平阳霉素制剂的制备技术
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【中图分类号】 RTQ46 【文献标识码】A【文章编号】1672－3783(2011)04－0340－02
【摘要】 目的 制备可稳定释药平阳霉素的长效微球制剂，考察该微球制剂在体内外的释放。方法 运用复乳溶剂挥发法，以聚乳酸羟基乙酸（PLGA）共聚物为囊材，将平阳霉素包封在PLGA微球中，制备可缓释的具有较高包封率的平阳霉素PLGA微球长效制剂。将该微球制剂在体外环境和比格犬体内做药物释放试验。结果 体外释放实验证明该微球制剂可持续释放平阳霉素近28 d，将其肌肉注射到比格犬体内，可稳定缓释平阳霉素近24 d。结论 平阳霉素PLGA微球制剂制备工艺合理，肌肉注射该微球制剂在体内有缓释平阳霉素的作用。
【主题词】平阳霉素 微球 制剂 制备
平阳霉素目前主要应用在治疗老年人易发的恶性肿瘤中且疗效显著。一些良性肿瘤和良性病变，如淋巴管瘤、血管瘤、眼科翼状胬肉、皮肤尖锐湿疣和白癜风、鼻息肉等在应用平阳霉素治疗时均见到令人满意的疗效。平阳霉素的应用由于受限于半衰期短，给药方式局限性大，在中国的临床应用主要围绕在原位给药，使得平阳霉素的抗肿瘤特性没有得到很好的应用。治疗时需连续注射给药给患者增添了麻烦，尤其是老年患者更加难以承受连续注射带来的痛苦。聚乳酸羟基乙酸（PLGA）共聚物是一种药物制剂制备中常用的药用辅料，该材料具有缓释释放降解的性质，目前已被美国FDA批准用于各种药物制剂的制备和作为医用材料。本研究拟运用PLGA包裹平阳霉素制备成PLGA微球制剂，以有效地解决平阳霉素生物半衰期短的问题。
一 材料与方法
1 动物及药品、试剂与仪器 ：岁龄比格犬6只，雌雄各半,体重12.5～14 kg，吉林天药科技有限公司动物中心提供。平阳霉素注射剂（中国哈尔滨博莱制药有限公司），PLGA（美国lakeshore公司），PVA（美国Sigma公司），二氯甲烷（中国天津试剂厂），API4000质谱仪（美国Applied Biosystem公司），KQ300DV台式数控超声仪（上海精密仪器仪表公司）。
2 平阳霉素PLGA微球的制备 ：将经过预处理的平阳霉素水溶液加至溶有PLGA的二氯甲烷溶液的初乳反应器中，运用均质器在初乳反应器中高速搅拌制备油包水的初乳，再将该初乳缓缓注入聚乙烯醇（PVA）水溶液中。在自制的复乳搅拌反应器中, 600 r/min搅拌形成水包油包水的复乳，然后300 r/min搅拌复乳,其间保持反应器内的气体流通，搅拌3.5 h后即得到固化的平阳霉素PLGA微球。将该微球用蒸馏水反复冲洗，去除掉杂质，用冷冻干燥法干燥后得到平阳霉素PLGA微球制剂。
3 平阳霉素PLGA微球包封率及形态学测定 ：精密称取平阳霉素PLGA微球100 mg放入50 ml容量瓶中，加适量乙腈溶液，待微球全部溶解后，用水定容并超声。取上清液用高效液相法测定上清液平阳霉素浓度，折算包封率。将冻干后的平阳霉素PLGA微球进行粒径检测并通过电镜进行形态学观察。
4 平阳霉素PLGA微球体外释放的测定 ：精密称取制备好的平阳霉素微球40 mg，置于含25 ml体外释放液的特制试管中并用封口膜密封，放置到37 ℃的恒温摇床中75 r/min振荡,分别于4 h，1，2，4，6，8，10，12，14，16，18，20，24，28 d取出20 ml上清液，并将上清液离心后取上清液，等待液相检测，同时补充20 ml体外释放液。用高效液相法测定每次时间点取出的上清液中平阳霉素的含量，以此测定28 d的累积释放百分率。将平阳霉素微球按照此体外实验步骤重复操作6次，做平阳霉素微球体外平均的释放曲线。
5 平阳霉素PLGA微球的体内释放 ：将制备好的平阳霉素PLGA微球以臀部肌肉深部注射方式注射到一组比格犬体内，雌雄各半共6只比格犬。在4 h，1，2，4，6，8，10，12，14，16，18，20，24，28 d时采取血样3 ml，检测血中平阳霉素的浓度。做血药浓度释放曲线图，分析平阳霉素PLGA微球体内释放情况。
二 结 果
1 平阳霉素PLGA微球包封率及形态学 ：平阳霉素PLGA微球制剂呈白色粉末状，无塌陷或萎缩现象，球形致密圆整。平阳霉素PLGA微球制剂平均粒径为3.7 μm，其中微球粒径为300 nm～10 μm，该微球制剂包封率可达65%以上。
2 平阳霉素PLGA微球体外释放结果 ：平阳霉素可以在28 d内从微球中完全释放出去，体外释放曲线显示10 d内平均累积释放率超过45%，20 d内的平均累积释放率超过80%。根据平阳霉素普通制剂用药的用法用量，适宜每20 d注射一次，而微球释放的前20 d累积释放率较高，释放了超过总药量的87%，体外释药曲线平稳，适于进行体内释放试验。
3 平阳霉素PLGA微球体内释放结果 ：平阳霉素PLGA微球制剂可在比格犬体内稳定释放。微球制剂中的平阳霉素可以在24 d内从微球中完全释放出去。平阳霉素PLGA微球的体内释放曲线显示10 d内的平均累积释放率超过60%，20 d内的平均累积释放率超过97%，该平阳霉素PLGA微球制剂符合每20 d作为一个疗程并仅注射一次的用药需要。
三 讨论
平阳霉素已在临床应用于治疗唇癌、舌癌、眼癌、鼻咽癌、食管癌、乳腺癌、肝癌、宫颈癌、外阴癌、癌等癌症。平阳霉素可以依靠疏水作用及氢键价键力与肿瘤细胞的双链DNA中5～6个多聚鸟嘌呤胞嘧啶碱基对结合，并使之断链且诱发染色体畸变，影响癌细胞代谢功能, 促进癌细胞变性坏死。平阳霉素的缺点是半衰期短，临床应用时需一次给药4～20 mg，可静脉注射、动脉注射、肌肉注射和瘤内注射，每日给药一次或每隔日给药一次，最少需连续应用20 d以上。平阳霉素是否原位给药，或者说接受平阳霉素的给药部位和靶器官的远近并不能完全决定其是否能大量亲和在肿瘤细胞的DNA上，而肿瘤细胞不断扩增，形成大量的半裸DNA，使血液循环中的平阳霉素进入细胞内后更易接近并切断DNA。所以制备成微球形式的肌肉注射平阳霉素微球制剂并不会比原位给药的药效差。从平阳霉素PLGA微球制剂在比格犬体内的释放测试结果来看，在20 d内平阳霉素持续释放，注射一针次基本可以保证药效持续20 d。平阳霉素微球肌肉注射和瘤内注射的差别仅仅是在局部血药浓度的差别上。瘤内注射或是原位给药时，由于局部血液循环受阻后，可使药物更长时间地滞留于局部组织，但是这种差别也仅仅持续很短的时间。若不运用其他外界方法去协同维持，局部血药浓度无法维持在一个较高水平，而这种短时间不会使应用平阳霉素的治疗较肌肉注射法产生更好的实质性好处，与体外药物释放实验相比体内载药微球的缓释作用更明显，可见血药浓度在体内的维持时间足够长，对肿瘤细胞可以起到足够的杀伤作用。平阳霉素PLGA微球长效制剂较平阳霉素普通制剂具有更好的生物依从性和更长的生物半衰期。该平阳霉素长效肌肉注射制剂的成功研制可为解决短效制剂长期频繁应用提供更多的解决办法。