HPLC法测定强肝片中芍药苷的含量

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[摘要] 目的：建立强肝片中芍药苷的含量测定方法。方法：采用hplc法测定芍药苷的含量，色谱柱为Diamonsil C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为甲醇-0.05 mol/L磷酸二氢钠（30∶70），流速为1 ml/min，检测波长为 230 nm。结果：芍药苷进样量在0.101 6～0.508 0 μg 范围内线性关系良好（r=0.999 9），平均回收率为98.5%，RSD为1.7%（n=5）。结论：本方法准确、稳定、重现性好，可作为强肝片中芍药苷的含量测定方法。

[关键词] 强肝片；芍药苷；HPLC；含量测定

[中图分类号]R927.2 [文献标识码]B [文章编号]1673-7210（2009）05（c）-050-03

Content determination of paeoniflorin in Qianggan Tablets by HPLC

HU Donghui1, LIANG Minghui2

(1.Medicament Office, Dandong Hospital of Chinese Medicine, Dandong 122000, China; 2.Liaoning Tianshili Medicine Company, Shenyang 110001, China)

[Abstract] Objective: To setup a method of content determination of paeoniflorin in Qianggan Tablets. Methods: Paeoniflorin was determined by HPLC, the sample was separated on a Diamonsil C18 column(150 mm×4.6 mm, 5 μm) with the mobile phase consisted of methanol-0.05 mol/L sodium dihydrogenphosphate(30∶70) at the flow rate of 1 ml/min, the detection wavelength was set at 230 nm. Results: The linear range of paeoniflorin was 0.101 6-0.508 0 μg(r=0.999 9), the average recovery was 98.5% with a RSD of 1.7%(n=5). Conclusion: This method is accurate, stable, reproducible, and it can be used to determine the content of paeoniflorin in Qianggan Tablets.

[Key words] Qianggan Tablets; Paeoniflorin; HPLC; Content determination

本制剂由强肝胶囊改剂型制成，经临床研究表明，强肝胶囊对慢性乙型肝炎纤维化[1-3]、非酒精性脂肪肝[4-5]、脂肪肝[6]、酒精性脂肪肝[7]、肝硬化[8]均具有较好的治疗作用。在选定的色谱条件下，供试溶液中的芍药苷与相邻组分分离度良好，阴性液无干扰。经方法学考察，本法的重复性、稳定性、精密度、回收率试验均符合有关规定，因此确立本制剂定量指标为芍药苷，定量方法为高效液相色谱法。

1 仪器与试药

1.1 仪器

日本岛津LC-10AT液相色谱仪，SPD-10AV检测器。

1.2 试药

强肝片（大连汉方药业，批号为031101、031102、031103）；芍药苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号为110736-200628）；甲醇为色谱纯，其他试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验[9]

色谱柱为Diamonsil C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为甲醇-0.05 mol/L磷酸二氢钠（30∶70），流速为1 ml/min，检测波长为 230 nm，柱温为25℃，理论塔板数按芍药苷色谱峰计算不得低于4 000。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备精密称取芍药苷对照品适量，加甲醇制成每毫升含20 μg的溶液，作为对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备取本品装量差异项下片剂，研细，精密称取0.5 g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 ml，称重，超声处理30 min，取出，放冷，称重（补足原重量），摇匀，滤过，再经微孔滤膜（0.45 μm）滤过，溶液备用。

2.2.3 阴性对照液的制备取处方除去芍药以外的其他药材，按供试品制备方法制成阴性对照液。

2.3测定法

分别精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10 μl，注入液相色谱仪中，测定，即得。

2.4 测定波长的确立

经参考有关文献及绘制紫外图谱，确定测定波长为230 nm。紫外图谱测定条件：溶剂为甲醇，扫描纸数为40 nm/cm，扫描区间为200～400 nm。

2.5 阴性干扰试验

精密吸取供试品溶液、阴性对照液、对照品溶液各10 μl，注入液相色谱仪中，绘制液相色谱图，由色谱图可知，在对照品色谱相应的位置上，供试品溶液具有相同保留时间的色谱峰，阴性对照液在此峰位无吸收，对本品中芍药苷的含量测定无干扰，方法专属性良好，见图1。

2.6 对照品纯度检查

芍药苷对照品，由中国药品生物制品检定所提供，批号为110736-200628，为含量测定用，经液相色谱法归一法测定，含量符合要求，见图1 A。

2.7 线性关系考察

精密称取芍药苷对照品12.70 mg，置50 ml容量瓶中，加甲醇溶解，再加甲醇至刻度，摇匀，精密吸取2.5 ml，置25 ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，制成每毫升含25.40 μg的溶液，作为对照品溶液。分别精密吸取4、8、12、16、20 μl溶液，注入液相色谱器仪中，测定色谱峰面积，测定结果见表1。以进样量为横坐标，色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，经线性回归，得回归方程Y=1 153 682X－7 769.7（r=0.999 9），由测定结果可知，芍药苷进样量在0.101 6～0.508 0 μg 范围内线性关系良好。

表 1 线性范围考察结果

Tab.1 Results of linear range of paeoniflorin

2.8 稳定性试验

取本品20片，研细，取粉末0.5 g，精密称定，制备供试品溶液，精密取同一供试品溶液10 μl（批号为031101），按0、2、4、6、8、10 h时间间隔，分别进样分析，测定色谱峰面积，测定结果见表2。结果提示，供试品溶液制备后10 h内测定，色谱峰面积无明显变化，在此时间内，待测组分化学性质稳定。

2.9 精密度试验

取本品20片，研细，取粉末0.5 g，精密称定，制备供试品溶液。分别精密吸取10 μl，连续进样5次，按前述色谱条件进样分析，测定色谱峰面积，测定结果见表3。测定结果表明，本试验精密度符合有关规定。

表 3 精密度试验结果

Tab.3 Results of precision

2.10 重复性试验

取5份样品（批号为031101）各20片，研细，取0.5 g，精密称定，分别按供试品溶液制备方法操作，测定，测定结果见表4。测定结果表明，本试验重复性符合有关规定。

表 4 重复性试验结果

Tab.4 Results of repetition

2.11 回收率试验考察

取本品5份（批号为031101，含量为0.364 mg/片，装量为0.40 g/片），每份各10片，研细，取粉末0.5 g，精密称定，精密加入146.6 μg/ml对照品溶液5 ml，按样品测定方法操作，测定，测定结果见表5。测定结果提示，本方法回收率在96.0%～100.5%之间，RSD为1.7%，符合有关规定。

2.12 含量测定

按前文方法操作，测定3批样品中芍药苷的含量，测定结果见表6。根据测定结果，暂定本品每片含芍药以芍药苷（C23H28O11）计不低于0.35 mg。

3 讨论

强肝片由芍药等十六味中药经提取加工制成，芍药是强肝片中的主药，芍药中芍药苷的差异较大，为保证本制剂的稳定性，对芍药苷进行含量测定具有重要意义。在检测过程中，以甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钠（30∶70）为流动相，色谱平衡时间应略长，否则不能正常检出。

[参考文献]

[1]马周旺,杨俊杰,程卫东,等.强肝丸预防四氯化碳诱导大鼠肝纤维化的实验研究[J].陕西中医,2007,28(11):1561-1563.

[2]薛桂芹,季风帆.强肝胶囊治疗慢性乙型肝炎肝纤维化80例[J].山东中医杂志,2004,23(7):404-405.

[3]綦怀纲.苦参素联合强肝胶囊治疗慢性乙型肝炎肝纤维化35例[J].现代中西医结合杂志,2007,16(6):758-759.

[4]陈泽雄,张诗军,尹丽荣.强肝胶囊治疗非酒精性脂肪肝的临床观察[J].中国中药杂志,2006,31(20):1739-1741.

[5]邢练军,马赞颂,柳涛,等.强肝胶囊对非酒精性脂肪肝大鼠肝脏脂质的影响[J].上海中医药杂志,2008,42(12):61-63.

[6]刘燕玲,王素玲,张力,等.强肝胶囊治疗脂肪性肝病的临床研究[J].河北中医,2007,29(12):1122-1124.

[7]张显耀.强肝胶囊治疗酒精性肝病126例疗效观察[J]浙江中医杂志,2007,42(l):58.

[8]陆定波.拉米夫定联合强肝胶囊治疗乙型肝炎早期肝硬化28例[J].中西医结合肝病杂志,2007,17(4):240-241.

[9]国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京:化学工业出版社,2005.

（收稿日期：2009-02-19）