良的垂直绿化材料。此外，还具有较高的药用价值。但是铁线莲属植物存在结实少或萌发时间长、发芽率低等问题，不宜采用有性繁殖，使得其园林栽培应用受到限制[1]。里昂城（Ville de lyon）是铁线莲属栽培观赏植物，使用组织培养技术可以快速繁殖大量无菌组培苗，解决铁线莲属植物在常规繁育中种子轻、成活率低、被毛等问题[2-4]。

1 材料与方法

1.1 试验材料

春季选取从欧洲引种的六年生铁线莲观赏品种里昂城健壮无病虫害的当年生嫩茎，以其茎段、茎节、花为外植体进行组织培养。

1.2 试验方法

将采好的材料用肥皂水浸泡20 min后用清水冲洗30 min，再在超净工作台中用0.1%升汞溶液中浸泡灭菌3 min，用无菌水清洗4次后进行接种。以MS培养基为基本培养基，附加不同浓度的萘乙酸（NAA）、6-苄氨基腺嘌呤（6-BA）和细胞分裂素（KT）来诱导愈伤组织和侧芽。将里昂城的外植体接种到MS+2 mg/L 6-BA+0.05 mg/L NAA+1 mg/L KT培养基中来比较不同外植体的诱导效果。将接种好的外植体放在温度20～22 ℃、光照12 h/d的环境中进行培养。

2 结果与分析

2.1 外植体选择

外植体的选择是进行组织培养建立无菌体系以及植株再生的关键前提。理论上所有的植物细胞都具有“全能性”，但要表达还是需要一定条件，除了植物生长调节剂和无机盐外，还需要一些极端的诱导因子，涉及到细胞全能性及全能性表达、分化和脱分化以及基因差别表达[5-6]。因此，接种时要选择在培养时易起反应、易进行再分化产生植株的部位作为试验材料。试验选取不同粗细程度嫩茎探讨其对里昂城成活率的影响。从表1可以看出，里昂城较细的嫩茎成活率仅为8.0%，而较粗嫩茎成活率达96.7%，较细嫩茎的成活率远小于较粗嫩茎。

2.2 愈伤组织的诱导

里昂城在接种后4 d就有茎节发芽，第5天茎段和茎段基部开始膨大，第10天开始长出淡黄色至绿色愈伤组织，但愈伤组织颜色不均匀，从黄色到绿色都有而且黄色愈伤组织较多呈颗粒状，质地较硬，生长缓慢且很少进行分化。

从表2可以看出，同一品种不同外植体诱导效果相差较大。接种30 d后里昂城花诱导率可达100%，而茎段和茎节都未超过70%，但是有1/3的茎节长出侧芽。

2.3 愈伤组织增殖

将里昂城长出愈伤组织的茎段、茎节和花转接到MS+3.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+1.5 mg/L KT和MS+3.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+2.0 mg/L KT中，发现其增殖很快，3 d后就能观察到愈伤组织明显增大，第13天愈伤组织增大1倍，第8天时茎节长出第1个丛生芽。

从表3可以看出，不同浓度KT对愈伤组织增殖效果差异很大，1.5 mg/L KT对茎段、茎节和花的愈伤增殖率均在90%以上，而2.0 mg/L KT对茎节愈伤增殖率仅有10.7%。由此可见，并不是KT浓度越高对愈伤诱导率越有利。当KT为1.5 mg/L时形成的愈伤组织色泽比较整齐，泛着黄绿色光泽，质地较软，不成坚硬的粒状物，说明MS+3.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+1.5 mg/L KT较适合愈伤组织的增殖。

3 结论与讨论

试验结果表明，粗嫩茎的成活率远高于细嫩茎，可达到96.7%；MS+2.0 mg/L 6-BA+0.05 mg/L NAA+1.0 mg/L KT对里昂城花的诱导优于茎段和茎节，高达100%；MS+3.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+1.5 mg/L KT适合愈伤组织的增殖，茎段、茎节和花的愈伤增殖率均在90%以上。

较细的嫩茎含营养少，形成层薄壁细胞少或没有，与培养基接触面小，不易吸收营养或因切口收缩而吸收不到营养，消毒过程很容易死亡；花的诱导效果优于其他外植体可能是因为植物的花比一般器官和组织营养含量高，且含生殖细胞，所以比其他部位更易诱导愈伤组织。

4 参考文献

[1] 蔡正旺，黄勇.铁线莲属植物的研究进展[J].安徽农业科学，2008（18）：7632-7634.

[2] 泽仁旺姆，尼珍，潘多.甘青铁线莲的再生植株[J].科技，2002，113（9）：61.

[3] 管开云，李志坚，李景秀，等.铁线莲属植物的引种栽培研究初报[J].云南植物研究，2002，24（3）：392-396.

[4] 蔡艳飞，李世峰，李涵，等.中国铁线莲属植物研究进展[J].中国农学通报，2009，25（4）：195-198.

[5] 黄坚钦.植物细胞的分化与脱分化[J].浙江林学院学报，2001，18（1）：89-92.

[6] 巩振辉，申书兴.植物组织培养[M].北京：化学工业出版社，2007.