多指标正交试验法优选桂黄降脂颗粒水提工艺

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摘要：目的：优选桂黄降脂颗粒的最佳水提工艺。方法：采用正交试验法，以水提物的干浸膏重量、有机酸、丹参素钠和橙皮苷的含量为综合评分指标，多指标成分优选桂黄降脂颗粒的最佳水提工艺。结果：桂黄降脂颗粒最佳水提取工艺为：浸泡30 min，加8倍量水，煎煮3次，每次1 h。结论：该提取工艺客观可行，稳定合理，可为工艺生产提供理论依据。

关键词：多指标成分；正交设计；有机酸；丹参素钠；橙皮苷；桂黄降脂颗粒

中图分类号：R284.2文献标志码：A

文章编号：1007-2349（2013）08-0055-04

桂黄降脂颗粒是泸州医学院附属中医医院院内制剂，批准文号（川药制字Z20080291），主要由山楂、丹参、泽泻、党参、陈皮等7味中药组成。具有益气化痰，活血化瘀的功效，主治脂肪肝、高脂血症。处方中山楂为君药，具有消食化积、活血化瘀的功效，近年来常用于高血压、冠心病及高脂血症，其水溶性成分含有多种有机酸能提高蛋白酶的活性，促进脂肪分解[1]，丹参为臣药，具有扩张冠脉、增加冠脉流量、降低胆固醇、甘油三酯等作用，丹参素为丹参所含专属性成分，是一种水溶性酚酸，以丹参素钠的形式存在于天然药物中，具有抗血小板聚集和解聚的作用[2]。陈皮为佐药，具有理气和胃、消积导滞的功效，橙皮苷为其主要有效成分，是一种二氢黄酮苷类成分，易溶于热水中，具有增强毛细血管韧性，降低胆固醇等作用[1]。鉴于中药成方制剂中药味数多、成分复杂，根据处方中中药所含化学成分及其理化性质，结合处方中的“君、臣、佐、使”的中医药理论，以干浸膏、有机酸、丹参素钠和橙皮苷的含量为综合评分指标，多指标优选桂黄降脂颗粒水提的最佳工艺。

1仪器与材料

SPD-20A高效液相色谱仪（美国科学系统公司）；UltimateTM C18键合硅胶柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；QP-01真空泵；JPCT0328超声仪，NRB17S3W电冰箱（日本松下）；ZK072型电热真空干燥箱（上海实验仪器厂）；JA203H电子天平（常州幸运电子）；橙皮苷（购自中国药品生物制品检定所，批号110721-200912，供含量测定用）；丹参素钠（购自中国药品生物制品检定所，批号110855-200809，供含量测定用）；山楂、丹参、陈皮、等7味中药购于泸州市宝光中药饮片公司，经泸州市药检所中药室袁常珍主任鉴定，均符合2010版《中国药典》项下规定；甲醇为色谱纯，其余试剂为分析纯；纯净水（泸州医学院附属中医医院制剂室）；桂黄降脂颗粒（泸州医学院附属中医医院制剂室）。

2方法与结果

2.1水提工艺优选 山楂、丹参、陈皮等7味中药采用加水煎煮法提取有效成分，以浸泡时间、加水量、煎煮时间、煎煮次数为因素，采用L9（34）正交试验法安排实验，以干浸膏、提取物中主要有效成分有机酸、丹参素钠和橙皮苷的含量为综合评分指标，多指标成分优选最佳工艺条件。按处方中山楂、丹参、陈皮等药材的配比，准确称取9份样品，每份共205 g，按表2中9种工艺条件组合加水煎煮提取，过滤，合并提取液，浓缩成稠浸膏，备用。

表1正交试验因素水平表L9（34）

水平A：浸泡时间/minB：加水量/倍C：煎煮时间/hD：煎煮次数/次13061126081.5239010232.2干浸膏收率的测定取样品稠浸膏，置已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，60 ℃减压干燥至恒重后，精密称定，计算干浸膏收率，结果见表2。

2.3有机酸含量的测定取样品干浸膏约1 g，精密称定，加纯化水100 mL，超声20 min，待干浸膏全部溶解后，过滤，精密量取滤液10 mL，加纯化水至100 mL，加酚酞指示液2滴，用氢氧化钠滴定液（0.1 mol/L）滴定，即得，每1 mL氢氧化钠滴定液（0.1 mol/L）相当于6.404 mg枸橼酸，结果见表2[3]。

2.4丹参素钠含量测定

2.4.1色谱条件 固定相：Inertsil ODS-SPC18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相：甲醇-0.1%冰醋酸（2：98），二元梯度洗脱，流速：1 mL·min-1，温度：40 ℃，波长：280 nm，理论板数按丹参素钠计算应不低于3000[4～5]。见图1、2、3。

2.4.2对照品溶液的制备精密称取的丹参素钠对照品0.0083 g，置25 mL棕色量瓶中，加入甲醇溶解并定容，即得对照品溶液。

2.4.3供试品溶液的制备取样品干浸膏约2 g，精密称定，置105 ℃干燥至恒重的磨口锥形瓶内，加入50%甲醇50 mL，密塞，称定重量，超声40 min，取出，冷却至室温，用50%甲醇补足重量，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。

2.4.4线性范围的考察精密吸取丹参素钠对照品溶液（浓度为0.332 mg·mL-1）2.5，5，10，15，20 μL，按2.4.1项下色谱条件测定，记录峰面积。以对照品量对色谱峰面积进行线性回归，结果丹参素钠的回归方程为Y=106X-649883，r=0.999 5（n=5），线性范围为0.83 ～ 6.64 μg。

2.5橙皮苷含量测定

2.5.1色谱条件固定相：Inertsill ODS-SP C18柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流动相：甲醇-2%的乙酸水溶液（39：61）；检测波长：283 nm；温度：40 ℃；流速：1.0 mL·min-1。在上述色谱条件下，橙皮苷与其他成分得到了很好的分离，理论板数以橙皮苷计不低于2000[6～8]。见图4、5、6。

2.5.2对照品溶液的制备 精密称取橙皮苷对照品8.0 mg，置50 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得对照品贮备液。

2.5.3供试品溶液的制备 取样品干浸膏约0.5 g，精密称定，置105 ℃干燥至恒重的磨口锥形瓶内，加入甲醇50 mL，密塞，称定重量，超声40 min，取出，冷却至室温，用甲醇补足重量，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。

2.5.4线性关系精密吸取橙皮苷对照品溶液（浓度为0.16 mg·mL-1）2.5、5、10、15、20 μL注入液相色谱仪，测定。以峰面积为纵坐标，橙皮苷的进样量为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程：Y=38571X+16309，r=0.9995（n=5）。表明橙皮苷对照品进样量在0.4～3.2μg之间与峰面积线性关系良好。

2.6方法学考察

2.6.1精密度考查取丹参素纳，橙皮苷对照品溶液，分别按照各自液相方法连续进样5次，每次10 μL，测定峰面积，RSD分别为1.32%，0.87%，表明仪器精密度较高。

2.6.2稳定性试验取同一供试品溶液分别于0，1，2，4，8 h各进样1次，每次10 μL，测定峰面积，RSD分别为1.56%，0.94%，表明供试品溶液在8 h内稳定。

2.6.3重复性试验取同一供试品溶液6份，分别按照2.4.1和2.5.1项下色谱条件进行测定，结果RSD为1.06%，1.42%，表明方法重复性良好。

2.6.4加样回收试验称取6份已知含量的供试品溶液，分别精密加入丹参素纳，橙皮苷对照品溶液按2.4.3和2.5.3项方法制备供试品溶液，按照2.4.1和2.5.1项下色谱条件进行测定，计算丹参素钠的平均回收率为97.22%，RSD为1.17%，橙皮苷的平均回收率为98.55%，RSD为0.63%。

2.6结果正交实验安排与结果见表2，结果方差分析见表3。

3讨论

3.1桂黄降脂颗粒主要由山楂、丹参、泽泻、党参、陈皮、蒲黄郁金等7味中药组成。其中山楂、丹参、陈皮所含水溶性成分中的有机酸、丹参素钠、橙皮苷等成分，在临床应用过程中发挥主要的治疗作用，从药效学方面来考虑，需充分提取其有效成分，故本文以多指标研究方法对桂黄降脂颗粒的水提工艺进行探讨。

3.2丹参所含丹参素为其专属性成分，是一种水溶性酚酸，以丹参素钠的形式存在于天然药物中，故本文以测定丹参素钠的含量作为考察指标。

3.3本试验根据各药味的理化性质结合临床疗效，筛选符合工艺的实际的多个指标成分进行实验，并采用全概率公式评分法结合正交设计优化水提工艺，因此较单指标分析额的传统方法更全面、科学、实用。

3.4本试验采用多指标综合评分法优选桂黄降脂颗粒的水提取工艺，确定其最佳工艺为，浸泡30 min，加8倍量水，煎煮3次，每次1 h。同时采用高效液相色谱法测定丹参素钠和橙皮苷含量，分离效果好，操作简便，稳定性好，测定结果为优选桂黄降脂颗粒水提工艺提供参考依据。为桂黄降脂颗粒进一步开发利用提供实验依据。

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（收稿日期：2013-05-02）