大黄中游离蒽醌的提取方法探索

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【摘要】目的：探讨从中药大黄中提取主要游离蒽醌的实验方法，寻求简便高效可行的提取工艺。方法：在前人的研究基础上，分别用碱溶―酸沉法；乙醇直接提取法；硫酸水解―乙醇提取法；硫酸―氯仿、乙醚提取法等，来提取大黄中的主要有效成分。结果：汇总以上大黄中提取总蒽醌的方法发现，实验室用硫酸和氯仿（1:5）混合溶液提取两次，共3h,简便高效。结论：硫酸―氯仿提取法在实验室提取中高效可行。

【关键词】大黄；游离蒽醌；提取；探索

大黄为蓼科植物掌叶大黄、药用大黄及唐古特大黄的根茎及根，味苦性寒，是我国常用的中药之一，素有“大将军”的美称[1]。研究表明，大黄的主要药理成分――蒽醌类[2]物质主要有抑菌抗炎、抗病毒，抗氧化、降糖减压、抗肿瘤等作用，所以如何从大黄中高效简便地提取分离蒽醌类物质成为近年来人们的研究热点。李林军[3]等通过提取并经化学方法和波谱学鉴定，确定大黄中的主要蒽醌为大黄酚(chrysophanol)、大黄素(emodin)、大黄酸(rhein)、大黄素甲醚(physcion)、芦荟大黄素(aloe-emodin)等[4~8]。故而近年来无数专家学者将注意力放在高效快速提取大黄游离蒽醌上，提取分离的方法也不断更新，层出不穷。在前人研究的基础上，我们结合自己的想法，对大黄中主要游离蒽醌的提取分离进行进一步实验、探究和汇总，寻求出最优方案。

1 提取实验探索

实验过程中均取同一批大黄粉末100g,用同一型号实验器材，实验过程中尽量避免客观条件的影响。以下就实验所用的方法和在实验中进行的思考、分析进行了如下总结。

1.1 无机溶剂提取法

根据大黄酸的酸性，可以考虑直接用碱溶―酸沉法提取。

1.1.1氢氧化钠提取

称取大黄粉末，加入氢氧化钠溶液300ml，溶液pH=8-9，于70℃水浴中加热2h，纱布过滤得碱液后，继续向药渣中加碱液200ml，70℃水浴加热1h，纱布过滤得碱液。合并两次所得碱液，将碱液用浓盐酸调pH至2左右，有沉淀产生，静置抽滤得沉淀。

1.2 有机溶剂提取

1.2.1 直接醇提法

称取大黄粉末，于1000ml圆底烧瓶中，加入300ml乙醇，置于90℃水浴中加热2h，纱布过滤得乙醇提取液。再向药渣中加入200ml乙醇，于90℃水浴中加热1h，纱布过滤得乙醇液，合并两次滤液。将得到的乙醇提取液置于减压蒸馏装置中，回收乙醇，蒸至适量，转移乙醇液至烧杯，在水浴中挥至无醇味，得乙醇总提物。得到的乙醇总提物用50ml乙醚×4次捏溶浸膏进行萃取，乙醚液用滤纸过滤入500ml分液漏斗。然后5%NaOH 40ml×3次，进行萃取分离，向所得的碱液层中加浓盐酸，调pH至2左右，有沉淀析出，静置后抽滤得游离蒽醌的粗品。

1.2.2 酸水解―醇提取法

大黄中的蒽醌含有酚羟基，在植物体内易于钠、钾、镁等金属离子结合成盐，以盐的形式存在；有的与糖类结合成苷，以苷的形式存在，以这些形式存在的蒽醌占有较大的比例。所以，从大黄中提取大黄酸要先经过酸水解。有研究证明大黄中蒽醌衍生物用20％硫酸在70℃水解3h可全部转化为游离态，50℃水解不完全，60℃大黄酚和芦荟大黄素水解完全，高于70℃到90℃也没发现蒽醌衍生物损失，所以醇提取前先用酸水解。具体方法如下：

称取大黄粉末，加20%的硫酸水溶液，在70℃水浴中水解3h。酸水解后经以下三种处理:（1）倾出酸液后药渣中直接加乙醇；（2）倾出酸液后药渣水洗至中性再加乙醇；（3）倾出酸液后药渣按1.2.1项加入乙醇提取，乙醇提取液加碱调pH至7左右。其它过程按1.2.1项进行操作。

1.2.3 酸水解―乙醚提取法

由于酸水解―醇提法过程繁琐复杂，大黄酸在乙醚中也具有一定的溶解性，所以实验可以直接用乙醚提取，而把乙醇提取一步省略，以简化实验条件，缩短实验所用时间。乙醚与酸水溶液不互溶，可以采用双相水解法，从而避免苷元长时间处于酸性环境中，而导致苷元结构发生改变的可能。具体方法如下：

称取大黄粉末，置于蒸馏烧瓶中，加入300ml酸和乙醚的混合液：20%硫酸：乙醚=1:5，于70℃水浴中回流加热2h，纱布过滤出提取液，再向药渣中加入200ml酸和乙醚的混合液，纱布过滤得滤液，合并两次乙醚提取液。将提取液滤纸过滤入分液漏斗中，使其充分静置分层，除去下层酸液，按方法1.2.1用碱液萃取，得到蒽醌粗品。

1.2.4 酸水解―氯仿提取法

由于醚提法得到的沉淀量太少，大黄中游离蒽醌在氯仿中具有一定的溶解性，所以考虑将乙醚换成氯仿提取。其提取方法与醚提法相同，提取液20%硫酸与氯仿的比例也是1:5，按1.2.3项操作方法提取大黄中蒽醌总量。

2 实验结果及讨论分析

通过薄层分析和高效液相色谱检测证明，以上的实验提取物中主要含有大黄酚、大黄素、大黄酸和大黄素甲醚四种成份。实验所得粗品情况如下：

方法1.1.1得到的沉淀量大，但是绝大部分是鞣质，难以除去，蒽醌含量极少。由于鞣质是存在于植物体内的多元酚类化合物，在水溶液中沉淀析出，用NaOH溶液浸泡的过程中，也将其一并溶解于碱液中，再经酸调pH，又使其析出，与蒽醌类物质混合在一起。在所用的除鞣质的方法中，也会将得到蒽醌一并除去，所以蒽醌类物质与鞣质在一起很难除杂，致使得到的粗品纯度极低。并且在实验过程中，由于鞣质在碱液中溶解，使提取液成粘稠油状，致使过滤极其困难，不适于提取。

醇提法中，硫酸水解后乙醇提取的实验方法1.2.1和乙醇直接提取法1.2.2相比，提取产物会增加。硫酸水解后处理的三种情况比较，水解后洗至中性的效果较好，但是，硫酸水解后洗至中性过程比较困难，且洗后乙醇提取物难以成浸膏，乙醚捏溶过程难以进行，且分离不彻底，使乙醚用量增加，最终游离蒽醌含量却减少。

方法1.2.3与其他方法相比得到的沉淀量太低，并且乙醚的挥发性强，此方法不可取。

方法1.2.4得到的沉淀量最多，并且方法相对比较简单，可用于大黄中蒽醌的提取，有进一步研究的价值。

3 结论

酸水解―氯仿提取的方法较其它几种效果好，提取物多，产率高，相对简便可行。在做了以上诸多工作之后，我们将继续就已有方案结合自己想法进一步进行实验研究，特别是就硫酸和氯仿混合提取所需提取温度，提取时间，提取次数等因素加以具体研究，最终确定出实际可行的详细的硫酸水解―氯仿提取法提取大黄中有效成分的方案。

参考文献

[1]王彤.谈谈我对中药大黄的点滴认识[J]. 中国中医药咨讯，2010，2(8)：150

[2]黄园.正交试验法研究水提与醇提对大黄蒽醌提取率的影响[J].中成药，2003,25（4）:273-277

[3]李军林，王爱芹等.河套大黄的蒽醌类化学成分研究[J].中草药，2000,31（5）:321-325

[4]欧明，林励，李衍文.简明中药成分手册[M].中国医药科技出版社，2003

[5]杨云，张晶，陈玉婷.天然药物化学成分提取手册[M].中国中医药出版社（修订版），2003

[6]欧明，林励，李衍文.简明中药成分手册[M].中国医药科技出版社，2003

[7]袁吕江，李学刚，赵海玲，等. 大黄中蒽醌衍生物水解和提取工艺改进研究[J].中国药学刊，2004，22（10）:1880-1882

作者简介:

李玉贤，女，1963-)，河南中医学院药学院副教授，研究方向：天然产物化学研究