HPLC法测定垂盆草提取物中异鼠李素的含量
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[摘要] 目的：用hplc法测定垂盆草提取物中异鼠李素的含量。方法：采用ODS-C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱，流动相为甲醇-0.4%磷酸（5545）；流速1.0 ml/min；检测波长360nm。结果：异鼠李素浓度在2.82~28.20 μg/ml范围内线性良好，r=0.999 8（n=8），平均回收率为100.18%，RSD为1.73%(n=9)。结论：本法可用于控制垂盆草中有效成分的含量，简便、准确、灵敏度高。
[关键词] 垂盆草；提取物；含量测定；HPLC
[中图分类号]R917[文献标识码]B[文章编号] 1673-7210（2007）12（c）-160-02
Content determination of isorhamnetin in the extract of Sedum sarmentosum Bunge by HPLC
MA Jia-lei, LI Qun-li*, XU Ling-ling
(Medical College of Jinhua Profession and Technology College, Jinhua321007, China)
[Abstract] Objective: To develop a method for the content determination of isorhamnetin in Sedum sarmentosum Bunge. Methods: The samples were analyzed on an ODS-C18 column with mobile phase of methanol-0.4% phosphoric acid (5545) at flow rate 1.0 ml/min and detective wavelength of 360 nm. Results: The standard curves were linear relationship at the range of 2.82~28.20 μg/ml(r=0.999 8).The average recovery was 100.18% (RSD=1.73%). Conclusion: The method can be used to determine the content of isorhamnetin in Sedum sarmentosum Bunge.The method is simple,accurate and suitable for the quality evaluation of Sedum sarmentosum Bunge extract.
[Key words] Sedum sarmentosum Bunge；Extract；Content determination；HPLC
垂盆草系景天科植物垂盆草的新鲜或干燥的全草，味甘、淡、性凉，具有清热解毒、利尿消肿、排脓生肌之效。化学研究表明，垂盆草主要含有糖类、黄酮类[1]、氰苷类成分等[2,3]。药理学研究表明，垂盆草具有抑制炎性渗出，减少肝细胞损伤的作用，能显著降低肝炎患者血清谷丙转氨酶[4~6]，临床广泛用于急性肝炎、迁移性肝炎及慢性肝炎活动期的治疗。目前临床应用的垂盆草制剂（如冲剂、颗粒剂、片剂等）中有效成分含量差别很大[7]。本文经过对其有效成分进行HPLC法含量控制，提高其提取率，从而促进垂盆草制剂的临床应用。
1 仪器与试药
1.1 仪器
Waters 2487高效液相色谱仪，附有2487紫外分光检测器，Breeze色谱工作站，20 μl自动进样阀。
1.2 试剂
磷酸（无锡阳山生化有限责任公司），甲醇（上海诚心化工有限公司），均为GR。
1.3 对照品
异鼠李素对照品（中国药品生物制品检定所，批号110860-200407）。
1.4 样品
垂盆草提取物（自制；批号20060701，20060702，20060703）
2 方法与结果
2.1 色谱条件
Diamonsil C18（150 mm×4.6 mm,5 μm）色谱柱；流动相为甲醇-0.4%磷酸（5545）；流速1.0 ml/min；检测波长360 nm；灵敏度0.1Aufs；进样体积20 μl；理论塔板数以异鼠李素峰计不低于5 382。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取异鼠李素对照品约14.1 mg，置于250 ml的量瓶中，加甲醇溶解，定容至刻度，摇匀，备用，作为储备液。精密吸取储备液6 ml，置于25 ml的量瓶中，用流动相稀释成每1 ml中含13.5 μg异鼠李素的对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备
精密称取0.4 g干浸膏，加入甲醇20 ml和50%盐酸5 ml，加热回流1.5 h，过滤，滤液以0.45 μm的微孔滤膜过滤，用甲醇定容至50 ml，即得。
2.4 测定方法
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，见图1。按外标法计算，即得。
2.5 标准曲线及线性范围
精密量取对照品储备液，用流动相稀释配制成浓度分别为2.82、5.64、11.28、14.10、22.56、28.20 μg/ml的系列标准溶液，分别进样20 μl，测定。以峰面积（Y）对浓度（X）绘制回归曲线，经回归分析，得回归方程： Y=862 034X-245 120，r=0.999 8，其浓度在2.82~28.20 μg/ml范围内线性关系良好。
2.6 稳定性试验
取同一批供试品溶液，分别在0、3、4、6 h进样，测得峰面积的RSD为2.63%，结果表明本品的供试溶液在6 h内稳定。
2.7 精密度试验
对同一供试品溶液进行数次测定，按峰面积计算日内精密度，其RSD为0.99%，表明方法的精密度能满足含量测定要求。
2.8 加样回收率试验
称取0.2 g的浸膏9份，分别加入标准储备液2、4、10 ml，配成高、中、低三个浓度各3份，按照 “2.3 供试品溶液的制备”项下配制成供试液，计算每个浓度的平均加样回收率，分别为101.91%、98.88%、99.76%，RSD分别为1.26%、1.53%、2.39%。三个浓度的总平均回收率为100.18%，RSD=1.73%(n=9)，表明方法回收率良好。见表1。
2.9 重现性试验
取5批样品，按垂盆草有效成分提取方法进行提取，测定酸水解后异鼠李素的含量，结果5批样品的平均含量为0.147 8%，RSD为2.48%。
2.10 样品含量测定
精密吸取供试品溶液20 μl进样测定，结果见表2。
3 讨论
本方法将文献中[8]所用的指标成分由垂盆草苷改为异鼠李素，因前者极不稳定，很难保证方法的重现性和稳定性，且其对照品制备烦琐又无处可购。
本方法可用于控制垂盆草中有效抗肝炎成分的含量，提高有效成分得率和药材的利用率。
[参考文献]
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[6] 薛继艳,魏怀玲,刘耕陶,等. 垂盆草对小鼠和大鼠肝脏脂质过氧化损伤的保护作用[J].中西医结合肝病杂志, 1993, 3(1): 14.
[7]苏志恒,华会明.垂盆草化学成分及药理作用研究进展[J].中药研究与信息, 2005, 7(8): 19-20.
（收稿日期：2007-10-18）
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