注射用复方甘草酸苷细菌内毒素检查方法的研究

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[摘要] 目的:建立注射用复方甘草酸苷细菌内毒素检查法。方法:按《中国药典》2005年版附录Ⅺ E进行实验和结果判断。结果:注射用复方甘草酸苷需稀释240倍后对测定不产生干扰。结论:可建立注射用复方甘草酸苷的细菌内毒素检查方法。

[关键词] 注射用复方甘草酸苷;细菌内毒素;鲎试剂;干扰试验

[中图分类号]R927.2 [文献标识码]A [文章编号]1673-7210(2010)01(a)-062-02

Study on bacterial endotoxin test for Compound Glycyrrhizin for Injection

CHEN Hongying

(Department of Pharmacy Office,Tumor Hospital of Anhui Province, Anhui 230031, China)

[Abstarct] Objective: To establish a bacterial endotoxins determination method for Compound Glycyrrhizin for Injection. Methods: The experiment and the judegment of its result were made according to the appendix ⅪE of Chinese Pharmacopoeia 2005 vol Ⅱ. Results: The injection interfered to the bacterial endotoxins test, but inhibition effect could be eliminated by diluting to 240 times. Conclusion: The bacterial endotoxins test can be used to determinate Compound Glycyrrhizin for Injection.

[Key words] Compound Glycyrrhizin for Injection; Bacterial endotoxin; Lachypleus Amebocyte Lysate; Interference test

复方甘草酸苷注射液是由苷草酸苷、甘氨酸、盐酸半胱氨酸组成的复方制剂,具有免疫调节、抗感染、抑制病毒增殖以及对病毒灭菌等作用,明显改善肝实质病变,临床常用于治疗慢性肝病。本文依据《中国药典》2005年版二部ⅪE“细菌内毒素检查法”对其注射液的细菌内毒素检查进行了探讨。

1 仪器与试药

注射用复方甘草酸苷(批号:050412、050415、050418,规格:复方制剂,每瓶含甘草酸苷40 mg、甘氨酸400 mg、盐酸半胱氨酸20 mg,安徽省新星药物开发有限责任公司)。鲎试剂(批号:04102012,规格:0.25 EU/ml、0.1 ml/支,福州新北生化工业有限公司;批号:0406072,规格:0.25 EU/ml,0.1 ml/支,浙江安度斯生物有限公司),以上鲎试剂灵敏度经复核符合规定。细菌内毒素工作标准品(批号:2003-10,规格:100 EU/支,中国药品生物制品检定所)。细菌内毒素检查用水(批号:030619,规格:5 ml/支,湛江安度斯生物有限公司)。

2 方法和结果

2.1 细菌内毒素限值L的确定

根据细菌内毒素的计算公式:L=K/M,其中L为细菌内毒素的限值,即按规定的给药途径人每公斤体重每小时可接受的内毒素剂量;K为人体静脉注射液的致热域,即K=5 EU/kg,M为每公斤体重每小时最大的药物剂量,为200 mg/60 kg/h(按甘草酸苷计算),L=K/M=1.5 EU/mg,据此将本品的细菌内毒素限值确定为1.5 EU/mg(按甘草酸苷计算)。

2.2 供试品干扰试验预试验

根据供试品内毒素限值(L)为1.5 EU/mg,取本品1瓶,加细菌内毒素检查用水2 ml溶解后,分别用细菌内毒素检查用水稀释成1∶10、1∶60、1∶120、1∶240系列浓度的溶液,将1∶10、1∶60、1∶120、1∶240的系列溶液记为NPC(供试品阴性对照),同时在1∶10、1∶60、1∶120、1∶240的系列溶液中添加等体积细菌内毒素工作标准品制成的溶液记为PPC(供试品阳性对照),每个浓度平行做2支,同时作阳性、阴性对照管,结果见表1。

表 1 供试品干扰性试验预试验结果

Tab.1 The result of preproved interference test of sample

结果表明,注射用复方甘草酸苷对细菌内毒素检查有干扰,需稀释240(即试验中的1∶120)倍以上,方能消除干扰作用。

2.3 供试品干扰性试验

用供试品溶液(1∶240)及细菌内毒素检查用水分别将细菌毒素工作标准品稀释成0.500 λ、0.250 λ、0.125 λ、0.060 λ不同浓度的细菌内毒素溶液,每一浓度平行做4支,另取细菌内毒素检查用水和供试品稀释液各做2支阴性对照管。取两个不同厂家生产的鲎试剂,依法进行供试品干扰试验(《中国药典》2005版二部附录Ⅺ E)。结果见表2-a,2-b。

经用两个厂家生产的鲎试剂进行的干扰性试验,结果Es为0.5～2.0 λ,Et在0.5～2.0 Es,本品按1∶240稀释后对细菌内毒素检查无干扰作用。

2.4 供试品的细菌内毒素检测

取本品,依法检查(中国药典2005版二部附录Ⅺ E),按甘草酸苷计算,每毫克甘草酸苷中含内毒素量应

结果表明,三批样品的细菌内毒素检查符合规定。

3 讨论

经采用两个厂家的鲎试剂,对注射用复方甘草酸苷连续三个批号进行了干扰确证试验,结果表明本品经1∶240稀释后无干扰作用,可进行细菌内毒素检查代替热原检查。根据以上结果,确证注射用复方甘草酸苷的细菌内毒素检查方法如下:取本品,依法检查(《中国药典》2005年版二部附录Ⅺ E),按甘草酸苷计算,每毫克甘草酸苷中含内毒素量应

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(收稿日期:2009-08-04)