酶联免疫吸附法检测乙肝五项结果常见影响因素分析
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【摘要】 目的 分析乙肝五项酶联免疫吸附法检测常见影响因素。方法 对酶联免疫吸附方法检测单乙肝病毒表面抗原阳性和表面抗原抗体同时阳性的标本其S/CO值小于4.0大于1.0的289例标本再用免疫荧光分析的方法检测的两种HBsA。AXSYM免疫荧光分析仪为美国雅培公司产品;HBsAg免疫荧光试剂盒为美国雅培公司产品,HBsAgELISA试剂盒为上海荣盛生物技术有限公司产品,按常规方法检测。HBV-DNA定量以1.00×10.3 copies/mL为判定阳性的标准,1.00×10.3 copies/mL判为阳性。结果 采用ELISA法HBsAg阳性234例(80.96%),HBsAg和HBsAb同时阳性55例(19.03%),S/CO阳性平均值3.78,阳性率100%;免疫荧光分析法HBsAg阳性202例(69.89%),HBsAg和HBsAb同时阳性34例(11.76%),S/CO阳性平均值14.98,阳性率81.66%。结论 乙肝五项是乙型肝炎治疗依据的重要指标,严格按照操作步骤进行操作,做好室内质控、室间评价是保证检测质量,杜绝假阳、假阴性结果的重要手段。
【关键词】 乙肝五项;酶联免疫吸附法;乙型肝炎
ELISA试验以灵敏度较高,特异性较好的特点在临床广泛应用。但操作中的每个环节对试验的检测结果影响较大,如不按常规操作,有时会出现假阳性和假阴性的情况。我们根据多年在检验室的工作经验,总结以下可能会影响乙肝五项ELISA检测结果的因素。
1 资料与方法
1.1 临床资料 289例标本均是我院门诊和住院患者检测乙肝五项的标本,其中男156例,女133例,年龄18~72岁,平均42.5岁。最小年龄为1岁,最大年龄为83岁。
1.2 方法 对酶联免疫吸附方法检测单乙肝病毒表面抗原阳性和表面抗原抗体同时阳性的标本其S/CO值小于4.0大于1.0的289例标本再用免疫荧光分析的方法检测的两种HBsA。AXSYM免疫荧光分析仪为美国雅培公司产品;HBsAg免疫荧光试剂盒为美国雅培公司产品,HBsAgELISA试剂盒为上海荣盛生物技术有限公司产品,按常规方法检测。HBV-DNA定量以1.00×10.3 copies/mL为判定阳性的标准,1.00×10.3 copies/mL判为阳性。
2 结果
采用ELISA法HBsAg阳性234例(80.96%),HBsAg和HBsAb同时阳性55例(19.03%),S/CO阳性平均值3.78,阳性率100%;免疫荧光分析法HBsAg阳性202例(69.89%),HBsAg和HBsAb同时阳性34例(11.76%),S/CO阳性平均值14.98,阳性率81.66%。
3 讨论
乙肝病毒表面抗原(HBsAg)为乙肝病毒感染的最主要的病原标志和直接证据之一。酶联免疫吸附试验(EusA)是临床进行乙型肝炎病毒(HBV)诊断的主要方法之一,因其试验灵敏度高,特异性好的特点在临床上得到了广泛的应用。但操作中的各个环节对试验的检测结果影响较大,如标本留取与处理、加样、孵育、洗板、显色、终止、比色及结果判读,如不注意可能导致假阳性或假阴性的结果[1]。在实际操作中严格按照操作步骤进行操作,设立阴阳对照及临界值测定,同时做好室内质控、室间评价,以严谨的工作作风检测每一份标本,对有疑义的检验结果要复查,才能保证检测质量,杜绝假阳、假阴性结果。
在日常检验作中,有时为了尽快出检测结果,常在血液刚刚凝固时就强行离心分离血清,在ELISA测定过程中残留的纤维蛋白原易造成假阳性结果。因不同静置时间离心的血清中含有不等量的过氧化物酶的细胞成分及纤维蛋白原,这些成分可粘附于酶标反应孔中,成为非特异性吸附酶标记物而致假阳性。血液采集后应该使其充分凝固后再离心分离血清检测[2]。
为避免ELISA法的质量问题,降低结果的假阳性率,获得较为准确的试验结果,可采取下列措施[3]:①使用抗凝血标本,便于标本的离心分离;②标本过夜之后检测或让标本加热处理,让血块更好的收缩,使标本中的非特异性活性物质部分或全部失活,降低非特异性反映所致的假阳性结果;③检测之前加大离心转数,延长离心时间,使红细胞和纤维蛋白充分沉淀,使标本的离心分离更加彻底;④加样时不能加入红细胞和纤维,避免这两种干扰物质对试验结果的影响。
总之,乙肝五项是乙型肝炎治疗依据的重要指标,我们检验工作者要本着严谨负责的态度,尽量使检测结果能反映出体内的真实实际,更好的为临床治疗服务。
参 考 文 献
[1] 龙聪.酶联免疫吸附法测乙肝两对半的注意事项.基层医学论坛,2008,12(7):245.
[2] 彭俊云.酶联免疫吸咐试验(ELISA)常见问题的原因分析与处理,2008,5(15):118-120.
[3] 姜东,付莲花,周哲明,等.用ELISA法检测乙肝两对半的试验中的一点体会.中国医药指南,2008,6(23):318-319.